目的:建立紫连油的HPLC指纹图谱和含量测定方法，为紫连油的质量控制与评价提供依据。方法:采用薄层色谱法对紫连油中紫草、黄连、冰片进行定性鉴别；采用HPLC法测定不同批次紫连油的指纹图谱，并测定β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁含量。结果:薄层色谱法鉴别显示，紫草、黄连、冰片斑点清晰，专属性好；通过HPLC指纹图谱分析，标定了紫连油的13个共有峰，并确认了盐酸小檗碱和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的特征峰，各批次间的指纹图谱相似度≥0.981；β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁在40.48～202.40 μg范围内线性关系良好。结论:本研究建立的薄层色谱鉴别、指纹图谱和含量测定方法简单、可靠，稳定性好，可为紫连油的质量控制提供参考。

目的:预测分析紫草的质量标志物,为构建和完善紫草的质量标准提供参考.方法:搜索CNKI、pubmed、Web of science、万方等数据库的文献资料,对紫草的化学成分及药理作用进行总结归纳,并从植物亲缘学与化学成分特有性证据、传统药性药效、配伍规律、临床新用途和化学成分可测性等方面对其质量标志物(Quality marker,Q-Marker)进行预测分析.结果:紫草中主要含有萘醌类、多糖类、单萜苯酚及黄酮类等多种化学成分,现代药理研究表明紫草具有抗炎、抗肿瘤、保肝护肝和免疫调节等药理作用,并发现紫草传统功效及临床新用途相关的活性成分主要为多糖类及苯丙素类成分,并初步预测紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基-异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁等成分可作为紫草的Q-marker的候选物.结论:初步预测出紫草相关Q-Marker,以期为紫草药材质量的深入研究及综合运用提供参考.

目的 研究新疆紫草Arnebia euchroma的化学成分.方法 采用硅胶、ODS、凝胶柱色谱等多种柱色谱分离技术进行分离纯化,通过质谱、核磁共振波谱、圆二色谱等技术并结合文献报道的数据,对化合物进行结构鉴定.采用CCK8法,研究化合物对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响.结果 从新疆紫草石油醚部位中共分离得到24个化合物,分别鉴定为(S)-1-(6-异丙基-2,3-二氢-1H-茚-4-基)乙-1-酮(1)、(Z)-2-(2-(2,5-二羟基苯基)-2-氧亚乙基)-6-甲基庚-5-烯酸乙酯(2)、2-(2Z)-(3-羟基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯基)-1,4-苯二醇(3)、新藏紫草酚(4)、(+)-(R)-脱氧碘化叶黄素(5)、3-(4-甲基-3-戊烯-1-基)-6-羟基-9-甲氧基-2H-1-苯并氧杂环庚烯-5-酮(6)、对羟基苯甲醛(7)、香草醛(8)、乙酰香草酮(9)、2-羟基-4-甲氧基肉桂醛(10)、guttaquinol B(11)、岩大戟内酯E(12)、3-乙酰氧基齐墩果酸(13)、羟基何帕酮(14)、β-谷甾醇(15)、豆甾-4-烯-3,6-二酮(16)、麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮(17)、柠黄醇(18)、euchroquinol B(19)、docosanyl ferulate(20)、arnebin-7(21)、阿卡宁(22)、β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁(23)、异丁酰阿卡宁(24).化合物21、22对MCF-7细胞的增殖具有抑制作用,其半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC50)值分别为(16.58+0.02)μmol/L 和(9.19±0.02)μmol/L.结论 化合物1和2为新化合物,分别命名为新疆紫草酮(euchromone)和新疆紫草酚(euchromol).化合物7～11、16、18为首次从软紫草属中分离得到,化合物3和12为首次从新疆紫草中分离得到.化合物21、22具有良好的抑制MCF-7细胞增殖活性.

探索野生新疆紫草根际土壤微生物与药材药效成分含量相关性,为生态种植基地选择提供指导.通过提取野生新疆紫草根际土壤微生物总DNA,用IlluminaMiseq高通量测序技术分析土壤根际微生物群落结构,采用高效液相色谱法测定药材中药效成分羟基萘醌总色素、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量,测定主要产区野生新疆紫草的根际土壤理化性质,并用SPSS软件分析土壤微生物丰度与指标成分含量及土壤理化性质的相关性.结果显示,不同产地新疆紫草根际真菌、细菌在门和属水平的物种组成上相似,但其相对丰度、丰富度指数(Chao1 指数)和群落多样性指数(Simpson指数)均存在差异;相关性分析表明,土壤中有效磷的含量与主要药效成分羟基萘醌总色素、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量呈正相关,Solicoccozyma等5 种真菌属和Pseudonocardia、Bradyrhizobium等 6 种细菌属的丰度与药材药效成分含量均呈正相关,其中Bradyrhizobium的丰度与β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量呈显著正相关;Archaeorhizomyces等真菌的丰度与根际土壤有效磷的含量呈显著正相关,Bradyrhizobium等与土壤pH呈显著负相关.因此,新疆紫草根际真菌和细菌的丰度与药材药效成分和根际土壤理化性质均有一定的相关性,可为后期生态种植基地的选择提供科学依据.

