目的:建立与人喉癌前病变发生相似的动物模型。方法:36只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组，每组18只，使用体积分数为1%的4-硝基喹啉-1-氧化物（4-nitroquinoline-1-oxide，4NQO）溶液涂抹实验组大鼠喉部黏膜至20周，生理盐水涂抹对照组大鼠喉部黏膜，涂抹方法及时间同实验组，肉眼及内镜观察喉部黏膜变化，组织学观察并确定病变形成。应用SPSS 22.0软件进行统计学处理。结果:实验组大鼠在第4、8、12、16、20周的食量、饮水量及体重均低于对照组，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。实验组大鼠喉部逐渐出现白色斑块、浅表溃疡、糜烂以及粟粒状颗粒，组织学表现过程为轻、中、重度不典型增生及原位癌，对照组大鼠喉黏膜符合正常上皮表现。实验组大鼠喉黏膜组织中Ki67阳性细胞数在第4、8、12、16、20周的个数分别为13.5±2.4、35.6±5.8、53.4±8.3、78.8±11.6、80.6±12.4，对照组均为0个，差异均有统计学意义（ t值分别为9.74、10.63、11.14、11.77、11.26， P值均<0.01）。 结论:4NQO涂抹法的致病过程和组织病理学特征与人相似，此方法制备喉癌前病变动物模型实用易行，结果可靠。

食管鳞状细胞癌（ESCC）是最常见的恶性肿瘤之一，预后较差。4-硝基喹啉-1-氧化物（4NQO）是一种水溶性的喹啉衍生物，在体内可以成功诱导鳞状上皮细胞癌的产生。建立并优化4NQO诱导小鼠ESCC形成的实验方法可以为ESCC研究提供更适宜的原位模型。

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌诱发食管炎症微环境在小鼠食管鳞状细胞癌发生过程中的作用。方法:采用数字表法随机将180只C57BL/6小鼠分为对照组、牙龈卟啉单胞菌组、4-硝基喹啉-1-氧化物（4NQO）组、4NQO+牙龈卟啉单胞菌组、4NQO+牙龈卟啉单胞菌+塞来昔布组和4NQO+牙龈卟啉单胞菌+抗生素（甲硝唑、新霉素、氨苄青霉素和万古霉素，ABC）组，每组30只。给予ABC饮水2周，之后8周，对照组和牙龈卟啉单胞菌组小鼠饮用纯水，其余4组给予含30 μg/ml 4NQO的饮水。第11～12周，牙龈卟啉单胞菌组、4NQO+牙龈卟啉单胞菌组、4NQO+牙龈卟啉单胞菌+塞来昔布组和4NQO+牙龈卟啉单胞菌+ABC组小鼠行上颌第2磨牙结扎；第11～34周，每周3次口腔感染牙龈卟啉单胞菌。第13～34周，4NQO+牙龈卟啉单胞菌+塞来昔布组和4NQO+牙龈卟啉单胞菌+ABC组小鼠分别接受塞来昔布和ABC处理。34周后处死小鼠，观察小鼠食管黏膜大体和形态学变化，采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和免疫组化检测小鼠食管组织中炎症和肿瘤相关分子表达。结果:34周时，4NQO单独处理未能显著增加小鼠食管黏膜乳头状增生病灶数、病变面积和食管壁厚度，单纯性增生病灶数（中位数为1.00个， P＜0.05）和轻、中度不典型增生病灶数（中位数为2.00个， P＜0.01）显著增加，小鼠食管组织中白细胞介素6（IL-6）、IL-1β、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、c-myc mRNA的表达量［分别为8.35（3.45，8.99）、6.90（2.01，9.72）、12.04（3.31，14.08）、2.21（1.80，3.04），均 P＜0.05］和磷酸化信号转导和转录激活因子3（pSTAT3）、Ki-67、磷酸化组蛋白2A变异体（pH2AX）蛋白的表达明显高于对照组。4NQO+牙龈卟啉单胞菌组小鼠食管黏膜病变显著，乳头状增生病灶数（中位数为2.00个）、病变面积（中位数为2.51 mm 2）和食管壁厚度（中位数为172.52 μm）最大，且均与对照组差异有统计学意义（均 P＜0.01），单纯性增生病灶数（中位数为1.00个， P＜0.05）和轻、中度不典型增生病灶数（中位数为1.00个， P＜0.01）显著增加，小鼠食管组织中IL-6、IL-1β、TNF-α、γ-干扰素（IFN-γ）、c-myc、cyclin D1 mRNA的表达量［分别为12.27（5.35，22.08）、13.89（10.04，15.96）、19.56（6.07，20.36）、11.37（8.23，20.07）、2.62（1.51，4.25）和4.52（2.68，7.83）， P＜0.05或 P＜0.01］和pSTAT3、环氧合酶2（COX-2）、Ki-67、pH2AX蛋白的表达均高于对照组。塞来昔布干预明显减少了4NQO联合牙龈卟啉单胞菌引起的黏膜病变面积（4NQO+牙龈卟啉单胞菌+塞来昔布组中位数为1.84 mm 2， P＜0.05）和浸润癌病灶数（4NQO+牙龈卟啉单胞菌+塞来昔布组中位数为0.00个， P＜0.01），降低了pSTAT3和pH2AX的表达。ABC干预明显减少了4NQO联合牙龈卟啉单胞菌所诱导的乳头状增生病灶数（4NQO+牙龈卟啉单胞菌+ABC组中位数为1.00个， P＜0.05）和浸润癌病灶数（4NQO+牙龈卟啉单胞菌+ABC组中位数为0.00个， P＜0.01），降低了pSTAT3的表达，但对pH2AX的表达无明显影响。 结论:在4NQO诱导的基因组损伤基础上，牙龈卟啉单胞菌能通过诱发炎症微环境促进食管鳞状细胞癌的发生，使用COX-2抑制剂或ABC可以通过阻断IL-6/STAT3信号通路，减轻食管组织的炎症反应，抑制食管鳞状细胞癌的发生。

