艾美耳球虫是鸡球虫病的病原体，采用疫苗防治是当前研究的热点之一。其表面抗原是一种有效的疫苗候选分子，本文对卡介苗（BCG）、乳酸乳球菌（LL）、植物乳杆菌（LP）、鼠伤寒沙门氏菌（St）、枯草芽孢杆菌（Bs）、粪肠球菌（Efs）、大肠埃希菌（Ec）、蓝细菌（CB）、酵母、蜥蜴利什曼原虫（Lt）、鸡痘病毒（FPV）、火鸡疱疹病毒（HVT）、牛痘病毒（VV）和昆虫杆状病毒等载体介导的艾美耳球虫表面抗原疫苗的研制现状做一概述，以期为新型疫苗的开发和应用提供参考依据。

目的:应用新一代长读长测序技术精准确定复制缺陷型痘苗病毒天坛株(non-replicating Tiantan strain of vaccinia virus，NTV)全基因组序列及其开放阅读框(ORFs)组成。方法:基于本实验室储备的NTV，在鸡胚成纤维细胞上进行扩增并纯化，提取NTV全长基因组核酸。PacBio HiFi测序从头组装获取NTV全长基因组序列。以同源注释的策略确定其ORF组成，并分析其与已知复制缺陷型痘苗病毒毒株ORF异同。结果:NTV全长共171 729 bp，GC含量为33%，其独特的倒置末端重复(ITR)区域包含发夹结构、两个串联重复区域及3个非重复区域。NTV共有166个ORFs，与第三代天花病毒疫苗改良安卡拉株(MVA-BN)和复制缺陷型哥本哈根株(NYVAC)株相比，主要差异位于ITR及其周围区域，3个毒株共同享有138个ORFs，NTV特有6个编码与病毒逃避宿主抗病毒反应相关的ORFs。结论:通过三代测序技术精准确定NTV全基因组序列及ORFs组成，并揭示其与其他复制缺陷型痘苗病毒毒株的异同，为新一代猴痘疫苗和痘苗病毒载体研发应用提供重要参考。

[目的]禽痘病毒(FPV)是痘病毒科禽痘病毒属的成员.FPV因其基因组庞大,含有大量复制非必需区,目前作为活病毒载体在禽类和哺乳动物中广泛使用.重组位点的选择是禽痘病毒载体构建的先决条件,外源基因的插入不影响病毒复制是筛选插入位点的前提.因此,鉴定可供外源基因插入的复制非必需位点将为重组病毒的构建提供更多选择.本研究拟鉴定FPVNX10株胸苷激酶(TK)基因在病毒复制中的必要性.[方法]以TK基因作为靶基因,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记构建转移载体,FPV NX10株为亲本病毒,通过同源重组筛选重组病毒rFPV-△TK-EGFP.通过在CEF细胞培养物中添加5-溴脱氧尿苷(BUdR)验证TK基因在FPV复制中的作用.[结果]构建了转移栽体pUC 19-TK AB-EGFP.在转染后重组病毒克隆纯化过程中,蚀斑克隆中绿色荧光病变所占的比例逐渐增加,但在荧光蚀斑的边缘能观察到不带荧光病变的存在.对第9-15轮随机选取的蚀斑克隆的Western blot分析表明,重组病毒中插入的EGFP基因均能够正确表达,但PCR结果显示在重组病毒中始终存在野生型病毒.在细胞培养液中添加BUdR后,重组病毒不能继续生长.[结论]FPV NX10毒株TK基因在该病毒的复制中不是完全非必需的.

[目的]旨在构建表达绿色荧光蛋白(CFP)的重组鸡痘病毒.[方法]使用overlap PCR进行表达载体质粒的构建,使用菌液PCR和测序技术进行了鉴定;使用鸡胚成纤维细胞作为重组鸡痘病毒同源重组的介质,尝试了可能影响重组鸡痘病毒构建的不同条件;最后使用PCR和Western Blot方法对重组病毒进行了鉴定.[结果]将人工合成的痘苗病毒早晚期启动子SP与绿色荧光蛋白基因一同插入到鸡痘病毒载体质粒的多克隆位点,挑取LA平板上的重组子,菌液PCR及测序验证鉴定结果为阳性;利用重组质粒转染被野生鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞制备重组病毒,利用倒置荧光显微镜观察到含有重组病毒的在激发光下呈绿色的细胞;改进重组质粒转染的条件以达到更好的重组病毒包装成效,研究得出被野生痘病毒感染的细胞进行重组质粒传染制备重组病毒的效率是用野生痘病毒感染已转染重组质粒的细胞的6倍,且感染用野生病毒滴度高时重组病毒的制备效果更好;最后,用PCR方法和Western Blot方法对重组病毒进行鉴定,鉴定结果为阳性.[结论]成功构建了表达GFP的重组鸡痘病毒.

