目的:探讨人类白细胞抗原(HLA)抗体介导新生儿同种免疫性血小板减少症(NAIT)患儿的实验室检测和临床诊治经过，并进行相关文献复习。方法:选择2019年4月25日，广西壮族自治区妇幼保健院收治的1例日龄为29 d的男性NAIT新生儿为研究对象。采用回顾性研究方法，收集该例患儿的临床病例资料，并对其病史、相关实验室检查和基因检测结果进行分析。以"新生儿同种免疫性血小板减少症""人类白细胞抗原""neonatal alloimmune thrombocytopenia""human leukocyte antigen""HLA"为关键词，在中国知网数据库、万方数据服务知识平台、PubMed数据库中检索HLA抗体介导NAIT的相关文献。检索时间设定为以上数据库建库至2021年9月22日。分析并总结纳入文献所报道的介导NAIT的HLA抗体特异性。本研究符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求。结果:①病史采集：患儿因"血小板减少致全身淤点、淤斑"于2019年3月30日被送至广西壮族自治区妇幼保健院就诊，头颅CT检查结果证实患儿颅内出血。②主要血清学检测：患儿及其母亲ABO血型均为A型，父亲为AB型；三者CD36抗原均呈阳性。患儿母亲血清标本中检出HLA抗体，特异性为HLA-A33、-B58。③相关基因检测：患儿及其父母的人类血小板抗原( HPA)-1~21bw基因分型分别为 HPA-1aa/2aa/3bb/4~14aa/15aa/16~21aa、 HPA-1aa/2aa/3ab/4~14aa/15ab/1621aa、 HPA-1aa/2aa/3ab/4~14aa/15ab/16~21aa； HLA基因分型分别为 HLA- A*11：01，33：03； B*38：02，58：01、 HLA- A*24：02，33：03； B*55：02，58：01、 HLA- A*11：01，11：01； B*15：02，38：02。④诊断及输血治疗：根据实验室检查结果及临床表现，本例患儿被诊断为HLA-A33、-B58抗体介导NAIT。患儿接受30 mL配合性血小板输注24 h后，血小板计数由13×10 9/L上升至100×10 9/L，出血症状明显改善。⑤文献复习结果：符合本研究要求的文献为25篇，纳入研究的HLA抗体介导NAIT患儿为45例。其中，由HLA抗体、HLA+HPA抗体、HLA+血小板自身抗体、HLA+人类中性粒细胞抗原(HNA)+HPA抗体、HLA+RhD抗体介导者分别为33、8、2、1、1例；常见HLA抗体依次为HLA-B40、-A2、-A19、-B22、-A11、-B5、-B27抗体。 结论:本研究确诊NAIT新生儿的NAIT由HLA-A33、-B58抗体介导。对于临床上发现的NAIT患儿，除考虑由CD36、HPA抗体介导外，还应对HLA抗体介导的NAIT给予重视。