目的 了解舌粘膜癌变中基因体甲基化的差异表达基因.方法 用浓度 50 mg/L的 4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)诱导C57BL/6 小鼠舌癌.基因芯片和甲基化DNA免疫沉淀测序(MeDIP-Seq)检测0 周、12 周、28 周(代表正常、癌前、癌变)的舌粘膜的基因表达和基因组DNA甲基化.在人正常舌粘膜和癌前病变组织中用qRT-PCR和飞行质谱检测泛素羧基水解酶CYLD的mRNA表达和基因体甲基化.结果 正常、癌前和舌癌3 组间基因体MeDIP-score(mean±s)分别是(5.58±14.80)、(5.79±13.35)、(5.83±17.25),差异无统计学意义(H=100.75,P>0.05).3 组间 145 个差异表达基因伴基因体甲基化改变.CYLD在人癌前病变组织中表达降低伴有基因体甲基化降低(P<0.05).结论 舌粘膜癌变有多个基因体甲基化异常的差异表达基因,CYLD在人癌前病变中低表达可能与基因体甲基化有关.

目的 研究舌黏膜癌变过程中基因组甲基化特征,探讨舌癌中DNA甲基化的规律.方法 用50 mg/L的4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)饮水诱导C57BL/6J小鼠舌黏膜癌变,分别取第0、12、28周的舌黏膜(分别代表正常、癌前病变和癌变)进行基因芯片检测和甲基化DNA免疫沉淀测序(MeDIP-Seq),在人舌黏膜组织和人舌癌细胞系中,用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和飞行质谱检测验证转化生长因子贝塔信号蛋白1(SMAD1)的表达和启动子的甲基化.结果 28周较12周和0周舌黏膜的胞嘧啶鸟嘌呤岛(CGI)甲基化水平均升高,12周时启动子甲基化水平高于0周.在0、12和28周期间,208个差异表达基因与启动子中的差异甲基化呈负相关.与正常黏膜相比,细胞系中SMAD1的mRNA上调,同时启动子甲基化水平降低.结论 舌黏膜癌变中伴随DNA甲基化修饰异常,舌癌中SMAD1高表达伴启动子低甲基化.

目的:利用含高浓度4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)的水与固体饲料相结合方式,旨在探讨短时间构建高生存率舌癌小鼠模型的方法.方法:将12只BALB/c小鼠随机分为对照组(H2O,n=4)、中剂量实验组(250 μg/mL 4NQO,n=4)和高剂量实验组(300 μg/mL 4NQO,n=4),固液交替喂养,对小鼠的外貌、体质量和舌黏膜状态进行观察并记录,12周后处死小鼠,取材进行HE染色.结果:研究发现中剂量组的小鼠均造模成功,其中3只小鼠的舌黏膜出现乳头状样新生物,并且HE染色发现癌巢及角化珠的病理特征,余1只小鼠舌黏膜仅出现白斑样改变,病理表现为舌黏膜上皮重度异型增生.而高剂量组中的小鼠在造模过程中全部死亡.结论:250 μg/mL4NQO能在12周内成功诱导出舌癌小鼠模型,并能保证较高的生存率.

目的 研究核因子E2相关因子(Nrf2)在4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)诱导的小鼠舌癌发生中对增殖和分化的影响.方法 野生型(WT)与Nrf2基因敲除(Nrf2-/-)C57BL/6J小鼠各36只,其中阴性对照组10只,饮用纯净水,4NQO组26只,饮用4NQO水溶液(50μg/ml)16周.24周末处死小鼠,取舌组织用于病理学分析、Brdu和免疫组化(IHC)染色.通过生物信息学分析Nrf2与KLF4的相关性.结果 构建了4NQO诱导的小鼠舌癌模型,并发现Nrf2-/-小鼠的舌癌发生率和Brdu染色的阳性细胞数明显高于WT小鼠.IHC染色显示,Nrf2-/-小鼠舌组织中分化相关基因KLF4、Loricrin、CK5的表达显著低于WT小鼠.在舌癌和正常组织中Nrf2的表达与KLF4成显著正相关.结论 敲除Nrf2可以促进舌癌发生和细胞增殖,并抑制癌变过程中的细胞分化.

