为探究独脚金内酯抑制剂Tis108对天麻生长的影响,该研究采用10 μmol·L-1的Tis108溶液处理白麻块茎,对块茎的内源激素赤霉素(GA)含量进行测定,通过RT-PCR技术克隆GA失活关键酶GeCYP714A1基因,借助ExPASy、SWISS-MODEL、MEGA 等软件对该基因进行生物信息学分析,并测定其在天麻不同组织部位的表达水平.结果显示,Tis108处理后天麻块茎的GA含量显著升高,GA失活关键酶GeCYP714A1的转录水平显著降低.GeCYP714A 1基因的编码区全长1 173 bp,编码390个氨基酸,蛋白的相对分子质量为44.85 kDa,理论等电点为9.83,不稳定系数为49.20,脂肪系数为89.03,总平均亲水指数平均值为-0.235,属于碱性亲水性不稳定蛋白;且GeCYP714A1蛋白定位于线粒体,无信号肽,不具有跨膜结构.系统进化树分析显示,GeCYP714A1与铁皮石斛DcCYP714C2(PKU78454.1)蛋白亲缘关系最近,序列一致性达67.25％.利用qRT-PCR技术分析天麻GeCYP714A1基因的表达模式,结果显示在天麻块茎中GeCYP714A1转录水平最高,其次是茎和花序.该研究表明Tis108可抑制天麻块茎中GA失活酶GeCYP714A1的转录水平,提高GA的积累量,影响天麻块茎生长,为进一步揭示独脚金内酯调控天麻GA信号和块茎发育奠定基础.

目的 建立超高效液相色谱串联—四极杆—静电场轨道阱质谱技术(ultra-performance liquid chromatogra-phy-linear ion trap quadrupole-Orbitrap-mass spectrometry,UPLC-Q-Orbitrap-MS)对铁皮石斛(Dendrobiumoffi-cinale Kimura&Migo)水提物石油醚、乙酸乙酯、正丁醇3种萃取组分进行定性表征的方法.方法 提取铁皮石斛水提物并依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,旋蒸浓缩后,得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取组分.样品经UPLC-Q-Orbitrap-MS分析,根据元素组成、分子量、质荷比、离子碎片等确定化合物信息并推导裂解规律,通过与文献、MzCloud、MzVault、PudChem、本地数据库比对确定鉴定结果.结果 在正负离子模式下共鉴定出化合物62种,包括黄酮类成分20种,联苄类成分6种,羧酸及其衍生物6种,脂肪酸及其衍生物6种,酚类成分4种,氨基酸及其衍生物3种,糖类成分2种,生物碱类、苯丙素、蒽醌、萜类化合物各1种,其他类成分3种,还检测到8种含量较高、质谱信号较强的未知成分.其中水提石油醚萃取物中鉴定出化合物7种,乙酸乙酯萃取物中鉴定出化合物36种,正丁醇萃取物中鉴定出化合物48种.通过与文献比对,62种化合物中有7种化合物为首次从铁皮石斛中提取得到.结论 该方法可快速有效分析铁皮石斛中多种化学成分,可为铁皮石斛质量控制及药效物质基础研究提供参考.

目的:探讨金钗石斛总生物碱对犬体外循环（CPB）过程中缺血再灌注心肌脂代谢的影响及其可能机制。方法:健康成年中华田园犬24只，雌雄各半，体重（11.2±1.5）kg，随机分为假手术组、模型组、溶剂对照组、治疗组（金钗石斛总生物碱，剂量为6 mg/kg）4个组（每组6只），均建立体外循环，除假手术组外其余各组均阻断主动脉60 min后再开放。各组于体外循环转流前（T1）和开放主动脉再灌注15 min（T2）、60 min（T3）、90 min（T4）4个时间点检测心肌对血浆游离脂肪酸的摄取率、心肌组织中长链脂肪酰辅酶A（LCACoA）浓度，分析心脏功能及测定心肌组织内脂肪酸转位酶（FAT/CD36）mRNA和蛋白的表达。结果:各组犬心肌对血浆游离脂肪酸的摄取率、心肌组织中LCACoA浓度及FAT/CD36 mRNA的表达在流转前差异均无统计学意义（均 P>0.05），主动脉开放后（T2）以上指标模型组[分别为（35.8±4.7）%、（8.55±1.51）nmol/g、3.23±0.68]和治疗组[分别为（27.4±2.7）%、（6.10±1.38）nmol/g、2.20±0.56]均高于假手术组[分别为（19.6±3.9）%、（4.16±0.81）nmol/g、1.19±0.52]（均 P<0.05），在T2时间点最高，后逐渐下降；同模型组相比，以上指标治疗组的升高幅度偏低（均 P<0.05）。各组心脏功能指标：左室收缩压（LVSP）、左室舒张末压（LVEDP）、左室内压最大上升/下降速率（±dp/dtmax）流转前差异均无统计学意义（均 P>0.05），主动脉开放后（T2），以上心脏功能指标模型组[分别为（76.5±9.1）mmHg、（31.1±2.9）mmHg、（1.2±0.4）mmHg/ms、（-0.9±0.1）mmHg/ms]与治疗组[分别为（92.9±8.7）mmHg、（25.3±3.6）mmHg、（1.8±0.4）mmHg/ms、（-1.3±0.1）mmHg/ms]均低于假手术组[分别为（165.5±12.9）mmHg、（6.5±0.5）mmHg、（3.3±0.6）mmHg/ms、（-2.9±0.3）mmHg/ms]（均 P<0.05），但治疗组的心脏功能指标受损程度低于模型组（均 P<0.05）。 结论:金钗石斛总生物碱在犬体外循环过程中，可通过抑制FAT/CD36在心肌组织中的表达异常，降低心肌对游离脂肪酸的摄取，减少LCACoA在心肌组织内异常蓄积，达到减轻缺血再灌注后心肌损伤的作用。