目的:探讨重度吸入性损伤后气管切开患者气道呼出气冷凝液（EBC）中多种细胞因子水平变化及其临床意义。方法:采用前瞻性研究方法，选择2021年5月至2022年8月南京医科大学附属苏州医院烧伤整形科收治的32例烧伤合并重度吸入性损伤患者；选择同期20例健康志愿者作为对照。收集患者伤后12 h EBC，同时收集健康对照者样本，采用液相芯片技术测定EBC中27种细胞因子水平，其中包括肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素（IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17）6种炎症细胞因子；收集患者伤后12 h血浆，同时收集健康对照者血浆，采用液相芯片技术检测上述6种炎症细胞因子水平，分析其与EBC中含量的差异；于患者伤后12 h及3、7、14、21 d收集血浆和EBC，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TNF-α水平。结果:最终32例患者纳入分析，烧伤总面积（40±16）%总体表面积（TBSA）；入院时间为伤后（4.2±2.3）h。① EBC中27种细胞因子：重度吸入性损伤患者巨噬细胞炎症蛋白-1β（MIP-1β）、IL-6、IL-5、IL-2、IL-1β、IL-8、IL-10、IL-15、IL-9、γ-干扰素（IFN-γ）、IL-1受体拮抗剂（IL-1ra）、TNF-α、嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）、干扰素诱导蛋白-10（IP-10）、巨噬细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）18种细胞因子水平均较健康对照者明显升高，其中Eotaxin在健康对照者EBC中未检出；粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、趋化因子配体5（CCL5/RANTES）、IL-13、IL-4、MIP-1α 5种细胞因子在重度吸入性损伤及健康对照者EBC中均未检出；重度吸入性损伤患者EBC中血管内皮生长因子（VEGF）和IL-12 p70较健康对照者轻度下降，IL-7和IL-17轻度升高，但差异均无统计学意义。②血浆中6种炎症细胞因子：重度吸入性损伤患者IL-6和IL-8水平均较健康对照者明显升高〔IL-6（ng/L）：18.51（10.87，26.21）比0.22（0.10，0.36），IL-8（ng/L）：10.75（8.58，18.79）比1.06（0.81，2.14），均 P<0.01〕；TNF-α、IL-1β、IL-10在重度吸入性损伤患者血浆中轻度升高，IL-17轻度下降，但与健康对照组比较差异无统计学意义。而同期采集的EBC中，重度吸入性损伤患者TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10这5种炎症细胞因子均较健康对照者明显升高〔TNF-α（ng/L）：16.42（12.57，19.21）比7.34（6.11，8.69），IL-1β（ng/L）：15.57（10.53，20.25）比0.99（0.67，1.41），IL-6（ng/L）：13.36（9.76，16.54）比0.70（0.42，0.85），IL-8（ng/L）：1 059.29（906.91，1 462.37）比10.36（8.40，12.37），IL-10（ng/L）：2.69（1.54，3.33）比1.54（1.18，2.06），均 P<0.05〕。③血浆和EBC中TNF-α动态变化：重度吸入性损伤患者EBC中TNF-α水平整体低于血浆。血浆TNF-α水平随伤后时间延长逐渐升高，3 d时明显高于健康对照者〔ng/L：30.38（24.32，39.19）比22.94（17.15，30.74）， P<0.05〕，14 d达到高峰，随后回落；而EBC中TNF-α水平于伤后12 h即较健康对照者明显升高〔ng/L：15.34（11.75，18.14）比6.99（6.53，7.84）， P<0.01〕，3 d即达到峰值，随后逐渐回落。 结论:重度吸入性损伤患者EBC中存在多种细胞因子表达变化，其中包括TNF-α在内的多种炎症细胞因子变化较血浆中的变化更敏感，可以应用于吸入性损伤的病情监测评估。

目的:构建并制备表达人CD137L蛋白的5型重组腺病毒（Ad5-CD137L），并初步研究其在小鼠中的抗肿瘤免疫效果。方法:将密码子优化CD137L蛋白的表达基因插入pDC316穿梭质粒,并与pBH-GloxΔE1,3Cre腺病毒骨架质粒，共同转染HEK293细胞，构建Ad5-CD137L种子。扩增并纯化后，对所得Ad5-CD137L重组腺病毒的插入目的基因与蛋白表达情况进行鉴定。检测Ad5-CD137L在C57BL/6小鼠体内的特异性细胞免疫和抗肿瘤免疫水平。结果:成功地构建了Ad5-CD137L，PCR和测序结果表明插入目的基因与构建理论值相符。免疫荧光法鉴定Ad5-CD137L能在HEK293细胞中表达目的蛋白，经Western印迹法鉴定该目的蛋白的相对分子质量约为25 000，与理论值相符。与空腺病毒相比，Ad5-CD137L能显著诱导小鼠特异性IFN-γ（ t=6.315， P=0.003），抗肿瘤免疫效果更显著（ t21 d=8.275， t29 d=4.492； t39 d=5.101， P均<0.001）。 结论:成功构建了Ad5-CD137L，该重组病毒具有特异性细胞免疫原性和抗肿瘤免疫效果。

目的 探讨体外高表达肿瘤坏死样因子配体1A (TL1A)的巨噬细胞对肝星状细胞(HSCs)的活化、增殖的影响. 方法 分离、分化并活化C57BL/6野生型(WT)与髓系高表达TL1A的转基因(M-Tg)小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMMs)和腹腔巨噬细胞(PMs);并分离WT小鼠原代HSCs;收取活化后的巨噬细胞培养上清液为条件培养基(CM)干预HSCs,应用免疫荧光法及real-time Q-PCR方法检测HSCs的活化、CCK-8法及BrdU法检测HSCs增殖情况,酶联免疫吸附试验法测定各组巨噬细胞培养上清液中白细胞介素1β和血小板衍生生长因子(PDGF) BB的含量. 结果 应用BMMs来源的CM干预HSCs,免疫荧光法分别检测第2、4、6天α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达量,第2天和第6天时各组间差异无统计学意义,P＞0.05;第4天时CM/Tg组明显高于CM/WT组,P＜0.01;PMs来源的CM干预HSCs的检测结果与上述趋势一致.应用BMMs来源的CM干预HSCs,real-time Q-PCR法分别检测第2、4、6天α-SMA mRNA表达量,第2天时各组差异无统计学意义,P＞0.05;第4、6天时α-SMA mRNA进一步升高,且CM/Tg组明显高于CM/WT组,P＜0.05;PMs来源的CM培养HSCs的检测结果与上述趋势一致.CCK-8法和BrdU法检测HSCs增殖速度结果显示CM/Tg组明显高于CM/WT组,P＜0.01;应用PMs来源的CM干预HSCs,检测结果与上述趋势一致.对于BMMs、脂多糖+干扰素γ/Tg组培养上清液中白细胞介素1 β和PDGF-BB表达水平显著高于脂多糖+干扰素γ/WT组,P＜0.01;PMs的培养上清液检测结果与上述趋势一致. 结论 高表达TL1A的巨噬细胞可能通过IL-1β和PDGF-BB分泌增加促进HSCs的活化与增殖.

