-
高压电场不可逆电穿孔抑制人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-氟尿嘧啶生长的作用
编辑人员丨1周前
目的:观察不可逆电穿孔技术对5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药的人肝癌细胞(BEL-7402/5-Fu,购自南京凯基生物科技发展有限公司)生长、细胞膜完整性以及荷瘤鼠肿瘤生长的影响。方法:细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率。透射电镜、扫描电镜拍照以及乳酸脱氢酶(LDH)检测来评价细胞膜完整性。构建BEL-7402/5-Fu细胞裸鼠异种移植瘤模型来评价体内抗肿瘤效果。采用单因素方差分析。结果:高压电场显著抑制BEL-7402/5-Fu细胞生长并且呈场强依赖性,高压电场处理24 h后,500、750、1 000、1 500、2 000 V/cm组的细胞存活率为(89.56±12.37)%、(66.29±7.47)%、(29.19±3.62)%、(17.66±1.64)%、(11.74±1.08)%( F=77.730, P<0.01)。扫描电镜以及透射电镜结果表明,在场强为1 000 V/cm时,实验组的细胞膜完整性以及细胞器结构损伤严重。高压电场500、750、1 000、1 500、2 000 V/cm各组的细胞培养基上清中LDH分泌水平分别为(35.33±8.74)、(64.33±7.67)、(144.02±12.16)、(194.33±5.13)、(207.33±11.01)、(213.33±20.81) U/L( F=122.690, P<0.01),呈场强依赖性。高压电场能够抑制BEL-7402/5-Fu荷瘤鼠肿瘤的生长,模型组的瘤重为(1.51±0.32) g,高压电场治疗组小鼠的瘤重为(0.28±0.05) g( F=619.870, P<0.01),抑瘤率达81.45%。 结论:高压电脉冲能显著抑制BEL-7402/5-Fu细胞生长。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
美洲大蠊提取物体外对肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU自噬和侵袭转移的影响
编辑人员丨2024/2/3
目的:探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3和脱脂膏对肝癌耐5-氟尿嘧啶细胞(BEL-7402/5-FU)自噬和转移侵袭能力的影响.方法:以肝癌敏感细胞BEL-7402和肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU作为实验对象,给予索拉菲尼、CⅡ-3和脱脂膏处理,检测自噬标志蛋白的生成,同时检测细胞中自噬相关因子和侵袭转移相关因子的水平以及细胞侵袭转移能力的变化.结果:耐药细胞组中p62蛋白低表达,给予阳性药索拉菲尼、CⅡ-3和脱脂膏后,细胞中p62蛋白表达量明显升高.和敏感细胞相比,耐药细胞中LC3B生成增多,给予CⅡ-3后LC3B生成减少.CⅡ-3和脱脂膏给药组均能明显抑制自噬和侵袭转移的部分相关因子的表达,包括降低ATG5、PIK3C3、BECLIN、LC3B、MMP-9、Akt、4EBP1 mRNA表达.划痕试验结果显示,相比于敏感细胞,耐药细胞具有更强的侵袭转移能力,给予索拉菲尼和CⅡ-3作用后均可显著抑制细胞的侵袭转移,而脱脂膏则无显著的抑制效果.结论:肝癌耐药细胞具有很强的自噬和侵袭转移能力,而美洲大蠊提取物CⅡ-3和脱脂膏体外均能明显抑制耐药细胞的自噬和侵袭转移,但仅能影响部分相关因子.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2024/2/3
-
沉默MK基因增强肝癌Bel/Fu细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性及可能的机制