鸡痘病毒引起的鸡痘是一种常见的禽类传染病.鸡痘病毒可诱导感染的宿主产生细胞、体液和黏膜免疫应答,是一种理想的疫苗载体,可表达病毒、细菌和寄生虫的多种蛋白.这些病原体包括丙型肝炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、传染性喉支气管炎病毒、马立克病病毒、新城疫病毒、火鸡鼻支气管炎肺病毒、口蹄疫病毒、猪瘟病毒、传染性法氏囊病病毒、Ⅰ型人类免疫缺陷病毒、猴免疫缺陷病毒、禽流感病毒、人乳头瘤病毒16型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、传染性支气管炎病毒、牛痘病毒、出血性肠炎病毒、狂犬病毒、猪园环病毒Ⅱ型、番鸭细小病毒、禽艾美球虫、鸡败血支原体、恶性疟原虫和伯氏疟原虫等.本文综述以鸡痘病毒为传递载体的病原体疫苗的研制现状.

新城疫病毒引起的新城疫是一种禽类急性接触性传染病,采用疫苗防治该病是当前研究的热点领域之一.HN/F蛋白是2种有效的疫苗候选分子,乳酸乳球菌、鼠伤寒沙门菌、单增李斯特菌、根癌农杆菌、鸡痘病毒、牛痘病毒、鸽痘病毒、禽红白血病病毒、禽副粘病毒3型、传染性法氏囊病病毒和传染性气管炎病毒等微生物经过改造后可成为理想的疫苗载体.本文综述了重组乳酸乳球菌(rLL-HN)、重组鼠伤寒沙门菌(rSt-F和rSt-HN)、重组单增李斯特菌(rLm-F)、重组根癌农杆菌(rAt-F)、重组鸡痘病毒(rFPV-HN、rFPV-F-gB和rFPV-F-HN-gB)、重组牛痘病毒(rVV-F)、重组鸽痘病毒(rPPV-F)、重组禽红白血病病毒(rAEV-HN)、重组禽副粘病毒3型(rAPMV-F)、重组传染性法氏囊病病毒(rIBDV-HN)和重组传染性气管炎病毒(rIBV-HN)等疫苗的构建及其免疫机制的研制现状.

呼吸道病毒通常引起呼吸道的相关感染,研制疫苗防治该类疾病是当前研究的热点之一.鸡痘病毒可诱导感染的宿主产生细胞、体液和粘膜免疫应答,是一种理想的疫苗载体,可表达呼吸道病毒的多种蛋白.这些呼吸道病毒包括禽流感病毒、新城疫病毒、火鸡鼻支气管肺病毒、出血性肠炎病毒和传染性支气管炎病毒等,本文综述以鸡痘病毒为传递载体的呼吸道病毒疫苗的研制现状.

构建了一个可以适于人用的表达狂犬病病毒糖蛋白的重组痘苗病毒疫苗株。构建的方法是：先构建一个表达 β-半乳糖苷酶基因（简称 lac基因）的不经传代细胞的重组痘苗病毒，以此为亲本株，再与载体PTk 11kRG（狂犬病病毒糖蛋白基因插在胸苷激酶Tk区，并置于痘苗病毒11k启动子下游，Tk侧冀序列和启动子均来自痘苗病毒天坛株），在鸡胚细胞中同源重组，以蓝色空斑中挑白斑的方法筛选阳性重组病毒，用免疫荧光方法和APAAP免疫酶法证明，该病毒能较好地表达狂犬病病毒糖蛋白。动物实验表明，该病毒能较好地诱导小鼠和狗的抗狂犬病毒的中和抗体，并对狂犬病病毒CVS株和SRV（街毒）的攻击有保护作用。

从广-9株痘苗病毒通过鸡胚尿囊膜培养，挑选白色单颗小痘疱并加以纯化，以及用人二倍体细胞低温（27℃）培养传代选育出京-CⅠ系及京-CⅡ系二株弱毒痘苗病毒。京-CⅠ系和京-CⅡ系病毒的生物学性状与原株相比有显著改变，即对小鼠的毒力（成鼠脑内，乳鼠脑内，幼鼠静脉）明显减弱；鸡胚尿囊膜40℃培养，病毒的繁殖能力显著降低；对家兔皮肤反应改变则不明显。在鸡胚尿囊膜上形成的痘疱很小（<1.0mm），且表浅。

用人脐带血白血细胞以新城鸡瘟病毒（NDV）诱生而制备的干扰素，经过无菌试验、HBs Ag的检测、热原试验、毒性试验、残留NDV检测、活性测定和物理检查结果合格。用于治疗水痘、带状疱疹、乙型肝炎、乙型脑炎等疾病。对水痘和带状疱疹的疗效显著，对慢性活动性乙型肝炎有一定的疗效，对乙型脑炎未观察到明显的疗效。使用方法为肌肉注射。在使用过程中未见到明显的毒、副作用。作者认为其产生疗效的机理除了干扰素本身作用外，还证明有免疫增强作用，也可能有诱生能力。