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非肥胖型多囊卵巢综合征大鼠模型的建立及评价研究
编辑人员丨1天前
目的 建立符合临床特征的、稳定的非肥胖型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型.方法 采用脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)皮下注射法建立PCOS大鼠模型.将3周龄雌性SD大鼠分为正常组、6 mg/kg DHEA造模组、60 mg/kg DHEA造模组,造模组每日按照相应剂量进行DHEA皮下注射,正常组每日给予甘油皮下注射,连续21 d,以卵巢组织病理学为金标准进行模型评价,明确DHEA致PCOS大鼠模型的最佳造模剂量.在此基础上,选取DHEA最佳造模剂量,分别设立停止造模组和继续造模组,进行28 d的模型观察,考察模型维持情况,其中停止造模组不再继续给予DHEA,继续造模模型组每48 h给予60 mg/kg DHEA皮下注射.评价指标包含大鼠体重、动情周期、空腹血糖和血清胰岛素、卵巢组织病理形态和血清性激素水平.结果 (1)与正常组相比,6 mg/kg DHEA造模组与60 mg/kg DHEA造模组体重无显著性差异,但二者动情周期均失去规律性,卵巢组织中可见较多囊状扩张的大卵泡,少见成熟卵泡,颗粒细胞层数减少且排列稀疏无序,黄体数量减少;且60 mg/kg DHEA造模组血清T、E2水平显著升高(P<0.05).(2)停止造模组:模型组(A2组)与正常组(A1组)相比,两周后恢复规律的动情周期,卵巢组织中可见各级生长卵泡和黄体,囊性卵泡减少,颗粒细胞层数增加,可见成熟卵泡,卵母细胞局部形态完整,且E2、AMH水平降低(P<0.05).(3)继续造模组:模型组(B2组)与正常组(B1组)相比,长期处于动情后期,卵巢组织中可见较多囊状扩张的大卵泡,少见成熟卵泡,颗粒细胞层数减少且排列稀疏无序,黄体数量明显减少,血清LH、LH/FSH、T水平升高(P<0.05).结论 连续21 d皮下注射60 mg/kg DHEA,能够成功构建符合临床特征的非肥胖型PCOS大鼠模型,在此基础上每48 h给予60 mg/kg DHEA皮下注射能够保持模型的稳定性.
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编辑人员丨1天前
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半乳糖凝集素-3基因敲除对MRSA感染小鼠皮肤模型中脓肿发展的影响
编辑人员丨1天前
目的 探讨半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal3)在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)感染小鼠皮肤模型中对皮肤脓肿发展以及肥大细胞(mast cell,MC)激活的影响.方法 将6~8周龄的野生型小鼠和Gal3基因敲除(Gal3-/-)小鼠分为4组:野生型小鼠+PBS组、野生型小鼠+MRS A组、Gai3/-小鼠+PBS组、Gal3-/-小鼠+MRSA组,分别皮下注射MRSA或PBS,每组5只.观察记录小鼠皮肤脓肿发展和病理学变化,比较皮肤组织中的载菌量,并分析相关炎性细胞因子、MC脱颗粒及活化标志物5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)的差异.结果 感染MRSA后,野生型小鼠皮肤出现渐进性脓肿,而Gal3-/-小鼠脓肿体积较小.与野生型小鼠+MRSA组相比,Gal3-/-小鼠+MRSA组皮肤载菌量显著降低(P<0.01),且组织病理学观察显示较少的炎症细胞浸润.Gal3-/-小鼠皮肤中的细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-33、TGF-β和IL-10均显著低于野生型小鼠(P<0.05).甲苯胺蓝染色显示,野生型小鼠+MRSA组皮肤组织中大量MC释放颗粒物质,而Gal3-/-小鼠+MRSA组仅发现少量脱颗粒的MC.免疫组化染色进一步发现,Gal3-/-小鼠+MRSA组中5-HT的表达显著低于野生型小鼠+MRSA组.结论 Gal3缺失降低MRSA感染导致的小鼠皮肤中MC的活化与脱颗粒,改变炎症反应,减轻了皮肤组织的脓肿发生.