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究沉默中期因子(midkine,MK)基因表达后人肝癌氟尿嘧啶(fluorouracil,Fu)耐药细胞株Bel/Fu对5-Fu敏感性的变化,并初步探讨可能的作用机制.方法:采用脂质体瞬时转染法将MK-siRNA转入Bel/Fu细胞,分别应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测MK mRNA及蛋白的表达水平.MK-siRNA联合5-Fu处理后,分别采用MTT及FCM法检测肝癌Bel/Fu细胞的增殖抑制率及凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,Akt)信号通路中相关蛋白磷酸化PI3K、磷酸化Akt和核因子-KB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)及凋亡相关蛋白Bcl-2、survivin和caspase-3的表达水平.结果:MK-siRNA转入Bel/Fu细胞后,MK mRNA和蛋白的表达水平均明显下调(P值均< 0.05).MK-siRNA转染组5-Fu对Bel/Fu细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)为(472±21)μg/mL,明显低于空白对照组的(2 035±34) μg/mL (P<0.05);细胞凋亡率为(32.10±3.61)%,明显高于空白对照组的(7.90±0.91)%(P<0.01);PI3K/Akt信号通路中相关蛋白p-PI3K、p-AKT、NF-κB、Bcl-2和survivin蛋白的表达水平均明显下调(P值均<0.05),而凋亡蛋白caspase-3表达明显上调(P<0.05).结论:siRNA沉默MK基因表达后可增强肝癌Bel/Fu细胞对5-Fu的敏感性,其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路的活化相关.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
Artemis影响人肝癌细胞BEL-7402/5-FU化疗药物敏感性的研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨Artemis对人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU化疗药物敏感性的影响及其可能机制.方法 将pS-GU6/ GFP/Neo/ shArtemis干扰质粒转染人肝癌耐药细胞BEL-7402/5-FU(shArtemis组),通过Real-time PCR法检测P-gp基因表达水平变化;MTr法检测shArtemis组细胞对5-氟尿嘧啶、丝裂霉素及索拉菲尼的IC50值和RI值;利用Western-blot法检测p-Artemis和ATM蛋白水平表达变化;使用ATM抑制剂KU55933联合丝裂霉素作用细胞48 h,Western-blot法观察ATM、γ-H2AX和Artemis蛋白水平表达变化.结果 与对照组比较,shArtemis组的P-gp mRNA表达水平下降(P<0.05),且对5-氟尿嘧啶、丝裂霉素和索拉菲尼的敏感性增加,IC50值和RI值均降低(P<0.05).shArtemis组的p-Artemis与ATM蛋白表达水平降低(P<0.05);KU55933联合丝裂霉素作用细胞后,有效减少ATM蛋白的表达(P<0.05),同时γ-H2AX蛋白表达量增加(P<0.05),但Artemis蛋白表达无明显变化(P>0.05).结论 靶向干扰Artemis的表达能够增强细胞BEL-7402/5-FU对化疗药物的敏感性.此效应可能与Artemis作为BEL-7402/5-FU DNA损伤修复的分子开关,进而通过影响ATM参与DNA损伤修复有关.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
核磷蛋白在肝癌细胞多药耐药中的作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨核磷蛋白(NPM)在肝癌细胞多药耐药中的作用及其机制.方法 通过质粒转染建立稳定的高表达NPM的肝癌细胞株:HepG2/NPM和SMMC7721/NPM细胞株,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞对化疗药物的半数抑制浓度(IC50)值;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;Western blot和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测各基因的蛋白和mRNA表达.