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miR-511-3p靶向ATP2A2调控内质网应激对肺癌细胞增殖和凋亡的影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨miRNA-511-3p(miR-511-3p)对肺癌细胞增殖和凋亡的影响,及ATP2A2、内质网应激在其中的可能作用。方法:回顾性收集2020年1月至2022年3月惠州市中心人民医院69例肺癌患者的肺癌组织和癌旁正常组织(距离肿瘤>2 cm)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测癌和癌旁组织以及永生化肺上皮细胞株BEAS-2B、人肺细胞株CCD-19Lu、人肺癌细胞株A549、H1975、H1299中miR-511-3p转录水平相对表达量。选择miR-511-3p相对表达水平最低的肺癌细胞株A549进行后续实验。将细胞分为miR对照组(转染miR-511-3p无关序列)、miR-511-3p过表达组(转染miR-511-3p模拟物)、miR-511-3p敲低组(转染miR-511-3p抑制物);另取A549细胞分为ATP2A2过表达对照组(转染空载质粒)、ATP2A2过表达组(转染ATP2A2过表达质粒),以及ATP2A2敲低对照组(转染载有小干扰RNA无关序列的质粒)和ATP2A2敲低组(转染载有ATP2A2小干扰RNA序列的质粒)。采用qRT-PCR法检测各组A549细胞miR-511-3p和ATP2A2转录水平相对表达量;蛋白质印迹法检测各组A549细胞ATP2A2蛋白及内质网应激标志蛋白的相对表达量;双荧光素酶报告基因实验验证miR-511-3p与ATP2A2 mRNA的靶向关系;CCK-8法检测各组A549细胞增殖能力(以吸光度值表示);流式细胞术检测各组A549细胞中凋亡细胞占比;无机磷比色法检测各组A549细胞Ca 2+-ATP酶活性;荧光探针法检测各组A549细胞Ca 2+浓度。 结果:69例患者肺癌组织和癌旁组织miR-511-3p转录水平相对表达量分别为0.08±0.03、0.17±0.12,差异有统计学意义( t=6.04, P<0.05)。miR-511-3p过表达组、miR-511-3p敲低组、miR对照组A549细胞中凋亡细胞占比分别为(58.1±6.1)%、(11.0±1.3)%、(22.0±2.1)%,miR-511-3p过表达组较miR对照组高,miR-511-3p敲低组较对照组低,差异均有统计学意义( t值分别为9.70、7.64,均 P<0.05)。培养24、48、72 h后,miR-511-3p过表达组A549细胞增殖能力均较miR对照组低,miR-511-3p敲低组均较miR对照组高,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。ATP2A2敲低组、ATP2A2敲低对照组A549细胞中凋亡细胞占比分别为(58.2±1.5)%、(23.8±1.0)%,差异有统计学意义( t=33.94, P<0.05);ATP2A2过表达组、ATP2A2过表达对照组A549细胞中凋亡细胞占比分别为(13.8±2.0)%、(23.8±1.0)%,差异有统计学意义( t=7.96,均 P<0.05)。miR-511-3p过表达组、miR-511-3p敲低组、miR对照组A549细胞ATP2A2转录水平相对表达量分别为0.11±0.01、1.34±0.19、0.51±0.12,miR-511-3p过表达组较miR对照组低,miR-511-3p敲低组较对照组高,差异均有统计学意义( t值分别为5.76、6.40,均 P<0.05);miR-511-3p过表达组A549细胞ATP2A2蛋白相对表达量较其对照组低,miR-511-3p敲低组较其对照组高,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验验证miR-511-3p与ATP2A2 mRNA存在靶向关系。对照组、miR-511-3p过表达组、ATP2A2过表达组、miR-511-3p过表达+ATP2A2过表达组A549细胞中凋亡细胞占比分别为(21.5±3.0)%、(58.1±5.0)%、(13.3±1.2)%、(20.5±4.0)%,差异有统计学意义( F=73.28, P<0.001);对照组、miR-511-3p敲低组、ATP2A2敲低组、miR-511-3p敲低+ATP2A2敲低组A549细胞中凋亡细胞占比分别为(23.5±3.0)%、(11.3±1.2)%、(60.1±7.0)%、(25.6±5.0)%,差异有统计学意义( F=78.45, P<0.001)。