免疫检查点通过双信号机制调控肿瘤微环境中最主要的免疫细胞——T淋巴细胞的免疫应答活性而发挥作用.这些分子主要分为两类,一类是免疫球蛋白(immune globulin,Ig)超家族,另一类是肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)配体/受体对.随着研究的深入,新的免疫检查点靶点不断涌现,其中,CD40、CD27、4-1BB、OX40及VISTA等在实体瘤治疗中具有良好前景.负向免疫检查点(negative checkpoint regulators,NCRs)也逐渐受到重视,更多新兴免疫检查点分子正在临床试验阶段,低反应率及耐药性是新靶点研究的瓶颈.本文就免疫检查点靶点的特点、部分研究中的免疫检查点新靶点、新兴免疫检查点靶点研究前景与挑战等热点问题作一综述.

典型的猕猴 (Macaca multta) 社群为多雄多雌型,雌性留群并形成母系单元,雄性个体多在亚成年或成年期离开其出生群,而群内成年雄性多为外部迁入个体.雄性的迁出被认为可降低近亲繁殖或提升繁殖成功.然而,诸多野外数据显示,少数本群出生雄性个体会居留于出生群一年或数年.尽管驱动雄性离群的因素较复杂 (如社会关系、近亲回避、繁殖成功),但繁殖成功的差异可能是驱动雄性离群的主导因素.为探讨居留于出生群是否影响雄性的繁殖成功,于2010年3月至2014年1月,在太行山猕猴国家级自然保护区王屋山地区,以一群野生太行山猕猴为研究对象,采用非损伤取样法并结合分子生物学方法,分析了群内出生和迁入成年雄性个体的繁殖成功 (以子代数量评估) .研究发现: (1) 群内51只子代个体中有36只个体可以匹配到其遗传学父亲; (2) 4个迁入雄性繁衍了34个子代,仅1只群内出生雄性ZM繁衍了2只子代,但群内出生的雄性BB未匹配到子代.本研究提示,迁入雄性较本群出生雄性的繁殖成功较高,即迁移有助于繁殖成功的提升.

目的:观察4-1BB配体(4-1BBL)-siRNA对HL-60细胞细胞因子分泌的影响;对比观察4-1BBL基因被干扰前后,HL-60细胞培养上清液对淋巴细胞增殖、凋亡诱导作用的影响;探讨肿瘤细胞的免疫逃逸机制.方法:采用化学合成法人工合成靶向人4-1BBL基因的siRNA,脂质体转染法转染HL-60细胞;半定量RT-PCR和流式细胞术检测干扰前后HL-60细胞4-1BBL-mRNA和表面蛋白的表达水平;ELISA法检测4-1BBL干扰前后HL-60细胞培养上清液转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)分泌水平.密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,收集4-1BBL干扰后的HL-60细胞培养上清液与体外分离的人淋巴细胞共培养,MTT法检测机体淋巴细胞增殖水平;流式细胞术检测淋巴细胞凋亡比率的变化.结果:靶向4-1BBL-siRNA转染HL-60后,4-1BBL-mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.01);ELISA结果显示,4-1BBL基因被干扰后,HL-60细胞培养上清液中TGF-β和VEGF分泌水平明显降低(P<0.01和P<0.05).与干扰前比较,干扰后的HL-60细胞培养上清液对机体淋巴细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用均下降(P<0.05).结论:HL-60细胞高表达的4-1BBL信号具有反向调节作用,通过促进其分泌TGF-β、VEGF,使肿瘤细胞培养上清液对淋巴细胞活性的抑制作用增强并促进淋巴细胞凋亡,可能是肿瘤细胞逃避宿主免疫监视的机制之一.

