目的:对原发性远端肾小管酸中毒（distal renal tubular acidosis，dRTA）患者进行基因突变分析和基因型-表型相关性研究，以提高对该病的认识和理解。方法:通过Sanger测序或全外显子组测序的方法对2010年4月至2020年9月青岛大学附属医院和青岛大学附属市立医院确诊的来自37个家系的44例原发性dRTA患者进行致病基因突变分析，根据2015年美国医学遗传学和基因组学学会（American College of Medical Genetics and Genomics，ACMG）的分类标准和指南评估变异致病性。总结患者的临床特点，并进行基因型和表型的关联研究。结果:44例dRTA患者共确定 SLC4A1基因7个变异， ATP6V0A4基因17个变异， ATP6V1B1基因15个变异，其中新增11个新变异；根据ACMG指南，39个变异中致病性、可能致病性和良性变异分别为22、16和1个。9例患者是 SLC4A1基因突变导致的常染色体显性遗传dRTA，4例患者为 SLC4A1基因突变导致的常染色体隐性遗传dRTA合并东南亚卵圆形红细胞增多症并伴有贫血，14例和8例患者分别为 ATP6V0A4基因和 ATP6V1B1基因突变导致的常染色体隐性遗传dRTA，2例患者不符合常染色体隐性遗传模式仅携带1个 ATP6V1B1杂合突变，7例患者检测结果为阴性。43例患者均为完全性dRTA，1例患者为不完全性dRTA。 ATP6V0A4基因和 ATP6V1B1基因突变导致患者感音神经性耳聋的患病率分别为2/14和6/10。成人、儿童和婴幼儿慢性肾脏病的发生频率分别为4/4、2/4、1/36。经以枸橼酸钾钠合剂为基础的药物治疗后，大部分患儿的生长发育（28/40）和电解质紊乱（41/44）得到明显改善。 结论:本研究44例原发性dRTA共发现3个致病基因 SLC4A1、 ATP6V0A4、 ATP6V1B1的39个变异位点，其中11个为新变异。dRTA人群基因型和表型密切相关。经恰当的治疗后，大部分患者的病情获得改善。本研究丰富了人类基因突变数据库，将为dRTA人群的遗传咨询和诊治提供有益的借鉴。

目的:探讨一例 ATP6V0A2基因相关常染色体隐性皮肤松弛症(autosomal recessive cutis laxa, ARCL)患儿的临床表现及遗传学特点。 方法:收集1例 ATP6V0A2基因相关ARCL患儿的临床资料，对患儿进行全外显子组测序分析(trio-whole exome sequencing, trio-WES)，Sanger测序对可能的变异位点进行验证，并复习文献总结该类疾病的临床表现和遗传学特征。 结果:患儿5岁2月龄，身高109.5 cm(40%)，体重14.2 kg(<3%)，眼裂下斜、眼距宽、宽鼻梁、前额突、长人中，腹部、双侧腹股沟皮肤松弛、皱纹明显，双侧隐睾，既往有"脐疝"病史， ATP6V0A2基因存在复合杂合变异，包含1个移码变异c.1421_1424delAGTC(p.Val476Thrfs*71)和1个剪接位点变异c.2293+1G>A，2个变异位点文献均未见报道。本研究对既往文献报道的75例 ATP6V0A2基因相关ARCL患者的临床表型进行分析，结果显示皮肤松弛(100%，75/75)、特殊面容(78.7%，59/75)和前囟大或闭合延迟(65.3%，49/75)是最常见临床特征，眼裂下斜(57.3%，43/75)、宽鼻梁(40.0%，30/75)和长脸(34.7%，26/75)是最常见的面部特征。 结论:当患者出现皮肤松弛，合并特殊面容、前囟大或闭合延迟、生长发育迟缓、智力发育迟缓和癫痫等应考虑 ATP6V0A2基因相关ARCL。全外显子组测序是一种快速鉴定致病变异的精确方法，有助于早期确诊。