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编辑人员丨1天前
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miR-148a-3p对软骨细胞炎性和凋亡的影响及其机制
编辑人员丨1天前
目的 研究miR-148a-3p对软骨细胞炎症因子、细胞凋亡和软骨细胞表型的影响.方法 2周龄大耳兔处死后提取原代软骨细胞.为了探究炎症对软骨细胞相关标志物及其胞内miR-148a-3p表达水平的影响,建立IL-1β-诱导的OA细胞模型,软骨细胞分为control组和IL-1β组.为了探究miR-148a-3p对软骨细胞相关标志物及细胞凋亡相关因子表达水平的影响,软骨细胞分为 blank 组、IL-1 β 组、IL-1 β+NC 组、IL-1 β+mimics 组、IL-1 β+inhibitor 组.qRT-PCR 检测 IL-1 β、SOX9、COL-Ⅱ、ACAN、MMP-13 mRNA水平;采用免疫蛋白印迹法检测软骨相关标志物MMP-13、COL-Ⅱ、ACAN、SOX9以及细胞凋亡相关因子Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达水平.采用ELISA法检测细胞上清中IL-6和IL-10的含量.结果 ①与control组比较,IL-1 β组细胞MMP-13蛋白表达升高(P<0.05),COL-Ⅱ和ACAN蛋白表达降低(P<0.05);miR-148a-3p表达水平升高(P<0.000 1);②与blank组比较,IL-1β组细胞上清液IL-6水平升高,IL-10水平降低(P<0.05);MMP-13 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),COL-Ⅱ和ACAN mRNA和蛋白表达降低(P<0.05).与IL-1β组比较,IL-1 β+mimics组细胞上清液IL-6水平、MMP-13 mRNA 和蛋白、Bax、Caspase-3 蛋白表达升高(P<0.05);上清液 IL-10 水平、SOX9、COL-Ⅱ、ACAN mRNA 和蛋白,以及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05).IL-1β+inhibitor组和IL-1β组间上述指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 IL-1β诱导体外软骨细胞中miR-148a-3p表达上调,可导致软骨细胞炎症性改变、细胞凋亡、软骨细胞表型改变和细胞外基质(ECM)降解.
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编辑人员丨1天前
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补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎小鼠脾脏树突状细胞免疫耐受状态的量效研究
编辑人员丨1天前
目的 研究补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎(Autoimmune thyroiditis,AIT)小鼠脾脏树突状细胞(Dendritic cells,DCs)免疫耐受状态的影响及其量效关系.方法 选取90只6~8周龄SPF级雌性NOD.H-2h4小鼠,随机分为正常(NC)组、对照(AIT)组、补中益气汤高剂量(BZH)组、补中益气汤中剂量(BZM)组、补中益气汤低剂量(BZL)组、亚硒酸钠(SS)组,共6组,每组15只.BZH组每日予以16.38 g·kg-1补中益气汤灌胃,BZM组每日予以8.19 g·kg-1补中益气汤灌胃,BZL组每日予以4.10 g·kg-1补中益气汤灌胃,SS组每日予以0.26 mg·kg-1亚硒酸钠片灌胃,NC组及AIT组每日予以等体积蒸馏水灌胃,连续灌胃8周后,HE染色检测各组小鼠甲状腺淋巴细胞浸润情况;ELISA检测各组小鼠血清中甲状腺球蛋白抗体(Thyroglobulin antibody,TgAb)、TSH及脾脏IL-10水平;流式细胞术检测各组小鼠脾脏树突状细胞表面MHC-Ⅱ及CD80、CD86、CD40分子表达,以及脾脏Th17/Treg细胞比例.结果 ①HE染色可见AIT组小鼠甲状腺淋巴细胞浸润显著,各治疗组甲状腺淋巴细胞浸润情况均有所恢复,其中BZM组小鼠每日灌胃8.19 g·kg-1补中益气汤效果最为显著.