ATP2A2过表达组A549细胞Ca 2+-ATP酶活性高于对照组,ATP2A2敲低组低于对照组,差异均有统计学意义( t值分别为4.61、6.07,均 P<0.05);ATP2A2过表达组A549细胞内Ca 2+浓度低于对照组,ATP2A2敲低组高于对照组,差异均有统计学意义( t值分别为3.30、3.95,均 P< 0.05)。miR-511-3p过表达组A549细胞Ca 2+-ATP酶活性低于miR对照组,miR-511-3p敲低组高于miR对照组,差异均有统计学意义( t值分别为6.54、4.16,均 P<0.05);miR-511-3p过表达组A549细胞内Ca 2+浓度高于miR对照组,miR-511-3p敲低组低于miR对照组,差异均有统计学意义( t值分别为3.60、6.23,均 P<0.05)。敲低ATP2A2或过表达miR-511-3p的A549细胞内质网应激标志GRP78、PERK、p-eIF2a、ATF4、CHOP蛋白相对表达量均较相应对照组高,差异均有统计学意义(均 P<0.05);过表达ATP2A2或敲低miR-511-3p的A549细胞各蛋白相对表达量均较相应对照组低,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:miR-511-3p水平变化可能影响肺癌细胞的增殖和凋亡,机制可能是其靶向ATP2A2进而调控内质网应激而影响肺癌细胞凋亡。
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编辑人员丨6天前
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雌二醇调节大鼠内耳质膜钙ATP酶异构体2表达的研究
编辑人员丨6天前
目的:观察大鼠血清雌二醇水平变化是否会影响内耳质膜钙ATP酶异构体2(plasma membrane Ca 2+-ATPase isoform 2,PMCA2)的表达,探讨雌二醇对耳石调节蛋白的影响。 方法:25只三月龄雌性Sprague-Dawley大鼠应用随机数字表法分成5组,每组5只,其中4组行卵巢切除术(ovariectomized,OVX),1组行假手术。造模1月后OVX各组分别补充雌二醇(E2组)、孕酮(P组)、雌二醇和孕酮(E2+P组)、溶剂芝麻油(Veh组),假手术组(Sham组)补充溶剂芝麻油。补充1个月后断头处死各组大鼠,取出双侧听泡。酶联免疫吸附(ELISA)方法检测各组大鼠术前、给药前、处死前血清雌二醇、孕酮水平变化;蛋白印迹杂交(Western Blot)、实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测各组大鼠内耳总PMCA2蛋白和mRNA的表达水平。采用SPSS 25.0软件进行统计学分析。结果:术前5组大鼠血清雌二醇、孕酮水平差异均无统计学意义( P值均>0.05);给药前各OVX手术组大鼠血清雌二醇、孕酮水平均较Sham组显著降低,差异有统计学意义( P值均<0.05);处死前E2组、E2+P组大鼠血清雌二醇水平与Sham组相比差异无统计学意义( P值均>0.05),而P组、Veh组与Sham组相比差异有统计学意义( P值均<0.05),P组、E2+P组与Sham组相比血清孕酮水平升高( P值均<0.05),而Veh组、E2组与Sham组相比孕酮水平显著下降( P值均<0.05)。与Sham组相比,P组、Veh组大鼠听泡总PMCA2蛋白和mRNA相对表达量均明显下降( P值均<0.05),而E2组 、E2+P组的相对表达量无明显变化,差异无统计学意义( P值均>0.05)。 结论:血清雌二醇水平下降可引起大鼠耳石调节蛋白PMCA2表达下降,进而影响耳石代谢,这可能是雌激素影响耳石代谢的一个重要环节。
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编辑人员丨6天前
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烟酰胺核糖对脂毒性心肌病的影响及机制探讨
编辑人员丨6天前