基于血清代谢组学探讨六君子汤治疗 4-硝基喹啉-N-氧化物(4-nitroquinoline-N-oxide,4NQO)诱导食管癌模型小鼠的作用机制.选取 35～45 日龄小鼠 100 只,随机分为空白组、模型组、六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组、六君子汤高浓度组.除空白组外,其余小鼠自由饮用 100 μg·mL-1 的 4NQO溶液 16 周,构建食管癌小鼠模型.六君子汤低、中、高浓度组分别用药物质量分数为 18.2、36.4、54.6 g·kg-1的定制饲料喂养,称量各组小鼠体质量和脏器质量计算脏器指数;采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察各组小鼠食管组织病理改变;超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chroma-tography-mass spectrometry,UPLC-MS/MS)进行小鼠血清样本的代谢物采集,筛选潜在生物标志物及分析相关代谢通路.结果显示,模型组小鼠脾脏、胃脏器指数明显降低,肺、食管、肾的脏器指数明显升高,与模型组相比,六君子汤各浓度脏器指数无明显变化;HE结果显示,六君子汤能改善小鼠食管癌细胞浸润性生长及癌变情况;血清代谢组学分析筛选出 9 种六君子汤干预食管癌小鼠的潜在生物标志物,分别为尿刊酸(urocanic acid,UCA)、1-油酰甘油磷酸丝氨酸(1-oleoylglycerophosphoserine)、11-脱氧前列腺素E1(11-deoxy prostaglandin E1)、多肽链Leu-Glu-Lys-Glu、(±)4-羟基-5E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z-二十二碳六烯酸[(±)4-HDHA]、脲基琥珀酸(ureidosuccinic acid)、泛酸[(2R)-2,4-dihydroxy-3,3-dimethylbutanoic acid]、犬尿酸(kynurenic acid)和双环前列腺素E2(bicyclo prostaglandin E2),涉及的通路包括组氨酸、嘧啶、丙氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、泛酸和色氨酸代谢及辅酶a生物合成等.六君子汤对 4NQO诱导的食管癌模型小鼠发挥治疗作用,其作用机制可能与调节小鼠体内氨基酸代谢、炎症反应和免疫功能有关.

目的:建立与人舌黏膜鳞癌相近的大鼠舌癌模型,并研究其发生发展过程中双泛素FAT10的表达变化.方法:实验组SD雄性大鼠使用含有40μg/mL的4-硝基喹啉-1-氧化物(4-NQO)饮水喂养,分别在8、16、24周时取大鼠舌体中病灶部位组织,行组织学观察;对照组大鼠正常饮用水喂养24周.使用免疫组织化学法检测FAT10、p53在舌黏膜不同程度病变组织中的表达.结果:大鼠舌黏膜经过4-NQO不同时间的刺激,可发展成不同程度的上皮异常增生以及鳞状细胞癌.从正常黏膜到不同程度的不典型增生以及最后高分化的鳞癌中,FAT10的表达强度呈逐渐增高趋势;p53在正常黏膜为阳性表达,在不典型增生中表达升高,而在癌组织中表达降低.结论:在舌癌的发生、发展过程中,FAT10可能发挥了癌基因的作用.

目的:建立小鼠舌癌模型,筛选诱癌率高及模拟人类发病的舌癌模型.方法:以Babl/c小鼠为实验对象,通过单独和联合应用4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)和槟榔碱(Arecoline)来诱发舌癌,以涂布法采用质量浓度5 mg/mL 4NQO;自然饮水法采用质量浓度20、50、100 μg/mL 4NQO,采用质量浓度300 μg/mL Arecoline及联合质量浓度100 μg/mL 4NQO和质量浓度300 μg/mL Arecoline.各组诱癌剂饮用至16或14周时,改为饮用灭菌自来水观察至第40周,于诱癌的不同节点选取状态不佳,体质量下降超过20%的小鼠处死,取其舌头、食管、胃、肝、脾脏组织标本,通过肉眼和组织学观察肿瘤发生发展情况.结果:自然饮水法质量浓度50 μg/mL 4NQO组70.0%(7/10)为轻度不典型增生,40.0%(4/10)为中度不典型增生,20.0%(2/10)为重度不典型增生,10.0%(1/10)为原位癌;联合应用质量浓度为100 μg/mL 4NQO和质量浓度为300 μg/mL Arecoline组10.0%(1/10)为轻度不典型增生, 20.0%(2/10)为中度不典型增生,40.0%(4/10)为重度不典型增生,20.0%(2/10)为原位癌,50.0%(5/10)为浸润癌,30.0%(3/10)淋巴结转移,20.0%(2/10)食管不典型增生.结论:质量浓度50 μg/mL的4NQO饮用16周继续观察至40周是舌癌癌前病变动物模型建立的理想时间;质量浓度为100 μg/mL的4NQO饮用14周后改饮用自来水至40周癌变发展缓慢、典型,发病率高,组织病理学特征与人相似.联合运用低剂量Arecoline和4NQO是诱癌率最高的建模方法,且可观察到颈部淋巴结转移及食管病变,但癌变进展快,不宜作为模拟人舌癌发病的模型.