②Elisa检测各组小鼠血清TgAb、TSH水平发现,AIT组小鼠血清TgAb较NC组显著升高,其余各治疗组均能够降低小鼠血清TgAb水平,其中BZH组效果最为明显,但BZH组与BZM剂量组之间差异没有统计学意义;与NC组相比,其余组小鼠血清TSH均有所升高,但各组间差异没有统计学意义.③AIT组小鼠脾脏IL-10分泌较NC组降低,其余各治疗组均能够升高脾脏IL-10的分泌水平,与TgAb结果相似,BZH组效果最为明显,但BZH组与BZM组之间差异没有统计学意义.④AIT组小鼠较NC组比较脾脏DCs表面因子CD40、CD80、CD86及MHC-Ⅱ表达升高,脾脏T细胞Th17/Treg水平升高,各治疗组脾脏DCs表面因子水平降低,Th17/Treg水平降低.结论 补中益气汤能够降低AIT小鼠甲状腺自身抗体水平,改善甲状腺组织病理损伤,降低DCs表面CD80、CD86、CD40及MHC-Ⅱ的表达,促进IL-10的分泌,维持Th17/Treg轴平衡,延缓AIT发生.推荐小鼠最佳灌胃剂量为9.18 g·kg-1.
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编辑人员丨1天前
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芪参还五胶囊通过抑制心肌坏死性凋亡改善小鼠急性心肌损伤的实验研究
编辑人员丨1天前
目的 观察芪参还五胶囊改善吡柔比星致小鼠急性心肌损伤并探寻其作用机制.方法 12周龄雄性C57BU6小鼠30只,随机分为对照组、模型组及芪参低、中、高剂量组.通过吡柔比星造模,取材前称量体重并通过心脏超声检测左心室结构和功能,ELISA检测血清心肌肌钙蛋白(cTnI)和氨基端前脑钠素(NT-proBNP)含量;HE染色评价小鼠心肌组织形态学改变;RT-qPCR检测心肌组织中焦亡相关基因NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase1)和坏死性凋亡相关基因白细胞介素-1α(IL-1α)、白细胞介素-33(IL-33)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的mRNA水平;Weston blotting检测焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、Cleaved-Caspase1和坏死性凋亡相关蛋白磷酸化混合谱系激酶样蛋白(MLKL)、磷酸化受体相互作用蛋白激酶3(RIP3)、HMGB1水平.结果 与对照组相比,模型组小鼠精神状态萎靡,体重下降(P<0.05),射血分数(LVEF)下降(P<0.05),血清cTnI和NT-proBNP水平升高(P<0.05),心肌损伤评分升高(P<0.05),坏死性凋亡相关基因和蛋白水平均有升高(P<0.05);与模型组相比,芪参还五胶囊可以改善小鼠精神状态,增加体重(P<0.05),升高LVEF(P<0.05),降低血清中cTnI和NT-proBNP水平,改善心肌损伤(P<0.05),降低坏死性凋亡相关基因及蛋白表达(P<0.05);5组间焦亡相关基因及蛋白表达无明显差异(P>0.05).结论 芪参还五胶囊可以改善吡柔比星造成的小鼠急性心肌损伤,其机制可能与抑制心肌细胞坏死性凋亡有关.
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编辑人员丨1天前
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针刺大鼠肺俞三穴对毒蕈碱性胆碱受体M2在哮喘中的作用
编辑人员丨1天前
目的:探讨针刺肺俞、定喘和膻中三穴对支气管哮喘大鼠肺组织中毒蕈碱型胆碱受体M2(CHRM2)的影响.方法:6~8周龄Wistar大鼠被分为正常对照组、模型组、针刺组、肺俞穴组和非经非穴组,每组10只.应用卵蛋白(OVA)致敏、诱导建立支气管哮喘大鼠模型,肺功能仪检测肺功能,苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠肺组织病理改变,免疫荧光检测CHRM2蛋白表达变化,Western blot蛋白质印迹法测定肺组织中毒蕈碱型胆碱受体M2蛋白含量.结果:大鼠肺功能检测显示针刺肺俞、定喘与膻中穴能明显降低哮喘组升高的气道阻力、降低气道炎性反应;病理显示模型组支气管炎性细胞浸润增加.免疫荧光显示针刺组CHRM2蛋白表达水平与模型组比较明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);Western blot结果显示针刺组大鼠CHRM2蛋白表达水平与模型组比较明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01).结论:针刺肺俞、定喘与膻中穴降低CHRM2水平可降低哮喘升高的气道高反应.
