目的:观察大黄素抑制半乳糖凝集素-3(Gal-3)影响甲状腺癌细胞增殖及内质网应激(ERS)相关蛋白的变化。方法:应用免疫组织化学与免疫印迹检测乳头状甲状腺癌(PTC)及其癌旁组织中Gal-3、增殖细胞核抗原(PCNA)表达量的差异；应用小干扰核糖核酸(siRNA)Gal-3干扰乳头状甲状腺癌细胞系(TPC-1)24 h后，观察细胞增殖能力及Gal-3、PCNA、ERS相关蛋白的变化；同时应用低(20 μmol/L)、中(40 μmol/L)、高(60 μmol/L)浓度大黄素处理TPC-1细胞24 h后检测细胞增殖能力及Gal-3、PCNA、ERS相关蛋白的变化。组间比较采用 t检验。 结果:PTC组织中的Gal-3、PCNA高于癌旁组织[Gal-3：(0.728±0.288) U/L比(0.197±0.158) U/L， t＝2.805， P<0.05；PCNA：(0.854±0.127) U/L比(0.235±0.147) U/L， t＝5.532， P<0.01]；应用Gal-3 siRNA干扰TPC-1细胞24 h后，干扰组中的Gal-3及PCNA表达水平均低于非特异性对照组[Gal-3：(0.265±0.229) U/L比(1.315±0.268) U/L， t＝5.153， P<0.01；PCNA：(0.318±0.095) U/L比(1.069±0.357) U/L， t＝3.519， P<0.05]，同时诱导ERS相关的葡萄糖调节蛋白78(Grp-78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和CCAAT/增强子结合蛋白(CHOP)增加[Grp-78：(1.210±0.110) U/L比(0.857±0.081) U/L， t＝4.464， P<0.05；PERK：(0.957±0.114) U/L比(0.634±0.083) U/L， t＝3.964， P<0.05；CHOP：(1.151±0.088) U/L比(0.431±0.057) U/L， t＝11.958， P<0.01]；在应用不同浓度的大黄素作用TPC-1细胞后出现与Gal-3 siRNA干扰后相似的结果，中、高剂量组中的Gal-3、PCNA蛋白表达水平均低于对照组[Gal-3：(1.061±0.087) U/L比(0.545±0.770) U/L比(0.433±0.836) U/L， t＝7.686、9.001， P<0.01；PCNA：(0.879±0.052) U/L比(0.561±0.036) U/L比(0.567±0.043) U/L， t＝8.703、7.962， P<0.01]，ERS相关的Grp-78、PERK、CHOP蛋白表达均高于对照组[Grp-78：(0.597±0.035) U/L比(0.958±0.019) U/L比(1.002±0.020) U/L， t＝15.970、17.654， P<0.01；PERK：(0.162±0.024) U/L比(0.990±0.036) U/L比(0.888±0.116) U/L， t＝32.948、10.614， P<0.01；CHOP：(0.165±0.038) U/L比(0.954±0.065) U/L比(0.874±0.110) U/L， t＝18.290、10.521， P<0.01]。 结论:大黄素可以通过抑制Gal-3蛋白表达减弱TPC-1细胞的增殖能力，诱导细胞的内质网应激。

目的 探讨FAM234A是否为一种新的非Gal异种移植抗原.方法 用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)小型猪的原代猪主动脉内皮细胞(PAEC)免疫食蟹猴.将免疫的猴血清与PAEC孵育,其中经免疫产生的猴抗猪细胞抗体能够识别并结合PAEC表面的未知抗原.采用流式细胞术测定PAEC表面结合的猴抗猪细胞抗体的平均荧光强度(MFI),用以表示PAEC表面抗原的含量.利用慢病毒介导的短发夹核糖核酸(shRNA)敲减PAEC中的FAM234A基因,检测该细胞结合的猴抗猪细胞抗体含量是否减少,以确定该基因是否为潜在的移植抗原.结果 PAEC中的非Gal抗原能够在猴体内引发大量的猴抗猪细胞抗体.在GTKO小型猪的PAEC中用shRNA敲减FAM234A基因后,PAEC结合的猴IgG抗体减少.结论 FAM234A是一种新的非Gal异种移植抗原.

为了早日实现五指山小型猪(WZSP)近交系异种移植产业化目标,努力推进近交繁育获得近交系,同时开展克服异种移植免疫排斥和猪内源性逆转录病毒(PERV)传染生物安全性两大难题的研发内容.本文从WZSP近交系双基因敲除克隆猪繁育成功、猪-猴异种角膜内皮移植取得突破性进展、WZSP近交系PERV无传染性群体建立、WZSP近交系是理想的动物模型和异种移植供体等方面,介绍WZSP近交系异种移植产业化的研发进展.

