目的:建立以硝苯地平为替代对照品同时测定银杏叶片中槲皮素、山柰素和异鼠李素含量的方法。方法:以硝苯地平为替代对照品，采用HPLC法，色谱柱为JADE-PAK十八烷基硅烷键合硅胶柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为0.5%磷酸溶液(用三乙胺调节pH2.2)-甲醇(50∶50)，硝苯地平检测波长为236 nm，槲皮素、山柰素和异鼠李素检测波长360 nm，柱温35 ℃，通过测定硝苯地平与槲皮素、山柰素和异鼠李素的相对校正因子，采用内标法，并利用相对校正因子计算银杏叶片中槲皮素、山柰素和异鼠李素含量。结果:硝苯地平、槲皮素、山柰素和异鼠李素进样量分别在0.12~1.16 μg、0.07~0.73 μg、0.06~0.56 μg、0.03~0.27 μg范围内与其峰面积线性关系良好；硝苯地平与槲皮素、山柰素和异鼠李素之间的相对校正因子分别为0.782 2、0.768 5、0.808 8；槲皮素、山柰素和异鼠李素平均回收率分别为98.48%、98.03%和94.55%。结论:用硝苯地平作为替代对照品，对银杏叶片中槲皮素、山柰素和异鼠李素含量进行测定和质量控制具有经济性、可行性和实用性。

基于高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MSE)和分子对接表征银杏叶提取物(GBE)的苦味呈味物质,并探究其与苦味功效的关系.首先采用UPLC-Q-TOF-MSE对GBE成分进行定性分析,鉴定出61个化学成分,将这些化学成分与苦味受体进行分子对接,筛选出26个呈苦物质,主要为黄酮类成分;采用感官和电子舌苦味评价技术验证GBE总黄酮是主要的呈苦物质,与分子对接结果一致;最后以呈苦物质为研究对象,进行网络药理学预测与分析,并探究了呈苦物质作用靶点与苦味功效的关系,结果表明呈苦物质作用的关键靶点为CYP2B6、ALOX15和PTGS2等,并且呈苦物质可能通过作用于相关疾病靶点而发挥苦味功效,即GBE呈苦物质是苦味功效的物质基础.综上,该研究表明分子对接技术对中药呈苦物质的筛选具有指导作用,GBE的呈苦物质具有苦味功效,为今后中药的"味-效"关系研究提供思路与参考.

目的 优选银杏叶最佳传统水提工艺和纯化工艺.方法 以总银杏酸转移率、总黄酮醇苷转移率和出膏率为考察指标,采用层次分析法(AHP)-熵权法确定权重系数,在单因素试验的基础上,采用正交试验优选出银杏叶的最佳水提和纯化工艺.结果 最佳水提工艺为:银杏叶饮片装量比为 1/2,加 8 倍水,提取 2 次,每次 30 min;最佳纯化工艺为:水提药液减压浓缩至相对密度 1.08,4℃静置 48 h,静置后的上层药液 2 029×g离心 5 min.结论 该方法稳定可行,能最大程度地去除有害成分总银杏酸,保留有效成分总黄酮醇苷.