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编辑人员丨1天前
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瑞舒伐他汀与阿托伐他汀对动脉钙化抑制作用的比较
编辑人员丨1天前
目的 探讨瑞舒伐他汀和阿托伐他汀对动脉中膜钙化的抑制作用差异与其对骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化因子配体(RANKL)比值的影响.方法 分别建立动脉中膜钙化的动物模型和细胞模型.6~8周龄体重180~200g雄性SD大鼠.使用华法林对大鼠灌胃诱导大鼠主动脉钙化构建动脉中膜钙化的动物模型,使用维生素C和β-磷酸甘油诱导大鼠主动脉中膜平滑肌细胞(SMC)钙化构建钙化的细胞模型.将80只大鼠采用简单随机表法分为4组:正常对照组,钙化组、瑞舒伐他汀组和阿托伐他汀组,每组20只.瑞舒伐他汀组和阿托伐他汀组在使用上述物质的同时分别再加入瑞舒伐他汀和阿托伐他汀进行干预;使用分光光度计测定钙离子含量,考马斯亮蓝法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,蛋白质印迹法(Western blot)判断骨钙素水平,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)来检测此过程中OPG、RANKL的表达.多组间比较采用单因素方差分析ANOVA,组间的比较使用独立样本t检验.结果 动物模型中,瑞舒伐他汀组和阿托伐他汀组中的钙离子含量、ALP活性、骨钙素表达水平均低于钙化组[(0.94±0.09)mg/g比(1.44±0.10)mg/g、34.39±7.68 比 100.60±5.90、0.51±0.07 比 0.92±0.09,t=9.926、30.564、16.287,P<0.05;(1.30±0.29)mg/g 比(1.44±0.10)mg/g、61.47±4.04 比 100.60±5.90、0.74±0.06 比 0.92±0.09,t=2.092、24.463、7.528,P<0.05];瑞舒伐他汀组的钙离子含量、ALP活性、骨钙素表达水平均低于阿托伐他汀组[(0.94±0.09)mg/g 比(1.30±0.2)mg/g、34.39±7.68 比 61.47±4.04、0.51±0.07 比 0.74±0.06,t=5.152、13.946、10.887,P<0.05];瑞舒伐他汀组中动脉的 OPG/RANKL比值高于阿托伐他汀组(1.08±0.15比0.77±0.03,t=8.742,P<0.05).细胞模型中,瑞舒伐他汀组和阿托伐他汀组中的钙离子含量、ALP活性、骨钙素表达水平均低于钙化组[(69.83±3.77)μg/mg protein 比(133.00±4.50)μg/mgprotein、29.42±1.81 比99.94±3.83、0.49±0.06 比0.92±0.06,t=48.156、74.403、22.931,P<0.05;(99.03±2.93)μg/mg protein 比(133.00±4.50)μg/mgprotein、61.14±2.13 比 99.94±3.83、0.79±0.07 比 0.92±0.06,t=28.326、39.633、6.610,P<0.05];瑞舒伐他汀组的钙离子含量、ALP活性、骨钙素表达水平均低于阿托伐他汀组[(69.83±3.77)μg/mg protein 比(99.03±2.93)μg/mg protein、29.42±1.81 比 61.14±2.13、0.49±0.06 比 0.79±0.07,t=27.363、50.747、15.246,P<0.05];瑞舒伐他汀组中细胞的 OPG/RANKL 比值高于阿托伐他汀组(1.08±0.09比0.78±0.12,t=9.034,P<0.05).结论 瑞舒伐他汀比阿托伐他汀具有更明显的抑制钙化作用,其机制可能与其上调OPG/RANKL比值的能力更强有关.