背景:获得适宜的支架材料是构建组织工程小直径血管的基础,前期研究发现,非离子型去垢剂的脱细胞效果差,联合应用离子型去垢剂能更有效去除细胞成分.目的:比较不同脱细胞方法制备猪颈动脉脱细胞支架的有效性,探索更适宜的细胞外基质支架制备方法.方法:取普通猪颈动脉30根,随机分为5组(n=6),其中A组不进行脱细胞处理;B组采用1％十二烷基硫酸钠+1％脱氧胆酸钠进行脱细胞处理;C组采用0.5％十二烷基硫酸钠+0.5％脱氧胆酸钠进行脱细胞处理;D组采用1％十二烷基硫酸钠+1％Triton X-100进行脱细胞处理;E组采用0.5％十二烷基硫酸钠+0.5％Triton X-100进行脱细胞处理.对各组样本分别行苏木精-伊红染色、五色套染、扫描电镜、免疫组织化学及生物机械力学检测.结果与结论:①苏木精-伊红染色、五色套染显示,B、C组脱细胞完全,D、E组于局部可见细胞残留;②扫描电镜显示,脱细胞各组胶原纤维束和弹性蛋白保存完整,B组孔隙结构的形态、尺寸优于C、D、E组;③免疫组织化学评估显示,脱细胞各组均有异种抗原 α-1,3-Gal表达,B组 α-1,3-Gal抗原表达低于C、D、E组;④生物机械力学检测显示,脱细胞各组爆破压力、缝线保持力和缝合保留强度较A组显著下降(P<0.05),脱细胞各组间比较无差异;脱细胞各组顺应性、长轴断裂伸长率、横轴最大应力、横轴断裂伸长率、横轴杨氏模量与对照组比较无差异(P>0.05);脱细胞各组长轴最大应力和长轴杨氏模量较A组显著下降(P<0.05),其中B、C组长轴最大应力和长轴杨氏模量下降较D、E组明显(P<0.05);⑤结果表明,基于1％十二烷基硫酸钠+1％脱氧胆酸钠的方法可获得更佳的猪颈动脉细胞外基质支架,适用于构建组织工程小直径血管.

背景:有研究表明一种称为α-Gal的糖抗原是动物源性生物材料或异种器官移植引起超急性免疫排斥反应的主要靶抗原.目的:研制Gal抗原缺失兔模型,预期用于评价植入性医疗器械,其局部植入后对宿主的局部免疫反应及非特异性炎症反应风险.方法:选用SPF级6-8月龄新西兰大白兔作为模式动物蓝本,制备Gal抗原缺失兔模型.采用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术,针对调控兔子Gal抗原表达的GGTA1基因第8外显子设计构建2条相辅的sgRNA.经转录后将GGTA1 sgRNA mRNAs与Cas9 mRNA共显微注射到体外培养的兔子受精卵中,继续短暂体外培养后植入代孕母兔体内,经自然妊娠获得仔兔.基因编辑成功与否通过凝胶电泳和基因测序进行验证.Gal抗原的表达参照行业标准给出的方法(YY/T 1561-2017)进行检测.研究经中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所动物伦理委员会批准[批准号:中检动(福)第2017(B)007号].结果与结论:①基因编辑后的胚胎被转移至4只代孕兔体内,自然妊娠后获得15只基因编辑仔兔,仔兔的外观发育及进食行为等未见异常;②凝胶电泳及基因测序结果显示15只仔兔中有14只的靶向基因被成功编辑,但编辑的碱基并不相同;随机检测其主要脏器Gal抗原,表达均降低了99.96％以上;③结果表明,Gal抗原缺失兔子有望用于动物源性医疗器械的免疫原性风险评价和异种骨、角膜等原位植入实验,以便能够更客观科学地评价动物源性医疗器械的安全性和有效性.

目的:研究地诺孕素治疗子宫内膜异位症效果及对卵巢功能的影响.方法:将本院2020年10月-2021年10月治疗的65例子宫内膜异位症患者随机数字表法分为对照组32例(皮下注射醋酸亮丙瑞林微球)和观察组33例(口服地诺孕素片),比较两组疗效,视觉模拟评分(VAS)、血清指标[糖类抗原125(CA125)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、半乳糖凝集素-3(Gal-3)和血管内皮生长因子(VEGF),卵巢储备功能指标抗苗勒管激素AMH(AMH)、窦卵泡计数AFC(AFC)]和不良反应.结果:治疗后总有效率观察组(84.9％)与对照组(81.3％)无差异,两组痛经、非经期下腹痛和性交痛分值均下降(P＜0.05)但两组无差异(P＞0.05);两组血清CA125、MMP-2、Gal-3、VEGF较治疗前均下降(P＜0.05),AMH、AFC水平较治疗前无变化(P＞0.05),且两组间血清指标均无差异(P＞0.05).观察组围绝经期症状发生率(0)低于对照组(21.9％)(P＜0.05).结论:地诺孕素治疗子宫内膜异位症疗效较好,不损伤卵巢功能且副作用更小.