新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是禽类最重要的疫病病原之一,其中基因Ⅵ型NDV在鸽群广泛流行,给养鸽业造成了严重的经济损失.为深入了解基因Ⅵ型NDV在世界不同地理区域和宿主间的传播动态,本研究通过病毒分离鉴定、高通量测序、完整F基因系统发育树构建和贝叶斯系统动力学等方法进行综合分析,结果获得4株广西NDV分离株,均为基因Ⅵ型.进一步的时空分析显示,基因Ⅵ型NDV最近的共同祖先时间为1972年(95％置信区间:1965～1978),估计进化速率为1.43×10-3 substitution/site/year(95％置信区间:1.27×10-3～1.59×10-3);意大利是欧洲基因Ⅵ型NDV早期的外溢传播中心,该病毒从欧洲传播至我国,随后华东和华南成为我国的主要传播中心;病毒存在从鸽(Columba livia)到野鸟和鸡(Gallus gallus)、从野鸟到鹌鹑(Coturnix coturnix)等的跨物种传播,但病毒传播最重要的宿主是鸽.分析结果表明基因Ⅵ型NDV正快速进化,有作为突变库的潜在威胁.基于"One Health"理念,应在全球范围内加强主动监测,改善家禽管理策略,避免不同家禽之间及不同家禽与野鸟之间的直接和间接接触.这些信息有助于了解基因Ⅵ型NDV的起源、传播与进化,为制定相应防控策略提供科学依据.

本研究通过回顾性分析2020年2月9至29日华中科技大学附属同济医院中法新城院区隔离病房北京医院国家援鄂抗疫医疗队收治的54例新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者的临床资料，比较不同临床分型患者的基本临床特征、入院时外周血生物化学指标检测结果，以及炎症指标如IL-6、超敏C-反应蛋白(HsCRP)和铁蛋白水平。结果发现COVID-19患者的消化系统症状并不少见，以腹泻(22.2%)和恶心(14.8%)为主，普通型患者的腹泻比例更是高达26.3%(10/38)，仅次于常见症状发热、乏力和咳嗽；患者外周血LDH、 D-二聚体水平和炎症指标IL-6、HsCRP水平均与临床疾病分型相关，能够提示COVID-19的严重程度。

目的:探究基因工程病毒rL-RVG对肺腺癌细胞(PC9)的影响及其潜在机制.方法:通过CCK8实验评估细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力.通过蛋白质印迹分析NLRP3、Caspase 1、GSDMD、Asc和IL-1β蛋白表达,免疫荧光染色检测NLRP3的表达.应用Hoechst 33342/PI双染法鉴定细胞焦亡.使用NLRP3抑制剂MCC950预处理验证阻断NLRP3/Caspase1/GSDMD通路对细胞焦亡的影响.结果:rL-RVG处理后,PC9细胞表现出细胞焦亡的形态变化,细胞膨胀、气泡突出、膜破裂和胞质流出胞外.rL-RVG处理可明显抑制PC9细胞增殖,而且抑制效果超过了常规的NDV处理.蛋白质印迹分析显示,在 NDV、rL-RVG 处理组中,NLRP3、Caspase1-p20、GSDMD-NT、Asc 和 IL-1β 蛋白表达显著上调,而在rL-RVG组中,这些上调效应更为显著.免疫荧光染色结果揭示,在rL-RVG组中,NLRP3的表达高于NDV组和Mock组.另外,rL-RVG处理显著减弱了 PC9细胞的迁移和侵袭能力.Hoechst 33342/PI双染显示rL-RVG处理导致PI阳性细胞(红色荧光)显著增加,提示细胞焦亡,其中rL-RVG组效应更为显著.MCC950预处理实验进一步证实,阻断NLRP3/Caspase1/GSDMD信号通路可以减轻rL-RVG诱导的PC9细胞焦亡.结论:rL-RVG通过调控NLRP3/Caspase1/GSDMD通路抑制肺腺癌细胞增殖和诱导焦亡.

