目的:观察人脐带间充质干细胞（UC-MSCs）对2型糖尿病（T2DM）小鼠胰岛功能的影响及其对NOD样受体家族核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NLRP3）炎性体和自噬过程的调节作用。方法:实验研究。选取20只8周龄雄性C57BL/6J小鼠，分为正常对照组（ n=5）和高脂喂养建模组（ n=15）；T2DM建模成功的小鼠进一步分为糖尿病组（ n=7）和UC-MSCs治疗组（ n=7）。UC-MSCs治疗组每周给予1次UC-MSCs（1×10 6/0.2 ml磷酸盐缓冲液）尾静脉输注治疗，共治疗4周；糖尿病组注射等量生理盐水，正常对照组不予处理。治疗结束后1周各组小鼠行腹腔糖耐量和胰岛素耐量试验检测糖耐量和胰岛素敏感性变化；采用免疫荧光染色法观察胰岛结构改变并检测胰岛中白细胞介素1β（IL-1β）和胰十二指肠同源框因子1（PDX-1）的表达。体外用脂多糖和三磷酸腺苷对小鼠骨髓诱导的原代巨噬细胞进行刺激（处理组）后，与UC-MSCs进行Transwell共培养实验24 h（治疗组），采用酶联免疫吸附法检测各组上清液中IL-1β的分泌水平，采用免疫荧光染色检测NLRP3炎性体和自噬相关蛋白的表达。统计学分析采用单因素方差分析及重复测量方差分析。 结果:体内实验表明，与糖尿病组相比，UC-MSCs治疗组小鼠胰岛结构部分修复，糖耐量和胰岛素敏感性均改善（均 P<0.05），共聚焦显微镜下观察胰岛中PDX-1表达增高，IL-1β的表达水平降低。体外实验表明，相较于处理组，治疗组中巨噬细胞分泌的IL-1β水平降低［（85.9±74.6）比（883.4±446.2）pg/ml， P=0.001］，共聚焦显微镜下观察NLRP3炎性体的表达降低，自噬底物蛋白P62表达降低，微管相关蛋白轻链β3（LC3B）、自噬效应蛋白Beclin-1表达增高。 结论:UC-MSCs可降低T2DM小鼠胰岛炎症水平，保护胰岛功能，可能与UC-MSCs抑制巨噬细胞NLRP3炎性体的活性，增强自噬水平有关。

目的:探讨基于软骨脱细胞外基质微载体体外构建具有功能化和自我更新能力的软骨类器官。方法:取新鲜的猪关节软骨，将部分仅粉碎处理的软骨微粒设置为天然软骨组；利用物理离心化学萃取相结合的脱细胞方法，制备粒径合适的细胞外基质（ECM）微载体，设置为微载体组。通过旋转式生物反应器将人脐带干间充质干细胞（hUCMSCs）和人软骨细胞（hCho）按照3∶1的比例与微载体负载，体外构建软骨类器官，将诱导不同时间的类器官分为诱导0、7、14及21 d组。4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）荧光染色观察、DNA定量评估微载体组和天然软骨组细胞残留情况；番红O、甲苯胺蓝染色观察微载体ECM保留情况，二甲氨基苯甲醛比色法测定微载体组和天然软骨组胶原蛋白含量；二甲基亚甲蓝（DMMB）比色法测定微载体组和天然软骨组糖胺聚糖（GAGs）含量。扫描电镜及能谱分析对微载体进行进一步表征；将添加体积分数10%胎牛血清（FBS）的杜尔伯克改良伊戈尔低糖培养基（DMEM）培养的hUCMSCs作为对照组，将微载体浸提液培养的hUCMSCs作为实验组，两组分别设置培养1、3、5 d共3个时间点的亚组，细胞增殖及毒性检测试剂盒（CCK-8）检测两组生物相容性。活死染色检测诱导0、7、14及21 d组的软骨类器官细胞活性，Ki67荧光染色鉴定诱导14 d软骨类器官的自我更新能力。RT-PCR测定诱导7、14、21 d组的软骨类器官，包括软骨形成相关标记物聚蛋白聚糖（ACAN）、Ⅱ型胶原（COL2A1）、性别决定区Y框蛋白9（SOX9）及软骨肥大、矿化相关标记物Ⅰ型胶原（COL1A1）、Runt相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）的表达水平；比色法和DMMB法测定诱导0、7、14及21 d组的类器官分泌胶原蛋白和GAGs能力。结果:DAPI荧光染色结果显示，天然软骨组具有大量细胞核，而微载体组则基本无细胞核。微载体组DNA含量为（7.8±1.8）ng/mg，较天然软骨组的（526.7±14.7）ng/mg显著降低（ P<0.01）。番红O、甲苯胺蓝染色可见微载体着色较深且均一，保留大量软骨ECM成分。微载体组胶原蛋白含量为（252.9±1.4）μg/mg，GAGs含量为（173.4±0.8）μg/mg，均显著低于天然软骨组的（311.9±2.2）μg/mg、（241.3±0.7）μg/mg（ P<0.01）。扫描电镜显示，微载体表面有凹凸不平相互交错的胶原纤维网络。能谱分析结果显示，C、O、N元素均匀分布在微载体，表明该微载体成分组成均匀。