结果 与亲本细胞比较,NPM高表达的细胞对化疗药物的耐药性增加,阿霉素(ADM:8.31±0.89比0.38±0.13,P=0.000;14.84±1.61比1.69±0.31,P=0.001),顺铂(DDP:4.23±1.18比1.33±0.29,P=0.047;8.42±0.85比3.03±0.55,P=0.000),5-氟尿嘧啶(5-Fu:20.75±1.02比7.97±0.97,P=0.001;16.28±1.64比5.85±1.04,P=0.000),细胞的迁移和侵袭能力增强,且多药耐药基因1(MDR-1:3.85±0.67比0.97±0.22,P=0.043;4.33±0.77比1.04±0.27,P =0.021),多药耐药相关蛋白1(MRP-1:3.76±1.04比1.01±0.21,P=0.033;4.75±0.88比1.01 ±0.17,P=0.028)及P-糖蛋白(P-gp:2.06±0.27比1.04±0.19,P=0.000;3.47±0.93比1.02±0.17,P=0.000)的表达均增加.结论 NPM可以增强肝癌细胞对化疗药物的耐药性以及迁移和侵袭能力,其机制可能与上调MDR-1/P-gp信号通路的表达相关.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
长链非编码RNA在肝癌化疗耐药中的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是全球最常见的消化系统恶性肿瘤之一,严重威胁人类生存.全球每年新发肝癌病例约74.83万,死亡病例约69.59万,据估计有一半新发和死亡病例发生在中国[1].目前,肝癌治疗的主要手段有根治性治疗(手术切除、肝移植、冷冻治疗、射频消融、肝动脉结扎及栓塞术)和姑息性化疗.由于肝癌早期发病隐匿,大部分患者临床确诊已出现转移[2],而晚期患者不能通过根治性治疗获益,只能进行姑息治疗.因此,化疗成为中晚期肝癌治疗的主要手段之一[3].近年来,越来越多的化疗药物被用于中晚期HCC的治疗.临床应用单一化疗药物如索拉非尼(Sorafenib)治疗肝癌效果不显著,采用多种化疗药物的联合化疗,如顺铂(Cisplatin)联合阿霉素(Doxorubicin)和5-氟尿嘧啶(5-FU)以及干扰素(INF),可以显著提高晚期HCC的生存率[4],但容易产生化疗耐药[5].目前,在肝癌治疗方面,化疗耐药仍然是一个世界难题.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
Let-7g对BEL7402/5-FU细胞CRD-BP表达及5-FU敏感性的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨微小RNA(miRNA)对肝癌耐药细胞株BEL7402/5-Fu细胞CRD-BP表达及5-FU敏感性的影响.方法:构建let-7g表达载体,将Let-7g质粒表达载体转染至BEL7402/5-FU细胞;MTT试验及流式细胞术检测细胞生长变化;逆转录PCR(RT-PCR)及免疫印迹试验(Western-Blot)检测CRD-BP mRNA水平和相关蛋白表达水平的变化.结果:以浓度梯度5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理肝癌耐药细胞株BEL7402/5-FU后,与未转染组和空载体转染组相比,let-7g转染组的细胞生长抑制率增高,而CRD-BP、P-gp蛋白表达水平均降低.结论:let-7g可能通过下调BEL7402/5-FU细胞CRD-BP、c-myc和P-gp蛋白的表达,逆转BEL7402/5-FU细胞对5-Fu的耐药性.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
黄芩素与5-氟尿嘧啶联用对肝癌耐药细胞株增殖及凋亡的诱导作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察黄芩素对肝癌耐药细胞株应用5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗后增殖及凋亡诱导作用的影响.方法 通过培养人肝癌耐5-Fu细胞株Be17402/5-Fu,将细胞分为对照组、5-Fu组、黄芩素组、黄芩素+ 5-Fu组,采用噻唑蓝实验检测细胞增殖,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭双染色流式细胞术实验检测细胞凋亡,明确黄芩素对耐药细胞增殖和凋亡的影响.结果 黄芩素+5-Fu组与5-Fu组比较,黄芩素浓度为100 μmol/L时,能显著的增加5-Fu抑制增殖能力约为3.87倍,采用金正均Q值法评估联合用药效果发现均>1.15,两者联合用药抑制细胞活力具有协同效应;细胞总凋亡率由(7.5±0.23)%提高至(35.6±3.58)%(P<0.01),早期凋亡细胞的比例(2.2±0.06)%提高至(21.8±2.31)%(P<0.05),凋亡比例增加与黄芩素浓度呈剂量依赖性.结论 黄芩素联合5-Fu可明显抑制肝癌耐药细胞增殖,促进其凋亡,逆转细胞对5-Fu的耐药.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