目的:探讨烟酰胺核糖对肥胖相关脂毒性心肌病的影响及其具体机制。方法:将C57BL/6N雄性小鼠(8周龄)分为标准饮食组(对照组)、高脂饮食组和高脂+烟酰胺核糖饮食组( n=10),高脂饮食组通过高脂饲料喂养24周构建肥胖小鼠脂毒性心肌病模型,高脂+烟酰胺核糖饮食组小鼠在高脂饲料的基础上在饮用水中加入40 mmol/L烟酰胺核糖喂养12周。造模结束后检测小鼠尾动脉血压,收集小鼠外周血分析血糖、血脂等指标,应用超声心动图评估小鼠心功能,随后进行小鼠心脏取材并用于病理学和分子生物学分析。分别通过心脏大体拍照检测小鼠心重与胫骨长、麦胚凝集素(WGA)定量小鼠心肌细胞面积和苦味酸-天狼猩红(PSR)染色显示小鼠心肌纤维化水平评估烟酰胺核糖对小鼠心肌重构的影响。采用透射电镜检测小鼠心肌脂滴浸润情况;采用免疫印迹检测小鼠心肌细胞Sirt1及Serca2a蛋白表达水平。 结果:与对照组比较,高脂饮食小鼠的体质量、收缩压、舒张压、总胆固醇、三酰甘油和LDL-c水平均明显增高(均 P<0.05),应用烟酰胺核糖后可缓解高脂所致的上述指标的增高(均 P<0.05);高脂饮食和应用烟酰胺核糖均不影响小鼠心率和血糖。与对照组比较,高脂饮食组小鼠左心室射血分数和心脏超声E峰、A峰比值(E/A)降低(均 P<0.05),烟酰胺核糖则增高左心室射血分数和E/A比值(均 P<0.05)。与对照组比较,高脂饮食组小鼠心重与胫骨长比值、左心室心肌细胞横截面积、胶原含量均增加(均 P<0.05),烟酰胺核糖则可抑制小鼠心肌的上述肥大和纤维化表现(均 P<0.05)。与对照组比较,高脂饮食导致小鼠左心室心肌脂滴沉积明显增多[(13.8±0.86)/100 μm 2比(4.7±0.51)/100 μm 2, P<0.05],而烟酰胺核糖可减轻高脂诱导的心肌纤维化[(6.2±0.77)/100 μm 2比(13.8±0.86)/100 μm 2, P=0.021]。免疫印迹显示脂毒性心肌组织中Sirt1及心肌肌浆网Ca 2+-ATP酶(Serca2a)蛋白表达水平均较对照组降低(均 P<0.05),Serca2a的乙酰化水平增高(均 P<0.05),但烟酰胺核糖可增加Sirt1及Serca2a的表达并促进Serca2a的去乙酰化(均 P<0.05)。 结论:烟酰胺核糖通过刺激Sirt1介导的Serca2a去乙酰化缓解高脂所致的脂毒性心肌病。
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编辑人员丨6天前
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吴茱萸次碱对大鼠左室肥厚钙调节因素的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察吴茱萸次碱(Rut)治疗给药对大鼠左室肥厚的作用及其对钠钾ATP酶、钙ATP酶和钙调磷酸酶(CaN)等细胞内钙调节因素的影响.方法 采用腹主动脉缩窄法建立大鼠左室心肌肥厚模型.实验随机分为假手术组,模型组,Rut低、高剂量(5、20 mg·kg-1·d-1)组和阳性对照(缬沙坦10mg· kg-1· d-1)组.于术后第4周开始灌胃给药,持续8周.每周监测大鼠血压及体重;给药8周后取材,计算左室和室间隔重量(LVS)-体重(BW)比、LVS-右室重量(RV)比,HE染色观察大鼠心肌形态学改变;生物酶学方法检测心肌钠钾ATP酶、钙ATP酶和CaN活性.结果 与假手术组比较,模型组大鼠的血压、LVS-BW比、LVS-RV比均显著增高(P<0.05),左室心肌组织受损,钠钾ATP酶、钙ATP酶活性显著降低(P<0.05),CaN活性升高(均P< 0.05).与模型组相比,Rut高剂量组模型大鼠血压明显降低(P<0.05),心肌肥厚改善,钠钾ATP酶、钙ATP酶活性显著升高(P<0.05),CaN活性显著降低(均P< 0.05),与阳性对照组相似.结论Rut治疗给药对压力负荷型心肌肥厚有改善作用,其机制可能与增加心肌钠钾ATP酶和钙ATP酶活性,抑制CaN活性,最终调节细胞内Ca2+相关.
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编辑人员丨2023/8/6
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SERCA3在结直肠癌细胞中异常表达及其临床意义
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨结直肠癌中肌浆网/内质网钙离子转运ATP酶3(sarcoendoplasmic reticulum Ca2+ transporting ATPase 3.SERCA3) mRNA的表达与临床病理特征的关系.方法 收集40例病理确诊的结直肠癌腺癌组织及其癌旁正常组织标本.采用实时RT-PCR检测SERCA3 mRNA表达,分析其与患者临床病理特征的关系.结果 结直肠癌标本中SERCA3 mRNA表达较癌旁正常组织低(P<0.05).结直肠癌SERCA3 mRNA水平在淋巴结转移和TNM分期方面比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05).结论 结直肠癌组织中SERCA3的异常表达与结直肠癌淋巴结转移和TNM分期密切相关.