微载体生物相容性良好，培养1、3 d时，对照组和实验组CCK-8实验结果比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）；培养5 d，实验组 A值为0.53±0.02，优于对照组的0.44±0.03（ P<0.05）。诱导0、7、14及21 d组中，hUCMSCs和hCho贴附在微载体表面且细胞活性好，活死比例分别为（70.6±1.1）%、（80.5±0.6）%、（94.5±0.9）%、（90.8±0.5）%（ P<0.01）；诱导14 d时，软骨类器官有大量Ki67阳性细胞。RT-PCR显示，诱导7 d组ACAN、COL2A1、SOX9、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平分别为1.00±0.09、1.00±0.24、1.00±0.18、1.00±0.03、1.00±0.06、1.00±0.13；诱导14 d组ACAN、COL2A1、SOX9、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平分别为4.16±0.28、5.09±1.25、5.65±1.05、0.47±0.01、1.68±0.02、0.21±0.06；诱导21 d组ACAN、COL2A1、SOX9、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平分别为13.42±0.92、3.07±0.21、1.84±1.08、2.72±0.17、2.91±0.18、3.32±1.20。与诱导7 d组比较，诱导14 d组ACAN、COL2A1、SOX9、RUNX2表达水平均升高（ P<0.05），COL1A1表达水平降低（ P<0.05），OCN表达水平差异无统计学意义（ P>0.05）；与诱导7 d组比较，诱导21 d组ACAN、COL1A1、RUNX2表达水平均显著升高（ P<0.01），COL2A1、SOX9、OCN表达水平差异均无统计学意义（ P>0.05）；与诱导14 d组比较，诱导21 d组ACAN、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平均升高（ P<0.05或0.01），COL2A1表达水平差异无统计学意义（ P>0.05），SOX9表达水平降低（ P<0.05）。诱导0、7、14及21 d组胶原蛋白含量分别为（219.15±0.48）μg/mg、（264.07±1.58）μg/mg、（270.83±0.84）μg/mg、（280.01±0.48）μg/mg，GAGs含量分别为（171.18±1.09）μg/mg、（184.06±1.37）μg/mg、（241.08±0.84）μg/mg、（201.14±0.17）μg/mg。与诱导0 d组比较，诱导7、14、21 d组胶原蛋白和GAGs含量均显著升高（ P<0.01）。在诱导7、14、21 d组中，诱导7 d组胶原蛋白含量最低（ P<0.01），诱导21 d组胶原蛋白含量最高（ P<0.01）；诱导7 d组GAGs含量最低（ P<0.01），诱导14 d组GAGs含量最高（ P<0.01）。 结论:物理化学方法结合制备的微载体脱细胞成功，其基质保留较多，成分均一且无细胞毒性。基于微载体负载hUCMSCs与hCho体外成功构建软骨类器官，具有细胞活性好、自我更新能力、软骨形成相关基因表达强及分泌胶原蛋白和GAGs等特点，诱导14 d时构建的软骨类器官成软骨活性最佳。

目的:评价核因子E2相关因子2 (Nrf2) /血红素氧化酶-1(HO-1)在人脐带间充质干细胞来源的外泌体(hucMSCs-exo)减轻小鼠肾缺血再灌注损伤中的作用。方法:培养人脐带间充质干细胞，提取外泌体，通过透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析和Western blot法进行鉴定。雄性SPF级C57BL/6小鼠36只，体质量20～25 g，取30只小鼠，采用随机数字表法分为5组( n＝6)：假手术组(Sham组)、假手术＋Nrf2抑制剂ML385组(Sham＋ML385组)、肾缺血再灌注组(I/R组)、肾缺血再灌注＋外泌体组(I/R＋EXO组)、肾缺血再灌注＋外泌体＋Nrf2抑制剂ML385组(I/R＋EXO＋ML385组)。采用夹闭两侧肾蒂45 min后再灌注的方法制备肾缺血再灌注损伤模型。Sham＋ML385组和I/R＋EXO＋ ML385组于造模前45 min腹腔注射ML385 30 mg/kg，I/R＋EXO组和I/R＋EXO＋ ML385组于再灌注前15 min尾静脉注射hucMSCs-exo 100 μg。