目的:利用分层应变技术评价2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB)干预砷中毒致大鼠心功能障碍的效果。方法:将32只12周龄的SD大鼠随机分为对照组(8只)和染砷组(24只)。染砷12周后，将染砷组大鼠分为自然恢复组、低剂量干预组、高剂量干预组(每组8只)，给予2-APB干预21 d。最后一次给药结束后，使用超声仪器测量记录各组大鼠的常规参数和分层应变参数；随后处死大鼠，获取其血液及心肌标本，检测各组大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)水平，并分析其相关性，HE染色法观察各组大鼠心肌细胞形态改变。结果:自然恢复组大鼠的左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心内膜下层心肌整体圆周应变(GCS-endo)、中层心肌整体圆周应变(GCS-mid)、心外膜下层心肌整体圆周应变(GCS-epi)及左心室心肌各节段圆周应变率(SrC)低于对照组(均 P<0.05)，血清CK-MB和LDH高于对照组(均 P<0.05)；低、高剂量干预组大鼠的部分超声参数及生化指标较自然恢复组有不同程度的改善(均 P<0.05)；GCS-endo与CK-MB的相关性最高( r＝-0.931， P<0.05)。心肌HE染色显示低、高剂量干预组较自然恢复组大鼠心肌细胞肿胀和坏死程度减轻、红细胞渗出减少。 结论:分层应变技术可用于评估2-APB对砷中毒致大鼠心功能障碍的保护作用，其中以GCS-endo较为敏感。

目的 观察心肌超声造影心动图(MCE)联合斑点追踪成像(STI)评价2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯(2-APB)对砷中毒大鼠心脏保护作用的价值.方法 将40只大鼠随机分为三氧化二砷(ATO)中毒后低剂量2-APB干预组(2-APBt组)、ATO中毒后高剂量2-APB干预组(2-APBH组)、单纯ATO中毒组(ATO组)、单纯2-APB干预组(2-APB组)及对照组,每组8只.对2-APBL组、2-APBH组及ATO组均经腹腔注射ATO 5 mg/kg体质量,对2-APB组和对照组注射等量生理盐水;之后分别以2、4、4 mg/kg体质量对2-APBL组、2-APBH组和2-APB组注射2-APB,对ATO组和对照组注射等量生理盐水;行MCE及STI检查,检测血清心肌损伤标志物及心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA);最后行心肌病理学检查.观察组间各参数差异,并行相关性分析.结果 5组左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室射血分数(LVEF)、曲线上升斜率(WIS)、峰值信号强度(PI)、WIS×PI、曲线下面积(AUC)、各层心肌整体圆周应变(GCS)及谷草转氨酶(GOT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、SERCA差异均有统计学意义(P均＜0.05),且基本依ATO组、2-APBL组、2-APBH组、2-APB组/对照组次序递增或递减(P均＜0.05).WIS、PI、WIS×PI、心内膜下心肌GCS、中层心肌GCS、心外膜下心肌GCS 均与 SERCA 呈正相关(r=0.874、0.893、0.920、0.916、0.848、0.783,P 均＜0.05).结论 MCE 联合 STI、尤其 WIS ×PI和心内膜下心肌GCS可用于评估2-APB对砷中毒大鼠心脏的保护作用.

目的 探讨抑制肌醇-1,4,5-三磷酸受体(IP3R)-Ca2+途径对对乙酰氨基酚(APAP)所致肝损伤及其线粒体内质网结构偶联(MAMs)的影响.方法 40 只SPF级雄性C57BL/6 小鼠随机分为正常对照组、模型组、IP3R 抑制剂(2-APB)组、钙离子螯合剂(BAPTA-AM)组,每组 10 只.模型组、2-APB组、BAPTA-AM组单次腹腔注射APAP(300 mg/kg).注射 APAP 前 30 min,2-APB 组腹腔注射 2-APB(20 mg/kg),BAPTA-AM 组腹腔注射 BAPTA-AM(2.5 mg/kg).腹腔注射APAP 24 h后处死各组小鼠.测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;HE染色观察肝脏病理变化;透射电镜观察肝细胞中线粒体、内质网结构及MAMs变化;测定肝组织匀浆中的Ca2+水平;West-ern blot测定肝组织中线粒体融合蛋白 1(MFN1)、线粒体融合蛋白2(MFN2)、1,4,5-三磷酸肌醇受体1(IP3R1)、葡萄糖调节蛋白75(GRP75)蛋白表达水平.结果 与正常对照组相比,模型组小鼠血清 ALT 及 AST 水平有所升高(P<0.01),肝脏组织病理学可见肝细胞排列紊乱,并出现肝细胞变性、小叶中心性坏死;透射电镜示线粒体嵴断裂、消失,内质网肿胀断裂,MAMs数量增加;肝组织匀浆中Ca2+含量增加(P<0.01);MFN1、MFN2 蛋白表达降低(P<0.01),IP3R1 及GRP75 蛋白表达增加(P<0.01).与模型组相比,2-APB组和BAPTA-AM组小鼠血清 ALT、AST水平下降(P<0.01),肝脏病理变化明显改善,MAMs减少,肝组织匀浆中Ca2+含量减少(P<0.01),MFN1、MFN2 的蛋白表达水平上调(P<0.01),IP3R1 及GRP75 蛋白表达降低(P<0.01).结论 抑制IP3R-Ca2+途径可以保护APAP所致的肝损伤,其机制与降低肝脏Ca2+水平、减少MAMs数量、调节MAMs相关蛋白的表达有关.