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编辑人员丨1天前
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基于CRISPR/Cas9技术构建SLC19A2基因敲除小鼠及其表型验证
编辑人员丨1天前
目的 利用CRISPR/Cas9技术构建SLC19A2基因敲除的纯合子小鼠模型,并验证其表型.方法 设计gRNA载体,将构建好的gRNA载体和Cas9载体进行体外转录后共注射到受精卵,经胚胎移植后获得6只(雌性3只、雄性3只)阳性F0代小鼠.通过繁育获得12只(雄性6只、雌性6只)SLC19A2基因敲除纯合子小鼠[SLC19A2-/-小鼠(C57BL/6)].8周龄野生型C57BL/6小鼠和SLC19A2-/-小鼠各12只(雄性6只、雌性6只),分别设为野生型组与基因敲除纯合子组.采用PCR扩增凝胶电泳法鉴定小鼠基因型;采用实时荧光定量PCR检测胰腺组织和肝脏组织中SLC19A2 mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测胰腺组织和肝脏组织中THTR-1蛋白表达.结果 PCR扩增凝胶电泳法成功鉴定出SLC19A2-/-小鼠.基因敲除纯合子组胰腺组织和肝脏组织中SLC19A2 mRNA及THTR-1蛋白表达水平低于野生型组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 基于CRISPR/Cas9技术成功构建了 SLC19A2基因敲除小鼠.
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编辑人员丨1天前
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基于"有故无殒"理论的健康与慢性心力衰竭状态下附子对小鼠心脏不同作用的实验研究
编辑人员丨1天前
目的 基于中医经典"有故无殒"理论,探讨附子水煎液对健康小鼠及慢性心力衰竭小鼠心脏的不同作用.方法 将SPF级别8周龄C57BL/6J品系雄性小鼠随机分为对照组(Ctrl)、附子组(FZH)、多柔比星组(Dox)、多柔比星加附子组(Dox+FZH).分别给予Dox小鼠和Dox+FZH小鼠每3天腹腔注射5 mg/kg多柔比星,Ctrl与FZH给予等体积氯化钠溶液(9 g/L)腹腔注射,实验开始第1天给予Dox、Dox+FZH小鼠5 mg/kg多柔比星腹腔注射后,分别给FZH与Dox+FZH小鼠每日2 g/kg附子灌胃,Ctrl与Dox小鼠分别使用等体积氯化钠溶液(9 g/L)灌胃,造模周期共4周.观察小鼠的一般情况,对小鼠生存率、心质量、体质量、心质量比、心胫比及心超指标等进行统计,分析小鼠心脏组织及血清中脑利尿钠肽(BNP)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)的含量,并检测心脏组织中凋亡相关蛋白的表达情况,观察小鼠心脏组织切片单个心肌细胞横截面积大小,评估附子对健康和慢性心力衰竭状态下小鼠心肌损伤的影响.结果 ①健康状态下,Ctrl和FZH小鼠被毛毛色光亮,形体匀称,四肢活动正常且Ctrl和FZH小鼠均未见死亡;与Ctrl比较,FZH小鼠的心质量、心质量比、心胫比、左室射血分数、左室短轴缩短率、心率、收缩期左室后壁厚度均降低(P<0.05),左室舒张末期内径升高(P<0.05);与Ctrl比较,FZH小鼠活化后的半胱氨酸蛋白3(Cleaved-Caspase3)表达升高(P<0.05),B-细胞淋巴瘤因子2蛋白/Bcl2关联X蛋白(Bcl2/Bax)比值降低(P<0.05);血清中BNP和cTnⅠ的含量差异无统计学意义(P>0.05);小鼠心脏组织切片单个心肌细胞横截面积相应缩小(P<0.05).与Ctrl比较,FZH小鼠心房利尿钠肽(ANP)基因表达升高(P<0.05).②慢性心力衰竭状态下,Dox小鼠毛色晦暗,形体消瘦,活动迟缓,进食量减少,而Dox+FZH小鼠活动能力和进食情况均较Dox有所改善;Dox共计死亡6只,Dox+FZH小鼠死亡3只,附子可以改善病理状态小鼠生存率但差异无统计学意义(P>0.05);与Dox比较,Dox+FZH小鼠心率降低(P<0.05),左室射血分数轻度上升但差异无统计学意义(P>0.05);与Dox比较,Dox+FZH小鼠Bcl2/Bax比值明显升高(P<0.05),Cleaved-Caspase3蛋白表达降低但差异无统计学意义(P>0.05);血清中BNP和cTnⅠ的含量减少(P<0.05);小鼠心脏组织切片单个心肌细胞横截面积增大(P<0.05).与Dox比较,Dox+FZH小鼠ANP基因表达变化差异无统计学意义(P>0.05).结论 附子对健康状态下的小鼠心脏产生毒性作用,对慢性心力衰竭状态下的小鼠具有一定治疗作用.