再灌注24 h时检测血清BUN和Cr浓度；取肾组织，观察病理学变化，检测IL-6、TNF-α和MDA含量、SOD活性和ROS水平，分别采用Western blot法和RT-qPCR法检测Nrf2、HO-1及其mRNA的表达。取6只小鼠采用随机数字表法分为2组( n＝3)：假手术组(Sham-IM组)和肾缺血再灌注组(I/R-IM组)，进行VISQUE活体成像观察。 结果:透射电镜下观察外泌体具有典型的杯状形态，纳米颗粒跟踪分析外泌体平均直径96.7 nm，Western blot法检测其表面标志CD9、CD63、TSG101表达阳性。与Sham-IM组比较，I/R-IM组小鼠肾脏荧光强度值升高( P<0.05)。与Sham组比较，I/R组血清BUN和Cr浓度升高，肾组织IL-6、TNF-α、MDA含量和ROS水平升高，SOD活性降低，Nrf2、HO-1及其mRNA表达下调( P<0.05)，肾组织病理损伤加重；Sham＋ML385组血清BUN和Cr浓度比较差异无统计学意义( P>0.05)。与I/R组比较，I/R＋EXO组血清BUN和Cr浓度降低，肾组织IL-6、TNF-α、MDA含量和ROS水平降低，SOD活性升高，Nrf2、HO-1及其mRNA表达上调( P<0.05)，肾组织病理损伤减轻；与I/R＋EXO组比较，I/R＋EXO＋ML385组血清BUN和Cr浓度升高，肾组织IL-6、TNF-α、MDA含量和ROS水平升高，SOD活性降低，Nrf2、HO-1及其mRNA表达下调( P<0.05)，肾组织病理损伤加重。 结论:hucMSCs-exo减轻小鼠肾缺血再灌注损伤的机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。

目的:探讨人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUCMSCs）移植对氧化损伤衰老小鼠睾丸功能的影响及分子机制。方法:共纳入18只6~8周SPF级C57BL/C雄性小鼠，完全随机分组法分为3组，对照组：小鼠注射等量生理盐水；模型组：颈背部皮下注射D-半乳糖连续9周，造模第4周末，每只小鼠尾静脉注射生理盐水；hUCMSCs组：颈背部皮下注射D-半乳糖连续9周，造模第4周末，每只小鼠尾静脉注射hUCMSCs。9周后，称取小鼠体质量和睾丸重量，计算睾丸指数，酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法检测小鼠血清睾酮水平、睾丸组织丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）含量。肉眼观察睾丸外观，苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色观察睾丸组织病理学变化，实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting分别检测核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）信号转导相关基因和蛋白表达。结果:模型组小鼠睾丸指数［（0.64±0.05）%］较对照组［（0.81±0.13）%， P=0.006］降低，睾丸体积缩小，生精小管完整性破坏，生精细胞和精子减少，间质稀疏；血清睾水平［（4.10±0.67）μg/L］、睾丸组织SOD活性［（48.87±6.40）U/mg Prot］较对照组［（5.71±0.81）μg/L， P=0.002；（78.53±9.70）U/mg Prot， P=0.001］均降低，而MDA含量［（1.11±0.19）nmol/mg Prot］较对照组［（0.77±0.07）nmol/mg Prot， P=0.001］增加。 Keap1 mRNA和蛋白表达量较对照组均增高（ P=0.006， P=0.043）， Nrf2、 SOD和 NQO1 mRNA表达量较对照组减少（ P=0.002， P<0.001， P=0.001），Nrf2、HO-1蛋白表达量较对照组均明显降低（ P=0.011， P=0.021）。与模型组比较，hUCMSCs组小鼠睾丸指数［（0.79±0.03）%， P=0.010］增高；睾丸组织结构较为清晰、完整，生精小管各级生精细胞和精子及间质细胞较丰富；血清睾酮水平［（5.24±0.21）μg/L， P=0.028］及睾丸组织SOD活性［（79.47±14.32）U/mg Prot， P=0.001］增高，MDA含量［（0.77±0.08）nmol/mg Prot， P=0.001］降低； Nrf2、 SOD和 NQO1 mRNA表达量均增高（ P=0.024， P=0.037， P=0.005）， Keap1 mRNA表达量减少（ P=0.044），Nrf2、HO-1蛋白表达量均增高（ P=0.009， P=0.012），Keap1蛋白表达量降低（ P=0.035）。hUCMSCs组小鼠睾丸指数、血清睾酮、SOD活性及MDA含量都与对照组差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:hUCMSCs明显改善氧化损伤所致衰老小鼠睾丸结构和功能损伤，其作用机制与上调Nrf2信号转导及其相关下游抗氧化活性SOD、HO-1蛋白表达，减少Keap1介导的Nrf2降解有关。