观察新疆紫草中乙酰阿卡宁对人黑色素瘤A375 细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时探讨其可能的作用机制.设空白组以及乙酰阿卡宁低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 μmol·L-1)分别作用于A375 细胞.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,细胞划痕及Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测迁移侵袭相关N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶 9(MMP-9)以及Wnt/β-连环蛋白(β-cate-nin)通路相关Wnt1、轴蛋白2(Axin2)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)、β-catenin、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21 蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)、N-cadherin、vimentin、β-catenin、snail-1、CD44 mRNA表达情况.MTT结果显示,与空白组比较,乙酰阿卡宁各剂量组细胞抑制率显著上升(P<0.01).细胞划痕和Transwell实验结果显示,与空白组比较,乙酰阿卡宁各组细胞迁移、侵袭数量和迁移侵袭率显著降低(P<0.05,P<0.01),横、纵向迁移及侵袭能力明显减弱.Western blot结果显示,与空白组比较,乙酰阿卡宁高剂量组Axin2 蛋白表达增加(P<0.05),N-cadherin、vimentin、MMP-9、Wnt1、p-GSK-3β、β-catenin、cyclin D1、p21蛋白表达均减少(P<0.05,P<0.01),GSK-3β蛋白表达无显著变化;PCR结果显示,MMP-2、N-cadherin、vimentin、β-catenin、snail-1、CD44 mRNA表达总体呈下降趋势(P<0.01),E-cadherin mRNA的表达升高(P<0.01).乙酰阿卡宁可抑制人黑色素瘤A375 细胞的增殖、迁移及侵袭,作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关.

目的 探讨阿卡宁在炎症性肠病模型小鼠急性炎症中的治疗作用及可能机制.方法 选取64只6～8周龄雌性无特定病原体级Bal/c小鼠完全随机分为8组,每组8只.正常对照组给予充足的食物和水,每天给予1 ml食用橄榄油灌胃;模型组给予充足的食物、3％葡聚糖硫酸钠(DSS)灭菌水溶液,每天给予1 ml食用橄榄油灌胃;1 mg/kg阿卡宁(AKN-1)组、2 mg/kg阿卡宁(AKN-2)组、4 mg/kg阿卡宁(AKN-4)组、8 mg/kg阿卡宁(AKN-8)组、16 mg/kg阿卡宁(AKN-16)组分别给予充足的食物、3％DSS灭菌水溶液,每天给予1ml溶解相应剂量阿卡宁的食用橄榄油灌胃;阳性对照组给予充足的食物、3％DSS灭菌水溶液,每天给予1 ml溶解美沙拉嗪的食用橄榄油灌胃.每天给药1次,连续6d.比较各组小鼠结肠大体形态损伤指数评分(CMDI)、结肠病理组织学评分(TDI)和转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素17(IL-17)的mRNA和蛋白表达水平.结果 AKN-1组及AKN-2组CMDI及TDI与模型组比较,差异无统计学意义(均P＞0.05).AKN-4组、AKN-8组、AKN-16组CMDI及TDI均明显低于模型组(均P＜0.05).AKN-1组、AKN-2组、AKN-4组、AKN-8组、AKN-16组的TGF-β1、IL-17 mRNA表达水平均明显低于模型组[TGF-β1 mRNA:(2.90 ± 0.33)、(2.71 ±0.73)、(2.14 ±0.19)、(2.06 ±0.35)、(1.63 ±0.31)比(3.88±0.58);IL-17 mRNA:(2.48±0.35)、(2.25 ±0.64)、(2.07 ±0.21)、(1.78±0.24)、(1.67 ±0.23)比(3.21±0.41)](均P＜0.05).AKN-1组、AKN-2组、AKN-4组、AKN-8组、AKN-16组的TGF-β1、IL-17蛋白表达水平均明显低于模型组(均P＜0.05).结论 阿卡宁可以作用于TGF-β1—辅助性T细胞17-IL-17轴,发挥抗炎效果,对炎症性肠病有一定的治疗作用.