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编辑人员丨2023/8/6
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家族性良性慢性天疱疮一家系及ATP2C1基因突变分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 报道家族性良性慢性天疱疮一家系,并对ATP2C1基因突变进行分析.方法 收集家族性良性慢性天疱疮家系成员的一般资料,进行临床调查,绘制家系图谱.采用PCR及Sanger直接测序法对该家系中4例患者的ATP2C1基因进行检测,并以该家系3例健康者和100例无亲缘关系的正常人作为对照.结果 4例家族性良性慢性天疱疮患者ATP2C1基因的第21号外显子的第472位核苷酸由G变为A,该突变导致原先158位的天冬氨酸变为天冬酰胺(p.Asp158Asn)的错义突变.而家系中健康对照及无亲缘关系的正常人均未发现该突变.结论 ATP2C1基因的第21号外显子的第472位核苷酸由G变为A是ATP2C1基因新的突变位点,可能是家族性良性慢性天疱疮家系发病的主要原因.
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编辑人员丨2023/8/6
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基于钙超载探讨自主神经调控对HFpEF大鼠心肌结构重塑、电重塑及纤维化的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的 探究自主神经调控对大鼠射血分数保留心力衰竭(HFpEF)模型结构重塑、电重塑及纤维化的影响.方法 SPF级12周龄SD大鼠44只,抽取10只作为对照组,余34只用于建立HFpEF模型.通过腹主动脉-下腔静脉瘘结扎的方式构建HFpEF模型.其中30只建模成功,4只死亡.建模成功的大鼠分为模型组、自主神经调控组(调控组)及自主神经调控+乙酰胆碱M2受体拮抗剂组(调控+拮抗组),每组10只.调控组在模型组基础上经皮耳缘迷走神经刺激.调控+拮抗组在调控组基础上每天经尾静脉注射美索曲明(0.5 mg/kg).通过心脏超声仪测量心脏舒张末期左心室后壁厚度(LVPWD-D)、舒张末期室间隔厚度(IVS-D)及二尖瓣舒张早期/舒张晚期血流速度最大峰值(E/A).心脏电生理刺激仪获取心脏的有效不应期(ERP)、单向动作电位时程(MAPD).酶联免疫吸附试验(ELISA)检测B型尿钠肽前体(NT-proBNP)水平.HE染色观察心肌细胞排列及炎性细胞浸润情况.Masson染色观察心肌纤维化程度.RT-PCR和Western blot检测心肌组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)及其调节蛋白受磷蛋白(PLB)mRNA及蛋白的表达.结果 HE染色可见模型组心肌细胞排列紊乱,细胞间隙不够明显,伴有炎性细胞浸润.Masson染色可见模型组心肌纤维排列紊乱,大量胶原纤维生成.调控组上述病理改变与模型组比较均明显减轻,而调控+拮抗组与模型组相比无明显改善.与对照组比较,模型组NT-proBNP、LVPWD-D、IVS-D、ERP、MAPD、MMP-9 mRNA及蛋白、PLB mRNA及蛋白表达均升高,E/A、TIMP-1 mRNA及蛋白、SERCA2a mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05).与模型组比较,调控组NT-proBNP、LVPWD-D、IVS-D、ERP、MAPD、MMP-9 mRNA及蛋白、PLB mRNA及蛋白表达均降低,E/A、TIMP-1 mRNA及蛋白、SERCA2a mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05).而调控+拮抗剂组上述指标与模型组比较差异无统计学意义.结论 自主神经调控可能通过钙超载途径减轻HFpEF大鼠的结构重塑、电重塑以及心肌纤维化状态,改善HFpEF预后.
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编辑人员丨2023/8/5
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肌浆网钙离子三磷酸腺苷酶的翻译后修饰在射血分数保留的心力衰竭中的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)是危害人们生活质量的心血管疾病之一,占心力衰竭患者的一半,其发生发展与性别、年龄、慢性肾病、糖尿病、高血压以及肥胖等联系紧密[1-4].HFpEF的关键特点是左心室舒张功能受损,包含主动舒张延长和被动充盈受限.心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)由跨膜螺旋蛋白(M1~10)、核苷酸结合结构域、磷酸化结构域、致动器结构域和管腔环组成,通过调控舒张期细胞质内的Ca2+浓度,进而在心室舒张功能中扮演着重要作用.翻译后修饰影响SERCA2a的功能和活性.本综述总结了 SERCA2a的翻译后修饰在心室舒张功能中的病理生理功能,以及其调控机制和潜在的靶点药物.
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编辑人员丨2023/8/5