目的:探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）分泌的外泌体对损伤后肌腱细胞修复的影响及其机制。方法:组织块贴壁法分离并纯化筛选出能稳定传代培养的hUC-MSCs，倒置荧光显微镜观察细胞形态，通过流式细胞术检测hUC-MSCs的免疫表型。应用诱导培养基诱导hUC-MSCs向成骨细胞、成软骨细胞和脂肪细胞分化并进行鉴定。运用高速离心法提取MSCs的分泌物外泌体（MSCs外泌体），用Western blot技术和电镜检测外泌体，用PKH67染色荧光法检测外泌体膜融合能力。40只Wistar鼠按随机数字表法分为肌腱损伤组和正常组，每组20只。肌腱损伤组：切断跟腱1周后用100 mg/kg戊巴比妥钠处死，取跟腱组织用胰蛋白酶消化得到损伤肌腱细胞。正常组：不做任何处理直接处死，与损伤组并行处理得到正常肌腱细胞。将外泌体与体外培养的肌腱细胞共培养，12，24，48，72 h后通过细胞计数CCK-8检测肌腱细胞增殖情况。hUC-MSCs外泌体处理细胞24 h后，采用Western blot、qPCR、免疫荧光方法检测外泌体对肌腱细胞转化生长因子-β（TGF-β）、骨形态发生蛋白（BMP）、血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）和炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。结果:鉴定了hUC-MSCs，并成功分离hUC-MSCs外泌体。分离培养的MSCs呈梭形，丙氨酸氨肽酶（CD13）、整联蛋白β-1（CD29）、ecto-5'-核苷酸酶（CD73）、胸腺细胞表面抗原（CD90）和内皮素（CD105）呈阳性，人类白细胞DR抗原（HLA-DR）、造血祖细胞抗原（CD34）、白细胞共同抗原（CD45）呈阴性。分离出的外泌体经PKH67染色鉴定证实，在电镜下呈直径30~100 nm的圆盘、内部凹陷结构，Western blot检测高表达移动相关蛋白-1（CD9）和溶酶体相关膜蛋白3（CD63）。处理肌腱细胞后，CCK-8检测12，24，48，72 h细胞活性，结果表明肌腱损伤组显著高于正常组（ P < 0.01），qPCR结果表明肌腱损伤组TGF-β（1.850 ± 0.127）、BMP（2.133 ± 0.398）、FGF（1.610 ± 0.223）、VEGF（2.207 ± 0.059）的mRNA表达显著高于正常组TGF-β（1.004 ± 0.105）、BMP（1.007 ± 0.145）、FGF（1.007 ± 0.140）、VEGF（1.001 ± 0.065）（ P < 0.05），而肌腱损伤组IL-1β（0.102 ± 0.009）、TNF-α（0.130 ± 0.013）的表达显著低于正常组IL-1β（1.004 ± 0.113）、TNF-α（1.006 ± 0.134）（ P < 0.01）。Western blot检测结果与qPCR检测趋势一致。 结论:hUC-MSCs分泌的外泌体通过上调生长因子TGF-β、BMP、VEGF、FGF的表达，抑制炎性因子IL-1β、TNF-α的表达，促进肌腱细胞生长，促进肌腱细胞损伤修复。

脊髓损伤是一种严重的中枢神经系统损伤，可导致患者的感觉和运动功能部分或全部丧失。脊髓损伤的临床治疗方法包括椎板切开减压术、大剂量静脉注射甲强龙等。这两种治疗方式均不能促进轴突和神经再生，且有严重的并发症。人脐带间充质干细胞（HUC-MSCs）具有活性高、免疫原性低、免疫调节作用强等优势，可以免疫细胞和免疫器官为靶点，缓解损伤局部微环境，为脊髓损伤的修复创造有利的条件。但目前对HUC-MSCs移植在脊髓损伤后发挥的免疫调节作用尚缺乏全面认识。为此，笔者就HUC-MSCs在脊髓损伤后炎症反应中免疫调节作用的研究进展进行综述，为脊髓损伤治疗靶点的选择提供参考。