目的 建立紫草软膏的质量标准.方法 采用HPLC法同时测定制剂中左旋紫草素及β,β '-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量,色谱柱为Inertsil ODS-3 C18柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相为0.05%甲酸水溶液-乙腈(30∶70),流速为1.0 ml/min,检测波长275 nm,柱温25 ℃.结果 左旋紫草素、β,β '-二甲基丙烯酰阿卡宁分别在0.04～0.81 μg (r＝0.999 5)、0.41～10.36 μg (r＝0.999 2)范围内线性良好,两者的平均回收率分别为 103.32%、101.80%,RSD 分别为 1.96%、2.11%.结论 质量标准方法简便、准确,专属性强,可用于紫草软膏的质量控制.

目的 采用HPLC法测定新疆软紫草属4种植物(新疆紫草、黄花软紫草、天山软紫草、硬萼软紫草)根中7种萘醌类成分(左旋紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁、2-甲基丁基酰紫草素)的含有量.方法 该药材石油醚提取物的分析采用Agilent-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.05％甲酸;体积流量l mL/ min;柱温30℃;检测波长275 nm.结果 7种成分在各自范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.37％～ 99.75％,RSD为0.42％～1.94％.结论 该方法准确稳定,重复性好,可用于软紫草的质量控制.

目的:建立液相色谱串联质谱法测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分(左旋紫草素,β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸)的含量,用于紫草的质量控制.方法:采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱(4.6 mm×50 mm,1.8 μm),以0.1％甲酸乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～3 rmin,5％～95％A;3～7 min,95％A;7～7.01 min,95％～5％A;7.01 ～ 8.50 min,5％A);流速0.2 mL· min-1,柱温35℃,进样量5 μL;采用负离子电离模式,MRM扫描模式进行定量.结果:左旋紫草素,β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸分别在10.12～1012 μg· L-1(r=0.9981),10.88～1088 μg·L-1 (r=0.9912),10.08～806.4 μg·L-1(r =0.9976),20.32～1016 μg·L-1(r =0.9966),10.37～1037μg·L-1(r=0.9996),10.26 ～1026 μg·L-1(r =0.9978)均有良好线性关系(r≥0.9912);平均加样回收率分别为95.8％(RSD 3.2％),103.5％ (RSD2.3％),105.3％(RSD 2.1％),96.1％ (RSD 3.3％),98.9％(RSD 2.7％),100.8％(RSD 3.4％).13批次紫草样品中6个种成分含量存在较大差异.结论:所建立的方法合理可行,为综合评价紫草质量提供一定依据.

目的:建立新疆紫草的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,进行化学模式识别分析,并测定其中3种成分的含量.方法:采用HPLC法.以乙酰紫草素为参照,绘制34批不同来源新疆紫草药材样品的HPLC指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A版)》进行相似度评价,确定共有峰;采用SPSS 19.0、SIMCA 14.1统计软件进行聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析,以变量投影重要性值大于1为标准,筛选影响新疆紫草药材质量的差异标志物,并以相同HPLC法测定其中3种成分的含量.结果:34批新疆紫草药材共有12个共有峰;除市售样品中的3批药材相似度低于0.72外,其余药材的相似度均高于0.86;共指认出左旋紫草素、乙酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁等3个共有峰.34批新疆紫草药材可聚为2类,其中S1、S4～S6、S13、S15～S20、S22、S26～S34聚为一类,其余聚为一类.前3个主成分因子的方差贡献率分别为52.834％、18.600％、8.387％,累积方差贡献率为79.821％.左旋紫草素、乙酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁等6个成分为影响其质量的差异标志物.左旋紫草素、乙酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁检测质量浓度的线性范围分别为0.72～90、2.05～410、2.50～500μg/mL(r均大于0.999);定量限分别为0.132、0.135、0.118μg/mL,检测限分别为0.040、0.041、0.036μg/mL;精密度、稳定性(24 h)、重复性、耐用性试验的RSD均小于3％;加样回收率分别为95.959％～100.201％(RSD=1.669％,n=6)、97.818％～102.698％(RSD=1.788％,n=6)、95.831％～99.344％(RSD=1.600％,n=6).含量分别为0.002％～0.134％、0.025％～1.388％、0.022％～0.881％.结论:所建HPLC指纹图谱和含量测定方法简便、稳定性好,可用于新疆紫草药材的质量评价和定量分析;左旋紫草素、乙酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁等成分的含量各有不同,为不同来源新疆紫草的差异标志物.