目的 探讨重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus,rL-RVG)是否通过Nrf2-GCLC-GPX4通路引发胃癌细胞铁死亡.方法 培养人胃癌HGC-27细胞,分别用rL-RVG、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、PBS 溶液(对照组)处理 HGC-27 细胞后,用 CCK-8、Transwell 侵袭、细胞划痕实验检测胃癌HGC-27细胞的增殖、侵袭、迁移能力.加入铁死亡促进剂(erastin)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)促进剂(TBHQ)及抑制剂(ML385)作为干预组,脂质氧化试剂盒检测各组丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;DCFH-DA荧光探针及流式细胞仪检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量;Western blot、免疫荧光法检测 Nrf2-GCLC-GPX4 通路相关蛋白表达情况.结果 与对照组比较,rL-RVG和NDV处理后,细胞的存活率均下降,呈剂量、时间依赖性,且rL-RVG处理组较为显著(P＜0.05);NDV和rL-RVG处理组胃癌HGC-27细胞迁移、侵袭能力均受到抑制,后者较前者抑制更明显(P＜0.05);与对照组比较,病毒组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达下降(P＜0.05),MDA水平、ROS相对表达量上升(P＜0.05),rL-RVG组上升或下降的趋势较NDV组明显,且erastin组SLC7A11、GPX4蛋白表达下降(P＜0.05);与对照组比较,TBHQ组、ML385组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达分别上升、下降(P＜0.05),MDA水平、ROS相对表达量分别下降、上升(P＜0.05);与 rL-RVG 组比较,rL-RVG+TBHQ 组、rL-RVG+ML385 组 Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4 蛋白表达分别上升、下降(P＜0.05),MDA水平、ROS相对表达量分别下降、上升(P＜0.05).结论 重组新城疫病毒(rL-RVG)可通过Nrf2-GCLC-GPX4通路诱导胃癌细胞铁死亡的发生,抑制肿瘤细胞的生长.

目前,动物疫苗佐剂主要以铝佐剂和油乳佐剂为主,存在免疫效果差、副作用明显等问题,亟须安全有效的新型佐剂替代.随着纳米颗粒在佐剂应用领域研究的深入,其良好的免疫增强作用、生物相容性、纳米尺寸效应、抗原负载能力、抗原缓释效应和组织靶向性等优势引起了研究人员的极大关注,有望作为新型动物疫苗佐剂用于动物疾病防治.迄今为止,针对如猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪流行性腹泻、非洲猪瘟、牛病毒性腹泻、口蹄疫、禽流感和新城疫等重要动物传染病纳米疫苗的研究取得了重大进展.综述总结了国内外动物疫苗纳米颗粒佐剂的应用及作用机制,分析了影响纳米颗粒佐剂免疫增强效果的理化因素,以期为新型动物疫苗佐剂研制及开发提供参考.

目的:探讨溶瘤新城疫病毒(NDV)对IL-6诱导的人胶质母细胞瘤U87MG细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其可能的机制.方法:将U87MG细胞分为对照组、IL-6组、NDV组、NDV+IL-6组,其中IL-6组与NDV+IL-6组用75 ng/mL IL-6预处理1 h,其余组用DMEM预处理1 h,后分别用DMEM、75 ng/mL IL-6、1 HU NDV、1 HU NDV+75 ng/mL IL-6处理24 h.MTT法、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测IL-6、NDV对U87MG细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB 法检测各组细胞JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3和MMP2蛋白的表达水平.结果:与对照组相比,IL-6组细胞迁移率显著升高(P<0.05),侵袭细胞数目显著增多(P<0.01);与IL-6组相比,NDV+IL-6组U87MG细胞增殖率显著降低(P<0.05),细胞迁移率和侵袭细胞数目均显著降低(均P<0.01).WB实验结果显示,与对照组相比,IL-6 组 p-STAT3/STAT3 比值显著升高(P<0.01),NDV组p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值显著降低(P<0.05,P<0.01),MMP-2蛋白表达量显著降低(P<0.01);与IL-6组相比,NDV+IL-6组p-STAT3/STAT3比值、MMP-2蛋白表达量均显著降低(均P<0.05).结论:NDV能抑制IL-6对人脑胶质瘤U87MG细胞迁移和侵袭的诱导作用,其机制可能与JAK2/STAT3信号通路的参与调控有关.

[背景]新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的传染可能会引发作为二类传染病之一的新城疫(Newcastle disease,ND),给养禽业带来巨大的经济损失,因而早期、精准的 NDV 筛查是防治 ND 暴发的关键.[目的]针对新城疫病毒(NDV)建立结合 TaqMan 探针的反转录环介导等温扩增技术(RT-TaqMan-LAMP)快速检测方法.[方法]根据NDV F基因序列设计特异性引物组和TaqMan探针,以重组质粒pMD-NDV-F为阳性标准品优化反应条件,验证该方法的特异性、灵敏性和重复性,同时与国家标准(GB/T 16550-2020)中推荐的RT-qPCR方法比较,对 70 份实际样本进行验证.[结果]最佳反应条件为 61℃60 min.引物和探针最优浓度:1.6 μmol/L(FIP/BIP)、0.2 μmol/L(F3/B3)、0.8 μmol/L(LF/LB)、0.2 μmol/L(GTP).最低检测限为 1.651×102 copies/μL,灵敏性是LAMP方法的100倍.无非特异性扩增,与禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)、鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)、鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)、鸡传染性囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)及疱疹病毒(herpes virus,HSV)均无交叉反应,批次内和批次间变异系数(coefficient of variation,CV)均小于 3%.在 70 份临床样品的检测中本方法比RT-qPCR方法多检测出 1 份阳性样本,经 2 次复测二者的符合率为 98.57%.[结论]本研究建立的NDV RT-TaqMan-LAMP检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,并能有效避免非特异性扩增,可用于NDV的精准检测和流行病预防.