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道.目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制.方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物.以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况.结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G0/G1期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能.②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件.③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P<0.01),红白髓界线清晰,生发中心占比无显著差异(P>0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P<0.001),衰老蛋白分子p21和p53表达下调(P<0.001),增殖相关分子Ki67和PCNA表达上调(P<0.001,P<0.05),自噬相关分子Beclin1和APG5L/ATG5表达上调(P<0.001),活性氧含量降低(P<0.001),CD3+T细胞比例增加(P<0.05),衰老相关分泌表型中白细胞介素1β分泌水平降低(P<0.001),转化生长因子β1分泌水平无显著差异(P>0.05).与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P<0.05).④冰冻组织切片观察可见老年治疗组树鼩脾脏组织中有绿色荧光蛋白标记的绿色荧光细胞.结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能.

目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUMSCs)运载3型呼肠孤病毒(Reo3)对人慢性髓系白血病K562细胞的溶瘤效应.方法:流式细胞术检测hUMSCs和K562细胞表面Reo3易感受体——连接黏附分子A(JAM-A)表达情况,电镜观察Reo3感染hUMSCs 72 h后胞内病毒包涵体分布.将不同(0、1、2和3)感染复数(MOI)的Reo3感染hUMSCs 24、48、72、96和120 h后利用CCK-8法筛选最适MOI.选择最适滴度的Reo3感染hUMSCs 24、48、72、96和120 h后收集上清液,利用小鼠成纤维细胞系L929结合半数组织培养感染剂量(TCID50)法测定各组上清液中Reo3病毒滴度以确定最适感染时间.将K562细胞分为对照组、hUMSCs组、Reo3组和hUMSCs-Reo3组,hUMSCs组和hUMSCs-Reo3组设置hUMSCs与K562细胞作用的低、中、高比例(5∶1、10∶1和20∶1).CCK-8法分析hUMSCs-Reo3与K562细胞共培养24、48、72 h后K562细胞活力的变化.流式细胞术评估细胞凋亡.利用L929细胞确定抗Reo3单克隆抗体的半数效应浓度(EC50);验证在体外抗体存在条件下hUMSCs-Reo3对K562细胞溶瘤作用的变化.Western blot检测运载体作用于K562细胞后胞内Bcl-2、Bax、survivin和cleaved caspase-3蛋白水平.构建K562细胞的BALB/c裸鼠皮下荷瘤模型(每组6只),分析hUMSCs-Reo3在体内对K562细胞的抑瘤效果.结果:hUMSCs和K562细胞表面JAM-A分子表达量分别为11.0%和99.0%.电镜显示Reo3感染hUMSCs 72 h后胞内出现大量病毒包涵体.在120 h范围内,与未感染组相比,MOI=1的Reo3对hUMSCs活力无显著影响,故最佳MOI为1;TCID50结果显示,MOI=1的Reo3感染hUMSCs 48 h后细胞裂解液中病毒滴度最高,故最适感染时间为48 h.hUMSCs-Reo3作用24、48和72 h后K562细胞活力呈现剂量与时间依赖性抑制.抗Reo3单克隆抗体的EC50为1∶34;在体外不同浓度(1∶34、1∶300和1∶600)抗体存在条件下,hUMSCs仍能运载Reo3抑制K562细胞活力并诱导凋亡发生.与对照组相比,hUMSCs-Reo3作用48 h后K562细胞中Bcl-2和survivin表达水平显著下调(P<0.05),Bax和cleaved caspase-3表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01).在BALB/c裸鼠荷瘤模型中,荷瘤体积测定、肿瘤组织和主要脏器病理学分析及小动物活体成像仪检测组织蛋白酶B/L活性结果表明,运载体在体内对K562细胞具有溶瘤效应而对正常组织无不良影响.结论:hUMSCs可有效运载Reo3,该运载体系在体内、外实验中能够释放足量Reo3抑制K562细胞恶性增殖并促进细胞凋亡,从而发挥溶瘤效应.