目的:胰腺癌(pancreatic adenocarcinoma，PAAD)是消化系统中恶性程度较高的肿瘤之一，预后较差。本研究旨在通过生物信息学方法和乳酸代谢基因构建PAAD预后模型来研究其临床意义以及分析乳酸代谢基因与肿瘤微环境之间的关系。方法:分别从TCGA和GTEx数据库下载胰腺癌和非病变胰腺组织数据，乳酸代谢基因从GeneCards数据库下载，识别PAAD差异表达乳酸代谢基因后通过单变量和LASSO-Cox方法构建PAAD乳酸代谢基因预后模型。ssGSEA和ESTIMATE算法评估乳酸风险基因与肿瘤微环境之间的关系。结果:预后模型由7个关键乳酸基因构成( UCA1、 ARNT2、 PNPLA6、 ATP6V0A1、 MET、 PRPF8、 KRT7)，对于独立预测PAAD患者的预后具有重要的临床价值。在肿瘤微环境中，乳酸代谢高风险组多种免疫细胞浸润呈现抑制状态，包括NK细胞、调节性T细胞、嗜酸细胞等。 结论:通过乳酸代谢基因构建的PAAD预后模型和肿瘤微环境的分析结果对PAAD患者的预后改善和临床治疗提供新的证据。

目的:分析原发性远端肾小管酸中毒（dRTA）患儿的临床特点及基因型和临床表型的关系。方法:回顾性分析重庆医科大学附属儿童医院2010年1月至2020年12月诊断的27例dRTA患儿的一般情况、临床表现、实验室检查、基因检测及随访（截至2021年3月）等临床资料。根据致病基因不同分为SLC4A1基因组和ATP6V0A4+ATP6V1B1基因组，比较不同基因型组患儿起病年龄、临床表现和实验室检查结果。同时比较患儿治疗前后身高标准差积分、体重标准差积分和血pH值、血钾浓度等。组间比较采用 t检验、Fisher确切概率法、秩和检验。 结果:27例dRTA患儿中男16例、女11例，起病年龄33.4（10.0，36.0）月龄。22例（81%）SLC4A1基因变异，3例（11%）ATP6V1B1基因变异，2例（8%）ATP6V0A4基因变异。22例（81%）患儿有肾脏钙质沉积，19例（70%）有低钾表现，18例（67%）有身材矮小，16例（59%）有营养不良，16例（59%）有佝偻病，15例（56%）有多饮、多尿等临床表现。SLC4A1基因组患儿起病年龄大于ATP6V0A4+ATP6V1B1基因组［27.3（12.0，36.0）比8.2（2.5，15.0）月龄， H=6.33， P=0.012］，临床表现、实验室检查结果差异均无统计学意义（均 P>0.05）。27例患儿病程3.9（1.3，6.0）年、随访3.1（1.0，4.5）年。SLC4A1基因组和ATP6V0A4+ATP6V1B1基因组临床表现恢复率及末次实验室检查结果差异均无统计学意义（均 P>0.05）。治疗后患儿身高标准差积分、体重标准差积分均较治疗前升高（-3.2±1.9比-2.1±1.1、-2.5±1.5比0±1.9， t=-2.94、-5.44，均 P<0.01）。血钾及pH值均较治疗前上升［（3.2±0.5）比（4.0±0.5）mmol/L、7.27±0.07比7.37±0.07， t=-4.92、-5.25，均 P<0.01］。14例患儿血钾恢复正常，12例血pH值恢复正常，仅4例血清碳酸氢根浓度、实际碱剩余恢复正常。 结论:SLC4A1基因变异的dRTA患儿起病年龄晚于ATP6V0A4和（或）ATP6V1B1基因变异患儿，病情及预后与致病基因无相关性。早诊断、早治疗、规律随访、及时调整用药可改善患儿预后，提高患儿生存质量。血清碳酸氢根浓度、实际碱剩余可能不是评估临床恢复的必备指标。

目的:分析1例原发性远端肾小管酸中毒(dRTA)患儿的临床及遗传学特征。方法:选取2021年4月因"食纳差10 d，哭闹2 d"就诊于西安市儿童医院的1例原发性dRTA患儿作为研究对象，收集患儿的临床资料。应用全外显子组测序及Sanger测序进行变异分析及家系验证。结果:患儿为1月18日龄男性，临床主要表现为食纳差、烦躁哭闹、体重不增及脱水。患儿实验室检查提示代谢性酸中毒、电解质紊乱(高氯、低钾)、反常性碱性尿及贫血；泌尿系彩色多普勒超声提示双肾髓质钙盐沉积。基因检测发现患儿 ATP6V0A4基因存在父源性c.1363dupA(p.M455NfsX14)和母源性c.2257C>T(p.Q753X)复合杂合变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会相关变异标准与指南，c.1363dupA(p.M455NfsX14)评级为致病性变异(PVS1＋PM3＋PM2_Supporting)，c.2257C>T(p.Q753X)评级为致病性变异(PVS1＋PM3＋PM2_Supporting)。 结论:ATP6V0A4基因c.1363dupA(p.M455NfsX14)和c.2257C>T(p.Q753X)变异考虑是患儿致病的原因。c.2257C>T(p.Q753X)变异的发现拓展了 ATP6V0A4基因的变异谱。