抗菌肽对肝癌多药耐药细胞Bel-7402/ADM增殖和耐药性影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 检测抗菌肽对耐药细胞Bel-7402/ADM增殖和耐药性的影响,为探讨抗菌肽在肝癌治疗方面的前景和应用价值提供参考依据.方法 采用阿霉素浓度梯度递增法体外诱导建立人肝癌多药耐药细胞系Bel-7402/ADM,检测细胞对化疗药物的敏感性;提取家蝇幼虫抗菌肽,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测抗菌肽对肝癌细胞的抑制作用,流式细胞仪检测抗菌肽对细胞周期分布和进入细胞内阿霉素浓度的影响,并采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测抗菌肽对Bel-7402/ADM细胞多药耐药基因MDR1表达的影响.结果 建立了对阿霉素以及多种化疗药物均耐药的肝癌细胞系Bel-7402/ADM,Bel-7402/ADM对5-氟尿嘧啶、长春新碱、紫杉醇和阿霉素的耐药指数(RI)分别为15.94、8.45、8.11和10.96.抗菌肽对Bel-7402/ADM细胞的半数抑制浓度(ICso)为(463.67±16.93)μg/mL,低于对Bel-7402细胞IC50的(596.34±19.27)μg/mL(t=8.959,P<0.001).抗菌肽作用后,Bel-7402和Bel-7402/ADM细胞均出现Go/G1期比例升高,S期比例下降;Bel-7402/ADM细胞对阿霉素的RI由10.96降至7.10,而Bel-7402细胞对阿霉素的敏感性无明显变化;Bel-7402./ADM细胞内阿霉紊的平均荧光强度由(24.16±3.53)增高至(48.27±5.50)(t=6.390,P=0.003),而Bel-7402细胞荧光强度增高不明显;Bel-7402/ADM细胞多药耐药基因1(MDR1)的相对表达量由(1.749±0.020)降至(1.071±0.044)(t=24.297,P<0.001).结论 肝癌多药耐药细胞Bel-7402/ADM对抗菌肽不耐药,且抗菌肽可逆转Bel-7402/ADM细胞的耐药性.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
大蒜素对5-氟尿嘧啶治疗肝癌的增效作用及机制
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究大蒜素增强肝癌细胞SMMC-7721对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性作用及机制.方法 用不同浓度的大蒜素和亚叶酸钙(CF)同时联合5-FU处理肝癌细胞株SMMC-7721.将对数生长的SMMC-7721细胞株随机分为空白对照组、5-FU(100 mg/L)组、低浓度大蒜素(25 mg/L) +5-FU(100 mg/L)组、中浓度大蒜素(50 mg/L) +5-FU(100 mg/L)组、高浓度大蒜素(100 mg/L) +5-FU (100 mg/L)组、低浓度CF(5 mg/L) +5-FU(100 mg/L)组、中浓度CF(10 mg/L) +5-FU(100 mg/L)组、高浓度CF(20mg/L) +5-FU(100 mg/L)组.采用CCK-8检测细胞增殖抑制率,选择同类药物中抑制率最高的组完成后续实验.采用流式细胞术检测细胞周期.用Hoechst33258染色观察细胞凋亡.采用Western Blot法检测与耐药相关的P糖蛋白(PgP)和多药耐药相关蛋白-1(MRP-1)表达.结果 与5-FU组比较,低、中、高浓度大蒜素均可协同5-FU抑制SMMC-7721生长,而高浓度大蒜素+5-FU组的增殖抑制作用最明显(P<0.05);选择效果较好的高浓度大蒜素+5-FU组和中浓度CF+ 5-FU组继续完成后续实验.各给药组均能将细胞阻断在S期,高浓度大蒜素+5-FU组的S期阻滞作用较其他组更为明显,并且还具有明显的G2/M期细胞阻滞作用(P<0.05).高浓度大蒜素+5-FU组能更明显地诱导肝癌细胞凋亡,降低PgP和MRP-1蛋白表达水平(P<0.05).结论 大蒜素能够增强5-FU的抗肿瘤效果.其机制可能与大蒜素降低肝癌细胞内PgP和MRP-1的表达,逆转耐药有关.大蒜素具有G2/M期细胞阻滞作用,可能与5-FU发生协同作用.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