目的 探究银杏总黄酮通过细胞外调节蛋白激(ERK)/核因子(NF)-κB信号通路对兔蛛网膜下腔出血(SAH)后血管痉挛的影响.方法 雄性家兔随机分为假手术组、模型组、银杏总黄酮(156 mg/kg)组、3,4,5,4'-四甲氧基二苯乙烯(DMU-212,ERK激活剂,18 mg/kg)组、银杏总黄酮(156 mg/kg)+DMU-212(18 mg/kg)组,每组6只,模型组和用药组兔建立SAH模型.分组处理后,检测各组神经功能并进行评分;尼氏染色检测各组大脑海马神经元形态变化;苏木素-伊红(HE)染色检测各组大脑基底动脉痉挛情况,比较各组管壁厚度及管腔横截面积;测定各组基底动脉血流速度和脑组织氧化应激因子[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)-Px、丙二醛(MDA)];Western印迹法检测各组脑组织ERK/NF-κB通路相关蛋白p-ERK/ERK、核内NF-κB p65蛋白表达水平.结论 与假手术组相比,模型组大脑海马神经元出现明显损伤,基底动脉表现出严重的痉挛现象,管壁厚度、神经功能评分、血流速度、MDA水平、p-ERK/ERK、核内NF-κB p65表达明显升高,管腔横截面积、SOD和GSH-Px水平明显降低(P＜0.05).与模型组、银杏总黄酮+DMU-212组相比,银杏总黄酮组大脑海马神经元损伤和基底动脉痉挛明显减轻,管壁厚度、神经功能评分、血流速度、MDA水平、p-ERK/ERK、核内NF-κB p65表达明显降低,管腔横截面积、SOD和GSH-Px水平明显升高(P＜0.05);DMU-212组大脑海马神经元损伤和基底动脉痉挛明显加重,管壁厚度、神经功能评分、血流速度、MDA水平、p-ERK/ERK、核内NF-κB p65表达明显升高,管腔横截面积、SOD和GSH-Px水平明显降低(P＜0.05).结论 银杏总黄酮通过抑制ERK/NF-κB信号通路激活,降低氧化应激水平,减轻海马神经元损伤,进而改善兔SAH后血管痉挛症状,保护神经功能.

目的 探讨银杏总黄酮对血管性痴呆大鼠神经元损伤的影响及作用机制.方法 双侧颈总动脉永久性结扎法建立血管性痴呆大鼠模型,随机分为模型组,50、100、200 mg/kg银杏总黄酮组,每组12只;另取12只大鼠为假手术组.各银杏总黄酮组灌胃给予相应剂量的银杏总黄酮,连续21 d.穿梭箱实验评价大鼠学习记忆能力,记录步入潜伏期、暗室中花费的总时间.酶联免疫吸附试验测定脑组织乙酰胆碱、5-羟色胺浓度和血清白细胞介素(IL)-1β、IL-17、IL-6浓度.Western印迹检测海马组织中自噬相关蛋白和PTEN诱导假定激酶(PINK)1/兔抗人帕金蛋白(Parkin)信号通路蛋白表达.结果 模型组步入潜伏期明显低于假手术组,暗室中花费的总时间明显长于假手术组(P＜0.01);与模型组相比,不同浓度银杏总黄酮组步入潜伏期明显升高,暗室中花费总时间明显降低(P＜0.05),随着银杏总黄酮浓度的增加上述改变逐渐明显.模型组脑组织乙酰胆碱、5-羟色胺水平明显低于假手术组(P＜0.01),不同浓度银杏总黄酮组明显高于模型组(P＜0.01),随着银杏总黄酮浓度的增加脑组织乙酰胆碱、5-羟色胺水平明显升高.模型组血清IL-1β、IL-17、IL-6水平明显高于假手术组(P＜0.01),不同浓度银杏总黄酮组明显低于模型组(P＜0.01),随着银杏总黄酮浓度的增加血清IL-1β、IL-17、IL-6水平明显降低.模型组海马组织自噬相关蛋白Beclin1、鼠抗人微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ表达水平与假手术组相比升高,但差异无统计学意义(P＞0.05);不同浓度银杏总黄酮组海马组织自噬相关蛋白表达水平明显高于模型组和假手术组(P＜0.05);随着银杏总黄酮浓度的增加自噬相关蛋白表达水平明显提升.模型组海马组织PINK1蛋白、Parkin蛋白与假手术组相比升高,但差异无统计学意义(P＞0.05);不同浓度银杏总黄酮组海马组织PINK1、Parkin蛋白表达水平明显高于模型组和假手术组(P＜0.05);随着银杏总黄酮浓度的增加,PINK1、Parkin蛋白表达水平明显提升.结论 银杏总黄酮可激活PINK1/Parkin信号通路,降低血管性痴呆大鼠炎性因子水平,减轻神经元炎症损伤;此外还能够增强神经元自噬作用,减轻神经元损伤,改善痴呆症状.