目的:探讨1例癫痫性脑病(DEE)患儿的临床表型及遗传学病因。方法:收集2021年2月就诊于广东医科大学附属医院儿童医学中心的1例患儿的临床资料进行回顾性分析。采集患儿及其父母的外周血样，对其进行全外显子组测序，对候选变异进行Sanger测序验证。以" ATP6V0A1基因""发育性及癫痫性脑病104型"" ATP6V0A1 variant""developmental and epileptic encephalopathy 104""DEE 104""epileptic encephalopathy"为关键词检索中国知网、万方数据平台以及PubMed数据库中的相关文献，检索时间为建库至2022年12月。 结果:患儿为5月龄男性，婴儿期起病，表现为频繁的局灶性发作，伴严重发育落后，体型消瘦、小头畸形、外眦上斜，精灵耳，四肢肌张力低下。患儿脑电图提示多灶性尖波、慢波、棘慢波发放，头颅MRI发现双侧侧脑室、第三脑室扩大，脑沟、脑裂、脑池增宽。测序结果提示患儿 ATP6V0A1基因存在c.2401C>T(p.His801Tyr)新发错义变异，判读为可能致病性(PS2＋PM2_Supporting＋PP3)。结合患儿的临床表型和基因检测结果，确诊其为DEE104型。共检索到 ATP6V0A1基因变异所致DEE104型文献2篇，共14例。DEE104型患者变异以杂合变异为主，热点变异为c.2219G>A(10/14, 71.4%)，最常见的临床特征为难治性癫痫发作及发育迟缓(14/14, 100.0%)。 结论:患儿考虑为 ATP6V0A1基因c.2401C>T的杂合变异所致的癫痫型脑病104型。

背景 骨骼肌衰老后质量和功能逐渐下降,其分泌的外泌体对骨代谢具有明显的影响,但衰老骨骼肌外泌体对骨代谢的调控机制尚未明确.目的 探索衰老骨骼肌组织外泌体调控成骨、破骨细胞功能的作用.方法 将2月龄(Young)和24月龄(Old)小鼠骨骼肌组织消化形成单细胞悬液,从中提取的骨骼肌组织外泌体分别为年轻骨骼肌组织外泌体(Young-Exo)和衰老骨骼肌组织外泌体(Old-Exo).通过生物透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)、纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)和Western blot对外泌体进行验证.利用提取的外泌体干预诱导原代成骨细胞成骨分化和诱导骨髓单核巨噬细胞向破骨细胞分化.组织外泌体干预实验分为对照组(PBS组)、年轻组织外泌体组(Young-Exo 组)、衰老组织外泌体组(Old-Exo组).茜素红(alizarin red S,ARS)染色和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测成骨分化水平;抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphase,TRAP)染色检测破骨细胞面积;实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测 Alp、Opn、Ocn、Col1a1、Runx2、Ctsk、Dc-stamp、Atp6v0d2、Mmp-9、Acp5 基因相对表达量.结果Young-Exo组与Old-Exo组的细胞外囊泡均为双层膜结构的圆形囊泡,直径110nm左右,且均表达CD9、CD63、CD81和TSG101等外泌体相关标志蛋白.组织外泌体干预诱导原代成骨细胞成骨分化实验结果显示,与PBS组、Young-Exo组比较,Old-Exo组原代成骨细胞ARS染色的钙盐沉积量和ALP染色强度均下降(P＜0.01),成骨分化基因 Alp、Opn、Ocn、Collal、Runx2的mRNA相对表达量降低(P＜0.01);组织外泌体干预诱导骨髓单核巨噬细胞向破骨细胞分化结果显示,与PBS组、Young-Exo组比较,Old-Exo组TRAP染色的破骨细胞所占面积百分比升高(P＜0.01),破骨细胞相关基因Ctsk、Dc-stamp、Atp6v0d2、Mmp-9、Acp5的mRNA相对表达量升高(P＜0.01).结论 与年轻骨骼肌组织外泌体相比,衰老骨骼肌组织外泌体可能通过抑制原代成骨细胞的成骨分化、促进破骨细胞形成,打破骨代谢的动态平衡,导致骨质疏松症.