本文主要探讨分化抗原簇36 (cluster of differentiation, CD36)在棕榈酸(palmitic acid, PA)诱导的星形胶质细胞凋亡中的作用.采用MTT法检测细胞活性、TUNEL法检测细胞凋亡,发现PA可使星形胶质细胞活性显著下降,凋亡显著增加.用流式细胞术检测星形胶质细胞对BODIPY FL C16的摄取,结果表明CD36在星形胶质细胞摄取PA过程中发挥关键作用.采用钙离子荧光染料和实时荧光记录系统检测细胞内钙离子浓度变化,发现PA进入细胞后可通过IP3受体(inositol trisphosphate receptor, IP3R)引起星形胶质细胞内钙释放和内质网钙衰竭.采用CM-H2DCFDA荧光染色方法检测细胞内氧自由基(reactive oxygen species, ROS)水平,发现PA可引起星形胶质细胞ROS水平显著增加.CD36抑制剂N-油酰基硫代琥珀酰亚胺 (sulfo-N-succinimidyloleate, SSO)可以减少PA的摄取及其诱导的星形胶质细胞钙超载和ROS水平升高.IP3R抑制剂二苯基硼酸-2-氨基乙酯(2-aminoethyl diphenylborinate, APB)可以抑制PA引起的钙超载和ROS水平升高.SSO、APB和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)对PA引起的星形胶质细胞活性下降均具有明显的保护作用.综上所述,CD36介导PA进入星形胶质细胞,进而引起钙超载和氧化应激,导致细胞凋亡.CD36可能成为保护星形胶质细胞的新靶点.

该文主要研究低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)促进牙髓间充质干细胞(dental pulp mesenchymal stem cells,DPSCs)成骨分化,以及瞬时受体电位M7(transient receptor potential melastatin 7,Trpm7)在其中发挥的作用.培养人DPSCs,流式细胞术检测其表面分子标志表达,阿利新蓝、茜素红及油红O染色检测其成软骨、成骨和成脂分化能力.ALP活性、ALP染色和茜素红染色观察LIPUS促成骨分化的能力.实时定量PCR检测LIPUS处理组与对照组成骨分化相关基因OPN、OCN、RUNX2表达的差异以及不同时间点两组Trpm7 mRNA表达水平的变化.ALP活性检测LIPUS及不同浓度Trpm7抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-aminoethoxy-diphenyl borate,2-APB)对成骨分化能力的影响.实验分为对照组、LIPUS组、LIPUS+-二甲基亚砜(DMSO)组和LIPUS+2-APB组,ALP和茜素红染色观察各组成骨分化能力,Western blot检测各组OPN、OCN和RUNX2的蛋白表达.结果显示,成功培养DPSCs,LIPUS处理后ALP和茜素红阳性染色明显增多,ALP活性增强(P＜0.01);OPN、OCN、RUNX2的mRNA表达水平显著增加(P＜0.05),LIPUS处理第2天和第5天Trpm7的mRNA表达水平有明显升高(P＜0.05).2-APB作用后明显下调ALP活性(P＜0.O1).LIPUS组、LIPUS+DMSO组与对照组相比,ALP和茜素红阳性染色以及OPN、OCN与RUNX2的蛋白表达均显著增加,而LIPUS+2-APB组较于LIPUS+DMSO组,ALP和茜素红染色以及OPN、OCN与RUNX2的蛋白表达明显降低.该研究结果提示,LIPUS能够促进DPSCs的成骨分化,且Trpm7在这一过程中发挥着重要作用.

