APS是一种以动静脉血栓形成和产科并发症为特征的系统性疾病。抗磷脂抗体介导激活内皮细胞、炎症细胞、血小板，在补体系统激活的帮助下，导致血管内皮功能失调、动脉粥样硬化、非动脉硬化性血管狭窄及凝血异常、血栓形成的过程，导致一系列血栓及非血栓性损伤。而这一系列损伤背后的分子机制可能是抗体通过哺乳动物雷帕霉素靶点（mTOR）经由磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）-AKT通路发挥作用。APS的主要病理表现为血管狭窄和血栓形成，临床上可导致脑、心、肾、肺、胎盘等多种器官功能障碍。目前，尚无有效的方法评估APS的血管功能，预测其血管表现的风险。目前使用较多的为测量肱动脉的血流介导的血管扩张（FMD）或外周动脉张力测定（PAT），而细胞外微粒的检测经过进一步的研究有希望成为预测抗磷脂抗体（aPL）阳性血栓风险的指标。APS相关血管性疾病主要通过药物治疗，单纯的抗栓治疗并不是对所有患者都有效。介入治疗APS血管狭窄的时机和方法目前仍有争议。未来对血管内皮、补体、炎症和动脉粥样硬化等治疗靶点的研究将引领我们进入一个新的时代。

目的:探讨黄芪多糖对深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合的影响及其机制。方法:采用实验研究方法。取50只雄性7周龄SD大鼠，按照随机数字表法分为正常组、单纯烧伤组、黄芪多糖组、抑制剂组和抑制剂+黄芪多糖组，每组10只。除正常组外，其余4组大鼠均在背部制作1个深Ⅱ度烧伤创面。正常组、单纯烧伤组大鼠腹腔注射生理盐水，其余3组大鼠分别注射黄芪多糖和/或整合素连接激酶（ILK）抑制剂。注射7 d后，计算4组烧伤大鼠创面愈合率，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测5组大鼠血清中γ干扰素、白细胞介素2（IL-2）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。取正常组大鼠正常皮肤组织及4组烧伤大鼠创面组织，测定水分并计算水分占比，采用ELISA法检测γ干扰素、IL-2和TNF-α的含量，采用实时荧光定量反转录PCR法检测表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）以及ILK mRNA表达量，采用蛋白质印迹法检测ILK、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、糖原合成激酶-3β（GSK-3β）及磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）蛋白表达量。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果:注射7 d后，黄芪多糖组大鼠创面愈合率为（67±5）%，明显高于单纯烧伤组的（52±4）%和抑制剂+黄芪多糖组的（59±5）%（ P值均<0.05）；抑制剂+黄芪多糖组大鼠创面愈合率明显高于抑制剂组的（48±4）%（ P<0.05）。注射7 d后，与正常组大鼠血清或正常皮肤组织比较，单纯烧伤组大鼠血清中γ干扰素、TNF-α、IL-2含量和创面组织水分占比均明显升高（ P<0.05）；与黄芪多糖组比较，单纯烧伤组和抑制剂+黄芪多糖组大鼠血清中γ干扰素、TNF-α、IL-2含量及创面组织水分占比均明显升高（ P<0.05）；与抑制剂组比较，抑制剂+黄芪多糖组大鼠血清中γ干扰素、TNF-α、IL-2含量及创面组织水分占比均明显降低（ P<0.05）。注射7 d后，与正常组大鼠正常皮肤组织比较，单纯烧伤组大鼠创面组织中γ干扰素、TNF-α和IL-2含量均明显升高（ P<0.05）；与黄芪多糖组比较，单纯烧伤组和抑制剂+黄芪多糖组大鼠创面组织中γ干扰素、TNF-α和IL-2含量均明显升高（ P<0.05）；与抑制剂组比较，抑制剂+黄芪多糖组大鼠创面组织中γ干扰素、TNF-α和IL-2含量均明显降低（ P<0.05）。注射7 d后，与正常组大鼠正常皮肤组织比较，单纯烧伤组大鼠创面组织中EGF、bFGF、ILK mRNA表达量及ILK、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达量均明显升高（ P<0.05）；与黄芪多糖组比较，单纯烧伤组和抑制剂+黄芪多糖组大鼠创面组织中EGF、bFGF和ILK mRNA表达量及ILK、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达量均明显降低（ P<0.05）；与抑制剂组比较，抑制剂+黄芪多糖组大鼠创面组织中EGF、bFGF和ILK mRNA表达量以及ILK、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达量均明显升高（ P<0.05）。正常组大鼠正常皮肤组织以及4组烧伤大鼠创面组织中Akt和GSK-3β蛋白表达量比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:黄芪多糖可能通过激活ILK/Akt/GSK-3β信号通路，减轻深Ⅱ度烧伤大鼠全身和局部炎症反应，减轻组织水肿，促进愈合因子表达，从而促进创面愈合。