目的 构建以B细胞成熟抗原(BCMA)的特异性配体APRIL为抗原结合区的BCMA-CAR,并验证该BCMA-CAR修饰的T细胞(BCMA-CAR-T)对多发性骨髓瘤的作用.方法 以BCMA的特异性配体APRIL为抗原结合区、4-1BB为共刺激分子而构建BCMA-CAR,体外实验验证BCMA-CAR-T细胞对BCMA+骨髓瘤细胞系和原代骨髓瘤细胞的特异性细胞毒作用.此外,构建BCMA+骨髓瘤小鼠模型并评价BCMA-CAR-T细胞的体内抗肿瘤效应.结果 BCMA-CAR-T细胞能特异性杀伤BCMA+骨髓瘤细胞系(当效靶比为1:4时,BCMA-CAR-T细胞组中BCMA+细胞几乎检测不到)和骨髓瘤患者的骨髓单个核细胞(BCMA-CAR-T和空载组T细胞的残余细胞比例分别为16.00％和66.85％,P=0.003),并伴随显著的脱颗粒效应(CAR-T和空载组T细胞与MM1.S、H929、U266共培养的脱颗粒水平分别为33.30％对5.62％、16.97％对2.95％、25.87％对2.97％,P值均＜0.001)和细胞因子释放(P值均＜0.01).在治疗人BCMA+骨髓瘤小鼠移植模型中,BCMA-CAR-T细胞可显著延长小鼠的生存期(BCMA-CAR-T和空载组T细胞治疗小鼠的中位生存期分别为87.5 d、67.5 d,P＜0.001).结论 以APRIL为抗原识别区的BCMA-CAR-T细胞有望成为治疗BCMA+多发性骨髓瘤的理想策略.

目的:探讨IL-15、IL-21和4-1BBL组成的不同培养体系,对体外扩增的NK-92细胞毒活性的影响.方法:以三质粒系统包被携带IL-15、IL-21和4-1BBL基因的慢病毒,用慢病毒感染的方式制备2组饲养层细胞;筛选后经MMC处理分5组体外扩增NK-92细胞(NK-92组:NK-92细胞;K562组:K562细胞+ NK-92细胞;IL-15组:表达IL-15和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞;IL-21组:表达IL-21和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞;IL-15+ IL-21组:表达IL-15和4-1BBL的K562细胞、表达IL-21和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞);通过CCK-8法,乳酸脱氢酶释放法检测体外扩增后NK-92细胞的细胞毒性;ELISA检测NK-92细胞上清中IFN-γ的水平,以评估NK-92细胞的抗肿瘤效应.结果:两组转染后的HEK293FT细胞以及慢病毒感染的K562细胞携带绿色荧光,两组饲养层细胞成功表达目的基因;各组饲养层细胞都能刺激NK-92细胞大量增殖;随着效靶比的逐渐增加,IL-15组扩增后的NK-92细胞毒性显著高于其余各组(P＜0.05);效靶比为5∶1和10∶1时,IL-15组NK细胞IFN-γ的释放量显著高于其余各组(P＜0.05).结论:膜结合型IL-15、IL-21与4-1BBL联合都能引起NK-92细胞的大量增殖,且IL-15与4-1BBL联合运用扩增的NK-92细胞有更强的杀伤肿瘤细胞的能力.

4-1BB和4-1BB配体(4-1BBL),又被称为CD137和CD137配体,分别属于肿瘤坏死因子(TNF)受体和配体家族的成员.4-1BBL与4-1BB相互作用可以激活T细胞免疫应答.因此,4-1BBL一直在抗肿瘤免疫应答中发挥经典的免疫共刺激分子作用.近期研究发现,4-1BBL在肿瘤细胞中另有其他的生物学功能,但4-1BBL在胃癌进展过程中的功能尚不明确.本文探讨了4-1BBL在人胃癌细胞中的生物学功能和分子作用机制.首先,通过检索TCGA和Kaplan Meier plotter数据库发现,4-1BBL在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P＜0.001),且4-1BBL的高表达与胃癌的不良预后正相关(P＜0.05).细胞生物学的结果显示,敲除4-1BBL明显抑制胃癌细胞的增殖(P＜0.05)、侵袭和迁移(P＜0.05),促进胃癌细胞的凋亡(P＜0.05);另外,蛋白质免疫印迹结果表明,敲除4-1BBL可使β-联蛋白、c-Myc和细胞周期蛋白Dl(cyclin D1)的蛋白质表达水平下降,抑制Wnt/β-catenin信号通路.相反,过表达4-1BBL则显著促进胃癌细胞增殖(P＜0.05)、侵袭和迁移(P＜0.05),减少胃癌细胞的凋亡(P＜0.05);且过表达4-1BBL促进β-联蛋白(β-catenin)、c-Myc和细胞周期蛋白D1的蛋白质表达,激活Wnt/β-catenin信号通路.综上所述,4-1BBL可通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进入胃癌细胞的增殖和迁移.