肺纤维化是一种慢性、进行性、不可逆的间质性肺疾病,目前尚无治疗肺纤维化的特效药.许多中药单体表现出对肺纤维化具有潜在的治疗价值,其中以黄酮类化合物为主要代表.黄芪总黄酮、灯盏花乙素等可通过干预转化生长因子-β/果蝇MAD蛋白信号通路减轻炎症细胞浸润,减轻肺损伤和细胞外基质(ECM)沉积;镰形棘豆总黄酮、红景天苷可通过介导JAK/信号转导及转录激活因子信号通路抑制肺组织炎症反应,阻止上皮间质转化(EMT)进程;槲皮素、银杏叶提取物等可通过抑制核因子κB信号通路来减少巨噬细胞凋亡,发挥抗肺纤维化作用;漆黄素、原花青素可通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路,促使肌成纤维细胞形态学恢复,减少ECM沉积;柚皮素、木犀草素可通过NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3信号通路抑制巨噬细胞焦亡和炎症反应,改善肺功能及肺组织损伤;余甘子醇提物、毛蕊异黄酮可通过激活核转录因子红系2相关因子2/抗氧化响应元件信号通路,改善肺组织炎症损伤和纤维化;异甘草素则可通过抑制胞外信号调节激酶信号通路阻止上皮细胞表型转化,逆转EMT进展.后续学者可考虑开发适当的药物载体,提高其生物利用度,深入研究药物的作用靶点和途径,为黄酮类中药单体走向临床实践提供依据.

目的 优化树脂柱色谱法脱除银杏叶提取物中总银杏酸的最佳工艺.方法 通过单因素和响应面法实验,以体积流量、洗脱剂乙醇体积分数、洗脱液接收体积为考察因素,以银杏叶提取物中总银杏酸去除率、总黄酮转移率和提取物收率的综合评分为指标,优化树脂柱色谱法脱除总银杏酸最佳工艺.结果 最佳工艺参数为体积流量 1.2 BV/h,洗脱剂乙醇体积分数 70%,洗脱液接收体积 3 BV.结论 本工艺稳定、可行、重复性好,可作为银杏叶提取物树脂柱色谱脱酸工艺.

目的 混合过程是滴丸制备过程中的关键工艺,为保证药物均匀分散在熔融基质中,提出一种基于近红外光谱(near-infrared spectroscopy,NIRS)技术的混合过程监测方法.方法 以银杏叶滴丸(Ginkgo Folium Dripping Pills,GFDP)料液的混合过程为研究对象,基于近红外光谱技术并结合化学计量学手段,开发了一种适用于GFDP料液混合过程的在线监测方法.通过移动块标准偏差法来评价熔融物料的混合均匀度,并对混合终点进行判断.结果 在波长900～1650 nm,采集的光谱最大偏差值为0.013 81,最大标准偏差值为0.005 54,所建立的监测方法具有较好的重复性和稳健性,不同取样点的总黄酮苷含量RSD小于5％,验证了终点判断的可靠性.结论 为熔融物料混合过程监测及终点判断提供了思路,提高了滴丸制备过程关键环节的监控能力.

目的 采用综合评分法优化银杏叶罐组逆流提取工艺.方法 以银杏叶浸出物中干浸膏、总黄酮醇苷及萜类内酯得率的计权指数值为指标,通过正交试验设计,利用综合评分法和方差分析及回归分析,优化银杏叶逆流提取的工艺参数.结果 最佳提取工艺为:银杏叶粉碎成粗粉,每罐加入9.7倍量72％乙醇溶液,逆流提取4次,每次67min.结论 综合评分法综合考虑了各指标对药效和后续工艺的影响,克服了单指标优化的缺陷,优化得到的工艺有效成分提取率高,杂质少,溶剂、能耗低,工艺稳定.

目的 探讨山楂叶总黄酮(TFHL)对慢性脑缺血大鼠脑组织p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响.方法 健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、TFHL组、银杏叶片组.采用永久性双侧颈总动脉结扎法制备慢性脑缺血模型.Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力;Western印迹法检测p38蛋白的表达.结果 与模型组比较,TFHL可明显改善血管性痴呆大鼠学习记忆能力,缩短大鼠逃避潜伏期(P＜0.05),增加大鼠穿越平台次数(P＜0.05),抑制大鼠缺血脑组织p38蛋白的表达(P＜0.05).结论 TFHL对慢性脑缺血大鼠的神经功能具有保护作用,其机制可能与抑制p38蛋白表达,减轻脑神经元凋亡有关.