患者女，26岁。因突发右眼视物不清1 d，于2023年4月13日到遵义医科大学第二附属医院眼科就诊。患者半个月前因右侧腘静脉血栓栓塞行下腔静脉滤器置入手术及尿激酶溶栓、那屈肝素钠抗凝治疗。否认其他全身病史。眼科检查：右眼、左眼最佳矫正视力分别为数指/10 cm、1.0。右眼、左眼眼压分别为14、11 mm Hg （1 mm Hg=0.133 kPa）。右眼直接对光反射消失。眼底检查，右眼视盘水肿，盘缘小片状出血，视网膜静脉纡曲扩张，"串珠样"改变，静脉旁多发散在视网膜前出血，对应静脉处可见白色栓子样梗塞，动脉变细，反光增强（图1A）。红外眼底扫描激光检查，右眼仅见上方及颞侧涡静脉轮廓（图1B）。光相干断层扫描（OCT）检查，右眼黄斑区鼻侧视网膜水肿增厚，视网膜层间结构模糊，脉络膜厚度不均（图1C）。左眼眼前节及眼底检查均未见明显异常。右下肢静脉CT血管成像检查，右侧股静脉下段-腘静脉栓塞，周围软组织肿胀（图2A）。右下肢静脉3D-CT血管造影检查，右侧胫前、胫后及腓静脉显影变淡，右侧腘动脉局限性轻度狭窄（图2B）。实验室检查，活化部分凝血活酶时间109.4 s（正常值范围31 ～43 s）。给予患者静脉注射800 ml冰冻血浆补充凝血因子、维生素K40 mg/d促进凝血因子合成。治疗2 d后患者自觉右眼视力降至无光感。眼底检查，右眼视网膜大量散在Roth斑样出血，视网膜静脉系统"串珠样"改变伴多发散在节段性栓子栓塞，黄斑区内界膜隆起伴内界膜下出血（图3A）。OCT检查，右眼后极部视网膜重度水肿，层间结构紊乱、内界膜脱离（图3B）。荧光素眼底血管造影（FFA）检查，右眼全周视网膜大范围遮蔽荧光，隐约可见动脉前峰充盈，遮蔽区域见脉络膜背景荧光弥漫增强；造影晚期仍未见视网膜静脉荧光充盈（图3C）。实验室检查：抗核抗体（＋）、抗双链DNA抗体（＋）、抗史密斯抗体（抗SM抗体）（＋），抗磷脂抗体、狼疮抗凝物（＋）；其余血常规、生物化学检测结果无明显异常。血栓弹力检查，凝血因子及纤维蛋白原活性减弱。诊断：（1）右眼视网膜中央动脉阻塞（CRAO）并视网膜中央静脉阻塞；（2）系统性红斑狼疮（SLE）合并抗磷脂综合征（APS）；（3）狼疮抗凝物-低凝血酶原综合征。给予患者眼球按摩、高通量氧气间断吸氧、静脉注射甲泼尼龙琥珀酸钠免疫抑制、维生素促进凝血因子合成、达肝素钠抗凝、球后注射硫酸阿托品扩血管、噻吗洛尔滴眼液点眼降眼压、血栓通活血化瘀治疗。但患者视力无明显改善。