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编辑人员丨1天前
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内热针调节TGF-β1/Smads信号通路对大鼠肩袖损伤后早期愈合的影响
编辑人员丨1天前
目的 探讨内热针对大鼠肩袖损伤后早期愈合及TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 将72只8周龄(200±20)g SPF级SD雄性大鼠分为模型组(54只)及对照组(18只).模型组大鼠通过离断大鼠右肩冈上肌腱止点构建肩袖损伤大鼠模型,对照组大鼠除不横切冈上肌腱外其余处理同模型组.造模成功的大鼠采用简单随机抽样法分为肩袖损伤组、内热针组、内热针+通路激活剂SRI-011381组(内热针+SRI-011381组),每组18只.内热针组给予内热针治疗,内热针+SRI-011381组在内热针治疗的同时腹腔注射7 mg/kg SRI-011381,对照组与肩袖损伤组给予内热针组同时间、同部位的普通针刺.测定各组大鼠右前足足底热缩足潜伏期(TWL);酶联免疫吸附试验法检测关节液白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;HE染色观察肩袖关节肌腱组织病理损伤;Masson染色观察肩袖关节肌腱组织纤维化程度;腱-骨界面生物力学检测肩袖的最大拉力负荷;免疫组织化学染色法检测肌腱组织相关蛋白表达;Western blot法检测TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达.结果 与对照组比较,肩袖损伤组TWL缩短,最大拉力负荷及Scx、TnC表达降低,IL-1 β、IL-6、TNF-α水平及TGF-β1、p-Smad2/3/Smad2/3表达升高(P<0.05).与肩袖损伤组比较,内热针组TWL延长,最大拉力负荷及Sex、TnC表达升高,IL-1β、IL-6、TNF-α水平及TGF-β,、p-Smad2/3/Smad2/3表达降低(P<0.05).与内热针组比较,内热针+SRI-011381组TWL缩短,最大拉力负荷及Sex、TnC表达降低,IL-1β、IL-6、TNF-α水平及TGF-β1、p-Smad2/3/Smad2/3表达升高(P<0.05).对照组肌腱纤维、软骨及骨组织各层次排列清晰,胶原纤维生成相对正常,存在蓝色胶原纤维沉积;肩袖损伤组组织细胞排列紊乱,炎症细胞浸润明显,胶原纤维生成相对减少,蓝色胶原纤维沉积减少;内热针组组织病理变化得到改善,细胞排列相对正常,炎症细胞浸润减少,有丰富的胶原纤维生成,蓝色胶原纤维沉积大面积增多,胶原纤维连续性、平行取向和密度增加;内热针+SRI-011381组组织病理损伤加重,组织细胞排列紊乱,炎症细胞浸润加剧,胶原纤维生成减少,蓝色胶原纤维沉积明显减少.结论 内热针可促进大鼠肩袖损伤早期愈合,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smads信号通路有关.
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编辑人员丨1天前