目的 探讨表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒rL-RVG抑制人肺腺癌细胞系A549 和PC9 增殖.方法 体外培养人肺腺癌细胞系A549、PC9,将处于对数增殖期的细胞分为对照组、新城疫病毒感染组(NDV)、重组新城疫病毒感染组(rL-RVG)、铁死亡诱导剂组(Erastin)和重组新城疫病毒联合铁死亡诱导剂组(rL-RVG+Erastin).病毒及药物感染细胞 24h后,光学显微镜下观察细胞形态,CCK-8 法检测细胞增殖能力,划痕试验检测细胞迁移能力,细胞毒性检测试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)含量,Western blot检测铁死亡相关蛋白p53、SLC7A11、GPX4 的表达.结果 与对照组相比,NDV组、rL-RVG组、Erastin组细胞数、细胞增殖能力及迁移的距离明显降低(P均＜0.001),LDH释放量和总ROS水平显著提高(P＜0.01),p53 蛋白表达明显增加(P＜0.001),而SLC7A11、GPX4 蛋白表达明显降低(P＜0.001).rL-RVG组与NDV组相比上述结果更明显(P＜0.05),rL-RVG+Erastin 组与 rL-RVG 组和 Erastin 组相比细胞数、细胞增殖能力及迁移的距离明显减少(P＜0.05),LDH释放量和总ROS水平显著提高(P＜0.05),P53 蛋白表达明显增加(P＜0.001),而SLC7A11、GPX4蛋白表达明显降低(P＜0.001).结论 rL-RVG可以发挥类似Erastin抑制肿瘤细胞增殖的作用,且其效果远远强于NDV.这为rL-RVG诱导的细胞死亡提供了新的见解,并强调了病毒在治疗肿瘤中的关键作用.

[目的]研究NDV7793影响小鼠肺腺癌皮下移植瘤CCL21/CCR7表达来抑制小鼠肺腺癌皮下移植瘤转移的机制.[方法]建立小鼠肺腺癌皮下移植瘤模型.用PBS、顺铂和NDV7793给药对移植瘤进行治疗,每两天给移植瘤瘤内注射1次,一共进行5次注射.11d后杀死小鼠取出移植瘤.观察小鼠胸腔有无肿瘤转移,免疫组化检测移植瘤癌旁组织有无肿瘤细胞浸润,流式细胞术检测移植瘤细胞CCR7表达水平,ELISA检测移植瘤CCL21和CCL19.[结果]PBS阴性实验组免疫组化实验结果显示移植瘤癌旁组织出现明显肿瘤细胞浸润.NDV7793组免疫组化实验结果显示移植瘤癌旁组织未发现有肿瘤细胞浸润.流式细胞术检查发现,NDV7793实验组的CCR7相对于PBS阴性组及顺铂阳性对照组明显降低.ELISA实验显示,NDV7793组CCL21表达水平高于PBS阴性对照组(P=0.049)及顺铂阳性对照组(P=0.046),差异具有统计学意义.PBS阴性组、NDV7793组及顺铂阳性对照组CCL19水平差异无统计学意义.[结论] NDV7793在治疗小鼠肺腺癌皮下移植瘤上,可通过上调CCL21和下调CCR7来抑制肺腺癌细胞的浸润和转移.

[目的]当前我国鸡群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)感染严重,该病毒既可水平传播也可经卵垂直传播,因此鸡胚源禽用弱毒活疫苗是否存在FAdV污染,进而造成疫病的传播尚不清楚.检测我国商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗中是否存在FAdV污染,探讨国内鸡群中FAdV感染和流行的可能原因.[方法]应用本实验室建立的FAdV PCR检测方法检测商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗,并进行FAdV分离鉴定.经序列比对和进化分析,鉴定分离毒株所属种、血清型及进化特征.[结果]分离到一株禽腺病毒,命名为L160962.基因分析表明,分离株L160962的52k和hexon基因片段序列与C种内的血清4型毒株相似性最高,其中与中国毒株HN/151025和CH/HNJZ/2015的相似性为99.9％-100％,与奥地利毒株KR5的相似性为99.3％,但与A、B、D和E种FAdV的相似性分别为79.0％-83.3％.系统进化分析表明,L160962与C种内的血清4型禽腺病毒在同一分支,核苷酸相似性在99.9％以上,应划分为血清4型FAdV.基于分离株L160962的hexon基因构建的系统进化树的拓扑结构,分离株L160962与中国毒株亲缘关系最近,提示疫苗源分离株L160962与我国当前流行毒株相近.[结论]我国商品化的新城疫La Sota弱毒活疫苗中存在血清4型FAdV污染,这可能是我国鸡群中FAdV大面积感染和流行的原因之一.