目的 基于室间质量评估(external quality assessment,EQA)和室内质量控制(internal quality control,IQC)数据,设定生物化学检验常规项目分析性能规范(analytical performance specifications,APS).方法 收集成都市郫都区中医医院检验科2021～2023年参加国家卫生健康委员会临床检验中心生物化学检验常规项目EQA和IQC数据,将EQA数据的百分差值与IQC在控不精密度[以变异系数(coefficient of variation,CV)表示]与基于生物学变异(biological variation,BV)导出的三个标准进行比较,计算EQA数据百分差值通过率和在控CV通过率,以达到80％及以上为该水平质控品的APS设定为实验室常规生化检验项目的质量目标.对于未达到BV导出三个标准APS或达到标准而不适用的检验项目,采用WS/T 403-2012行业标准或基于当前技术水平设定APS.结果 生物化学检验常规项目推荐的TEa/允许 CV 分别为:钾(K)2.4％/1.9％,钠(Na)4.0％/0.9％,氯(Cl)4.0％/0.9％,钙(Ca)3.4％/1.8％,磷(P)9.6％/1.9％,镁(Mg)3.8％/2.0％,血糖(Glu)6.1％/2.3％,肌酐(Crea)3.9％/2.2％,尿素(Urea)8.6％/3.3％,总蛋白(TP)4.9％/2.0％,清蛋白(Alb)3.3％/1.9％,总胆红素(TBil)6.3％/2.4％,丙氨酸氨基转移酶(ALT)9.3％/2.9％,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)6.2％/2.1％,γ-谷氨酰基转移酶(GGT)9.2％/2.1％,乳酸脱氢酶(LDH)6.8％/2.2％,碱性磷酸酶(ALP)7.2％/3.3％,总胆固醇(TC)8.3％/2.6％,三酰甘油(TG)12.9％/4.9％,淀粉酶(AMY)5.9％/1.6％,肌酸激酶(CK)4.3％/1.6％和尿酸(UA)2.9％/1.0％.结论 基于BV或当前技术水平设定的APS可作为实验室生物化学检验常规项目的质量目标,实验室根据实际情况选择适合自己的APS.

目的 探索人脂肪间充质干细胞来源外泌体(Exosome-HADSCs)联合黄芪多糖(APS)对心肌损伤的保护作用机制.方法 体外培养人脂肪间充质干细胞(HADSCs),提取外泌体,并通过电镜、Western blot法对外泌体进行鉴定.实验设置对照组(control组)、Exo组、APS组、Exo+APS组,采用血管形成实验和划痕实验分析Exosome-HADSCs联合APS对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成和细胞迁移的影响.在AC16心肌细胞损伤模型中,实验设置对照组(control组)、氯化钴(CoCl2)组、CoCl2+Exo组、CoCl2+APS组、CoCl2+Exo+APS组,比较各组细胞存活率、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达水平.结果 与control组相比,Exo+APS组HUVECs形成血管网格的数量显著增多(P＜0.05),且Exo+APS组形成血管网格的数量多于Exo组和APS组,差异有统计学意义(P＜0.05).与control组相比,Exo+APS组细胞迁移率增高,且Exo+APS组细胞迁移率高于Exo组和APS组,差异有统计学意义(P＜0.05).Exosome-HADSCs联合APS能够显著提高CoCl2损伤AC16细胞的存活率,降低细胞凋亡率,且作用效果较单独使用Exosome-HADSCs和APS更显著(P＜0.05).与CoCl2 组相比,CoCl2+Exo+APS组凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2 相关x蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达水平显著降低(P＜0.05),抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达水平显著增高(P＜0.05),磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、苏氨酸-丝氨酸蛋白激酶(Akt)蛋白表达水平均显著增高(P＜0.05).结论 Exosome-HADSCs联合APS对心肌损伤具有保护作用,其机制可能与促进血管形成和内皮细胞迁移,提高细胞存活率,减少心肌细胞凋亡有关,并通过PI3K/Akt信号通路实现.

[目的]探究黄芪多糖通过作用于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)-叉头框转录因子O亚族 1(FOXO1)信号通路及相关炎症因子对糖尿病性肌少症大鼠肌肉萎缩的改善及治疗作用.[方法]一次性链脲佐菌素腹腔注射构造糖尿病动物模型,随机分为模型组、黄芪多糖组和二甲双胍组,另设置无干预正常组,分组给药 3 个月,实验结束后进行腓肠肌苏木精-伊红(HE)染色;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)测定磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)/AKT及FOXO1 蛋白含量;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测白细胞介素(IL-6)、抑癌基因TP53、热休克转录因子 1(HSF1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平;检测血清生化指标三酰甘油(TG).[结果]与模型组相比,黄芪多糖组腓肠肌肌细胞明显改善,细胞体积变大、间隙变窄,炎性渗出显著减轻;另外,黄芪多糖组的糖尿病保护因子P-AKT/AKT、FOXO1 蛋白含量明显上升;炎性因子IL-6、TP53、HSF1 及MMP-9 含量明显下降.在血脂方面,西药二甲双胍组TG下降更加明显.[结论]黄芪多糖可能通过PI3K-AKT-FOXO1 信号通路,降低IL-6、TP53 炎性因子水平,影响HSF1和MMP-9的活性,从而改善糖尿病性肌少症大鼠的肌肉萎缩.

以腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)等为原料,来源于乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)的ATP硫酸化酶(ATPS)和来源于产黄青霉菌(Penicillium chrysogenum)的APS激酶(APSK)构建的多酶催化体系可合成3'-磷酸腺苷-5'-磷酸硫酸(PAPS).同时,在酶法合成PAPS的反应体系中引入铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)来源的无机焦磷酸水解酶(PPase),消耗反应过程中的副产物PPi,使得反应向生成PAPS的方向进行,大幅提高多酶法合成PAPS的产率.本研究构建了重组质粒pET-28a-sumo-ATPS、pET-28a-APSK和pET-28a-PPase,并在大肠杆菌中表达了重组酶,研究酶学性质和优化多酶催化反应合成PAPS的反应条件,以提高PAPS的产量水平,最终PAPS的累积量为14.47 g/L.该工艺可大幅降低PAPS的制备成本.

Janus活化激酶( Janus activated kinase , JAK)/信号转导与转录激活子( signal transducer and activator of transcriptions , STAT) 途径介导了炎症性肠病的发生和发展[1]. 黄芪多糖( Astragalus polysaccharides , APS) 是黄芪的主要活性成分之一,可有效治疗实验性结肠炎[2] ,但其作用机制是否与调节结肠黏膜JAK/STAT信号表达有关尚不清楚.

目的 观察人心肌细胞在缺血再灌注损伤过程中蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)又称Akt,与细胞外信号调节激酶1/2(extracellar signal-regulated kiase,ERK1/2)的表达规律及其与细胞凋亡的关系,以探索黄芪多糖产生心肌保护作用的机制.方法 培养原代人心脏微血管内皮细胞(human cardiac microvascular endothelial cells,HCMEC),通过缺氧再复氧刺激细胞损伤,模拟缺血再灌注损伤的实验技术平台,建立缺血再灌注损伤模型,继而采用黄芪多糖进行干预,随机分为:HCMEC正常对照组(对照组)、HCMEC损伤组(损伤组)、HCMEC损伤组+低浓度的药物(低药物组)、HCMEC损伤组+中浓度的药物(中药物组)、HCMEC损伤组+高浓度的药物(高药物组),进而采用Western Blot方法检测ERK、p-ERK、Akt蛋白表达情况,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果 从流式细胞仪结果显示:对照组为5.43%;损伤组细胞凋亡程度增高最明显,为92.88%;高药物组次之,为29.78%;低药物组及中药物组细胞凋亡程度较轻,生存状态较佳,分别为12.15%和6.08%.Western Blot结果显示:与对照相比较,p-ERK、ERK及Akt磷酸化水平在各组中表达均显著下降(P<0.05);与损伤组相比,低药物组、中药物组和高药物组三组p-ERK、ERK及Akt磷酸化水平升高(P<0.05);与低药物组相比,中药物组中p-ERK、ERK及Akt磷酸化水平升高(P<0.05).结论 黄芪多糖可提高人心肌细胞缺血再灌注损伤后ERK、Akt的活性,减少细胞凋亡.

目的 研究黄芪多糖对HepG2细胞增殖的作用及可能机制.方法 用不同浓度(100、200和400 μg/ml)的黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)处理HepG2细胞,采用MTT法检测细胞增殖,采用Western blot检测细胞内糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)的表达.结果 APS100组、APS200组及APS400组HepG2细胞第1～7 d吸光度和GSK3β 蛋白质表达均显著低于对照组(P＜ 0. 05);APS100组和APS400组HepG2细胞D1 ～D7吸光度和GSK3β 蛋白质表达差异无统计学意义(P＞0. 05),但均显著高于APS200组(P＜0. 05).结论 黄芪多糖可显著抑制HepG2细胞增殖,其机制可能与抑制糖原合成酶激酶3β 表达有关,其中200 μg/ml抑制作用最强.