目的 通过构建体外胎盘屏障模型,研究人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对传统胎盘屏障模型功能的影响及其可能的分子机制.方法 将hUC-MSC、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人滋养层细胞(HTR-8)共同培养于transwell中建立体外胎盘屏障模型,设置对照组(HUVEC+HTR-8)、forskolin 组(HUVEC+HTR-8+forskolin)、MSC 组(HUVEC+HTR-8+hUC-MSC)、MSC+forskolin组(HUVEC+HTR-8+hUC-MSC+forskolin),通过测量跨膜电阻值、荧光黄CH 的渗透性以及P-糖蛋白(P-gp)的活性,评估各组体外胎盘屏障模型的功能;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测各组体外胎盘屏障模型中P-gp、紧密连接蛋白5(Claudin-5)、闭合小环蛋白-1(ZO-1)、ZO-2、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的mRNA及蛋白表达水平;利用LC-MS/MS检测阿替洛尔、米诺地尔、美托洛尔3种渗透性工具药透过各组体外胎盘屏障模型的表观渗透系数(Papp),验证模型的功能完整性.结果 与对照组相比,forskolin、MSC、MSC+forskolin组的跨膜电阻值均显著增高(P＜0.05、0.001)、P-gp外排功能均增强、荧光黄的Papp值均显著降低(P＜0.05、0.01、0.001),且二者联用后作用效果尤为显著,表明该模型具备完整的屏障功能,且MSC+forskolin屏障功能最好;qRT-PCR和 Western blotting结果显示,与对照组相比,forskolin组P-gp、ZO-1、ZO-2、CD31 的表达显著增加(P＜0.05、0.01、0.001),MSC组P-gp、Claudin5、ZO-1和CD31的表达也显著增加(P＜0.05、0.01、0.001);联合应用后,各蛋白的mRNA及蛋白表达水平均更显著增加(P＜0.01、0.001),表明hUC-MSC增强传统胎盘屏障功能;与对照组相比,各实验组的Papp值均降低,MSC+forskolin组3个工具药均差异显著,美托洛尔差异最显著.结论 hUC-MSC通过增强传统胎盘屏障模型中紧密连接蛋白和外排蛋白的表达,进一步增强了传统胎盘屏障模型的屏障功能.

目的:探讨氧化石墨烯-壳聚糖改性的钛酸钡纳米颗粒(BCG-NPs)与聚偏氟乙烯-三氟乙烯(P(VDF-TrFE))复合压电材料对人脐带间充质干细胞(hWJ-MSC)成骨分化的影响.方法:采用滴涂法在钛表面制备BCG-NPs/P(VDF-TrFE)涂层(BCGP-Ti),对其表面形貌、物相组成、亲水性和压电性能进行表征.通过模拟体液浸泡实验检测样本体外矿化的能力.将hWJ-MSC接种在样本表面,采用CCK-8检测细胞活力,细胞骨架染色观察hWJ-MSC铺展情况,碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色分别评估ALP活性和矿化水平,实时荧光定量PCR和免疫荧光染色检测成骨分化相关基因和蛋白表达.将Ti棒与BCGP-Ti棒分别植入SD大鼠股骨,Micro-CT和组织学染色观察骨整合效果.结果:扫描电镜和X射线衍射分析证实BCGP-Ti涂层成功构建.极化后BCGP-Ti具有良好的压电响应,其亲水性优于Ti和未极化的BCGP-Ti(P＜0.01),体外矿化的能力高于Ti和未极化的BCGP-Ti(P＜0.01).hWJ-MSC在极化后BCGP-Ti表面铺展的面积较Ti组增加(P＜0.05).与Ti相比,极化后BCGP-Ti促进hWJ-MSC矿化水平、ALP以及Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、Runt相关转录因子(RUNX2)、骨钙素(OCN)等成骨分化相关基因和蛋白的表达(P＜0.05),在体内实现更好的骨整合.结论:在钛基表面构建BCG-NPs/P(VDF-TrFE)涂层可诱导hWJ-MSC成骨分化促进骨整合.