背景:过度活跃的破骨细胞可破坏骨稳态,并在骨质疏松、脆性骨折、骨关节炎等相关性骨骼疾病的病理机制中起重要作用.研究证实,鞣花酸和鞣花单宁有抑制破骨细胞分化的潜能,尿石素A作为其天然代谢产物,具有抗氧化、抗炎、抗增殖及抗癌作用,但其对破骨细胞分化的影响及其潜在的分子机制尚不清楚.目的:探讨尿石素A对核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞分化的影响及作用机制.方法:体外培养稳定生长的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7),使用细胞毒性MTS实验检测不同浓度尿石素A(0,0.1,0.5,1.5,2.5 μmol/L)对RAW264.7细胞的毒性,筛选出安全作用浓度.再使用不同浓度的尿石素A干预核因子κB受体活化因子配体诱导的RAW264.7细胞体外分化过程,进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色和肌动蛋白环及细胞核染色,观察尿石素A对破骨细胞形成和功能的影响.最后通过Western Blot及RT-qPCR实验,观察尿石素A干预后丝裂原活化蛋白激酶信号通路中上下游基因和蛋白的表达情况.结果与结论:①尿石素A呈浓度依赖性地抑制体外破骨细胞分化及肌动蛋白环形成,2.5 μmol/L的抑制作用最强;②尿石素A可抑制与破骨形成及骨吸收相关的Nfatc1、Ctsk、Mmp9、Atp6v0d2基因的表达及Nfatc1、Ctsk蛋白的合成;③尿石素A可通过抑制p38蛋白的磷酸化,抑制丝裂原活化蛋白激酶信号通路传导,从而抑制破骨细胞的活性.

V-ATP酶通过水解ATP获得的能量,介导逆电化学梯度跨膜泵H+,在溶酶体酸化和细胞骨架的形成与稳定中发挥重要作用.60%以上的先天性耳聋由遗传因素引起,超过50%的先天性感音神经性耳聋为遗传性耳聋.过去的新生儿耳聋筛查基因主要为GJ B2、GJ B3、SLC26A4和12SrRNA等;近年来,越来越多的V-ATP酶相关基因突变所致感音神经性耳聋病例被报道,这为新生儿听力筛查提供新的靶点.当前已报道的耳聋相关V-ATP酶基因主要为ATP6V1B2、ATP6V1B1和ATP6V0A4,其致聋机制与溶酶体酸化异常有关.本文就这三个基因有关耳聋的主要突变,突变所引起的主要临床症状,以及分子病理学机制研究展开综述,有望为临床诊断和机制研究提供参考.

目的 前期研究发现,石斛碱(DDB)通过诱导自噬,促进溶酶体酸化,改善阿尔茨海默病动物学习记忆功能,本研究拟采用PC12细胞探讨DDB诱导自噬、促进溶酶体酸化的分子机制.方法 将PC12细胞随机分为细胞对照组和DDB给药组.Western印迹法检测LC3,p62,mTOR,pmTOR,S6K,pS6KA,ATP6V1A和ATP6V0a1等蛋白及TFEB的核蛋白及浆蛋白水平,Lyso-Tracker检测溶酶体酸化情况.免疫荧光染色观察LAMP2与mTOR的共定位情况及TFEB与细胞核共定位情况;实时荧光定量PCR法检测溶酶体生物发生相关基因;ELISA检测V-ATP酶的活性.DARTS 实验检测 DDB 和 ATP6V1A 相互作用.沉默ATP6V1A基因后,采用Western印迹法检测LC3、p62蛋白水平及Lyso-Tracker检测溶酶体酸性情况.结果 与细胞对照组相比,DDB给药组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,p62,pmTOR 和 pS6K 蛋白水平及TFEB浆蛋白水平降低;ATP6V1A和ATP6V0a1蛋白水平和TFEB核蛋白水平升高;溶酶体酸化显著增加.DDB抑制mTOR与LAMP2的共定位,增加TFEB与细胞核的共定位,增加溶酶体生物发生相关基因的表达,显著增加V-ATPase的活性.DARTS实验显示,DDB与ATP6V1A结合.在Sh-ATP6V1A的细胞中,DDB增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,减少p62蛋白水平以及促进溶酶体酸化作用被显著抑制.结论 DDB靶向结合ATP6V1A,抑制mTORC1向溶酶体募集,导致mTORC1失活,进而诱导自噬;并通过促进TFEB核转位,促进溶酶体生物发生,从而促进溶酶体酸化.