目的 探讨M型瞬时受体电位通道7(TRPM7)在小鼠肝脏部分切除手术(PHx)术后的肝再生过程中表达变化和对肝细胞(L-02)增殖的影响.方法 采用小鼠70％ PHx肝再生模型,应用苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏病理及ELASA法检测术后不同时间(0、12、24、36、48、72 h,5、7d)时谷氨酸氨基转移酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)蛋白水平,应用Western blot法检测术后不同时间肝组织TRPM7和增殖细胞核抗原(PCNA)表达.用重组人白细胞介素-6(IL-6)诱导L-02细胞增殖,Western blot法检测TRPM7的表达变化.用2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB)阻断TRPM7通道,MTF法检测L-02细胞活力,Western blot法检测PCNA及磷酸化-信号转导因子和转录激活因子3(p-STAT3)的蛋白表达变化.结果 PHx术后可见组织增生,细胞体积变大,增生的肝细胞索排列有不同程度的紊乱,并伴有炎性细胞的浸润.ALT及AST酶蛋白水平均在PHx术后上升,并在12h达到高峰,而后逐渐降低至正常水平.小鼠肝组织中TRPM7的蛋白水平在PHx术后上升并且持续至72 h(P＜0.05),且与细胞增殖蛋白PCNA表达水平变化具有相关性.IL-6诱导L-02细胞活力增加,且TRPM7蛋白水平也上升.而阻断TRPM7通道之后,IL-6诱导的肝细胞活力上升被2-APB抑制,并且呈浓度依赖性,同时PCNA及p-STAT3水平也降低.结论 TRPM7在肝再生和肝细胞增殖期间表达增加,并且使用2-APB阻断TRPM7通道通过减少STAT3磷酸化来抑制肝细胞增殖,表明TRPM7在肝细胞增殖中起重要作用.

目的 探究瞬时受体电位通道M2(TRPM2)在动脉粥样硬化(AS)小鼠主动脉5-羟色胺高反应性中的作用.方法 将40只小鼠随机分为C57BL/6J普通饲料组(C57+nd)、C57BL/6J高脂饲料组(C57+hfd)、载脂蛋白E基因敲除(APOE-/-)普通饲料组(APOE-/-+ nd)和APOE-/-高脂饲料组(APOE-/-+hfd),喂养16周.比较4组小鼠主动脉TRPM2基因表达变化,运用血管环张力检测技术测定小鼠主动脉对5-羟色胺的反应性变化,观察TRPM2抑制剂处理对5-羟色胺反应性的作用.结果 APOE-/-+hfd组小鼠体质量、血糖和血脂显著增高,主动脉斑块形成明显,模型制备成功.APOE-/-+ hfd组小鼠主动脉TRPM2 mRNA(3.20±0.97)与蛋白(2.82±0.35)相对表达水平高于其他3组(mRNA:C57+ nd组0.92±0.42、C57+ hfd组0.74±0.37、APOE-/-+ nd组0.87±0.42;蛋白:C57+nd组1.39±0.23、C57+ hfd组1.35±0.34、APOE-/-+nd组1.22±0.23);APOE-/-+hfd组主动脉对5-羟色胺反应性增强,半最大效应浓度(EC5o)减小,且可被TRPM2抑制剂N-苯基邻氨基苯甲酸(ACA,1 μmol/L)和2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB,10 μmol/L)显著抑制[ACA抑制率:C57 +nd组(16.62±1.28)％、C57+hfd组(19.20±5.55)％、APOE-/-+ nd组(14.72±2.30)％、APOE-/-+ hfd组(38.15±1.13)％,F=12.58,P＜0.01;2-APB抑制率:C57+nd组(27.68±5.24)％、C57+ hfd组(28.75±3.67)％、APOE-/-+nd组(50.40±7.74)％、APOE-/-+hfd组(62.81±5.99)％,F=98.83,P＜0.01].结论 APOE基因敲除和高脂喂食处理可能通过上调TRPM2基因表达,增强TRPM2在5-羟色胺高反应性中的作用,促进小鼠AS的产生.

本研究报道了(口恶)拉戈利关键中间体(R)-[2-[5-(2-氟-3-甲氧基苯基)-3-[2-氟-6-(三氟甲基)苄基]-4-甲基-2,6-二氧代-3,6-二氢嘧啶-1(2H)-基]-1-苯乙基]氨基甲酸叔丁酯(1)的新合成路线.以3-氨基巴豆酸乙酯为原料,经氯甲酸苯酯活化后与(R)-叔丁基(2-氨基-1-苯乙基)氨基碳酸酯(4)缩合闭环得(R)-[2-[4-甲基-2,6-二氧代-3,6-二氢嘧啶-1(2H)-基]-1-苯乙基]氨基甲酸叔丁酯(6),6与2-氟-6-三氟甲基溴苄经缩合,得(R)-[2-[3-[2-氟-6-(三氟甲基)苄基]-4-甲基-2,6-二氧代-3,6-二氢嘧啶-1(2H)-基]-1-苯乙基]氨基甲酸叔丁酯(7),再经N-溴代琥珀酰亚胺溴化、与2-氟-3-甲氧基苯硼酸偶联等步骤制得1.从2到7的反应为原创路线,各中间体均未见文献报道.该工艺相对于原研工艺革除了易产生脱溴杂质的缩合反应步骤,原料价廉,并避免使用原研工艺中的危险性化学品,总收率由48％提高至71％,有利于工业化放大生产.

目的:探讨G蛋白偶联受体75(G-protein-coupled receptor 75,GPR75)介导的PLC/PKC信号通路在20-羟二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡中的作用.方法:采用慢病毒转染敲减乳鼠心肌细胞GPR75基因表达;RT-qPCR和Western blot检测GPR75 mRNA及细胞色素C(cyto?chrome C,CytC)和caspase-3蛋白表达;ELISA法检测三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP3)含量以及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)和NADPH氧化酶活性;Fluo-3/AM探针法检测细胞内Ca2+浓度;二氢乙啶(dihydroethidine,DHE)荧光探针检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的含量;TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:在培养的乳鼠心肌细胞中,GPR75在mRNA及蛋白水平均有表达,且20-HETE具有促进细胞内GPR75表达的作用(P<0.05);经20-HETE处理后,细胞内IP3含量升高,而敲减GPR75或应用磷脂酶C(phospholipase C,PLC)抑制剂U73122可显著阻断20-HETE的如上效应,细胞内IP3含量降低(P<0.05);敲减GPR75表达、应用PLC抑制剂以及IP3受体阻断剂2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯(2-aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)预处理,可抑制20-HETE诱导的细胞内Ca2+浓度升高(P<0.05);敲减GPR75表达、应用PKC抑制剂GF109203X或NADPH氧化酶抑制剂apocynin处理后,20-HETE诱导的细胞内ROS生成被抑制(P<0.05);同时,敲减GPR75表达可降低20-HETE作用的细胞中PKC、NADPH氧化酶的活性(P<0.05);最后,敲减GPR75表达、应用U73122或GF109203X,均可减少20-HETE诱导的心肌细胞凋亡率及凋亡相关蛋白CytC和caspase-3的表达(P<0.05).结论:GPR75介导的PLC/PKC信号通路通过引起心肌细胞钙超载、ROS生成增多,参与了20-HETE诱导的乳鼠心肌细胞凋亡进程.

目的:探究2-氨基乙基二苯基硼酸酯(2-APB)对小鼠皮肤创伤愈合的促进作用及其可能的机制.方法:将实验小鼠分为5组:Control组、二甲基亚砜(DMSO)组、低(50 mg/L)、中(100 mg/L)和高(200 mg/L)浓度2-APB组,在每只小鼠皮肤背部脊正中线两侧1 cm左右用圆形打孔器各打一个直径10 mm、深至皮下的皮肤创口,其中Control组仅用纱布包扎,不敷用各种药剂;DMSO组每天敷1 g DMSO/凡士林膏剂;2-APB组每天敷1 g相对应浓度的2-APB/凡士林膏剂,隔天拍照观察愈合情况,并于第21天取材,使用HE染色观察创面病理形态以及Western blot检测TRPM7、转化生长因子-β(TGF-β)、I型胶原(Collgen-I,Col-I)以及IL-1β 表达情况.结果:与Control组和DMSO组相比,不同浓度的2-APB均可显著促进小鼠皮肤伤口愈合(P<0.01),而DMSO组与Con-trol组之间创伤愈合率无明显差异.HE染色结果显示,与Control组和DMSO组相比,2-APB可增加创面胶原含量以及真皮层的厚度(P<0.01),而DMSO组与Control组之间无明显差异.同时,2-APB还可显著增加创面TGF-β和Col-I的表达,抑制TRPM7和IL-1β的表达.结论:不同浓度2-APB(50、100和200 mg/L)对皮肤创伤愈合有促进作用,其机制可能与抑制TRPM7有关.