肺癌是最常见的恶性肿瘤,其发病机制复杂、恶性程度高,严重威胁了患者的生命健康.p53信号通路是影响肺癌进程的重要通路,被众多研究者视为肺癌靶向治疗的潜在靶点之一.近年来,已有较多研究深入探讨了中药调控p53信号通路干预肺癌的可行性.基于此,本文系统总结了中药调控p53信号通路干预肺癌的作用机制研究进展,发现清金得生片、调气消积汤、补肺通络解毒方、健脾补肾方及益气扶正解毒方等中药复方及制剂可通过激活p53信号通路,促进肺癌细胞自噬及凋亡,抑制肺癌细胞生长及转移,增强机体免疫功能,发挥抑癌作用;拟人参皂苷Rh2、柴胡皂苷D、重楼皂苷Ⅶ、石斛碱、槐定碱、藤黄酸、雷公藤甲素及雷公藤甲素丁二酸单酯YJ-4等中药单体可通过激活p53信号通路,促进肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞增殖,调控肺癌细胞周期,发挥抑癌作用.

铁皮石斛Dendrobii Officinalis Caulis是我国传统的名贵中药,具有益胃生津、滋阴清热等功效,其活性成分能够缓解、治疗及调节多种疾病,具有很高的开发价值.铁皮石斛主要活性成分包括多糖、生物碱、黄酮类化合物、酚类和氨基酸类等,目前铁皮石斛的相关研究已明确了其活性化合物的结构及传统记载功效.通过对铁皮石斛中不同活性成分种类对肝脏的保护与作用机制进行总结,初步分析了铁皮石斛多糖和其他活性成分保肝功能的构效关系.为铁皮石斛在植物医学和现代药物的应用提供依据,为铁皮石斛的进一步开发利用提供参考.

[目的]探讨铁皮石斛多糖(DOP)对CCl4 诱导肝纤维化(HF)的影响及其作用机制.[方法]将56 只雄性SD 大鼠随机分为七组:正常组(NG)、模型组(MG)、秋水仙碱组(CG,0.1mg/kg)、扶正化瘀组(FG,0.45g/kg)、低剂量DOP 组(LDG,0.05 g/kg)、中剂量DOP 组(MDG,0.1 g/kg)和高剂量DOP 组(HDG,0.2 g/kg),每组8 只.采用皮下注射40%CCl4 橄榄油混合液制备HF 大鼠模型,每3 d 注射1次,共10周.造模第6周结束后,各药物组分别给予秋水仙碱、扶正化瘀和DOP 溶液灌胃处理,NG 和MG 大鼠给予等量0.9%生理盐水处理,每天1次,连续4周.各组大鼠肝组织病理学采用苏木精-伊红(HE)、Masson 染色、天狼星红(Sirius red)染色检测;肝功能和肝纤四项指标采用血液生化法检测;肝组织中α-SMA、Col-I、E-cadherin、ZEB1 基因和蛋白的表达分别采用RT-qPCR 法和Western Blot法检测.[结果]HE、Masson、Sirius red 染色结果显示MG 大鼠肝脏组织出现典型的HF 病理特征,LDG、MDG 和HDG大鼠HF 均出现不同程度改善.肝功能检测结果显示,LDG、MDG、HDG 大鼠的血清AST、TBIL、AKP 水平与MG 相比均显著降低(P＜0.05或＜0.01),血清ALT 水平除LDG 外均显著降低(P＜0.05或＜0.01).肝纤四项指标检测结果显示,LDG、MDG、HDG 大鼠的血清HA、LN、PC-Ⅲ、COL-Ⅳ 含量与MG 比较均明显下降(P＜0.05或＜0.01).基因、蛋白检测结果显示,LDG、MDG、HDG 大鼠肝组织中α-SMA、COL-I、ZEB1 的相对表达量明显降低(P＜0.05或＜0.01),而E-cadherin 的相对表达量升高(P＜0.05或＜0.01).此外,HA、α-SMA、COL-I、ZEB1、E-cadherin 的表达均存在一定的DOP 剂量依赖性.[结论]DOP 可通过抑制大鼠肝组织的上皮-间质转化减轻CCl4 诱导的HF 程度.

研究金钗石斛Dendrobium nobile茎中非生物碱部分的化学成分.运用大孔吸附树脂、MCI、硅胶、反相C18、Sephadex LH-20 凝胶柱色谱、制备薄层色谱及制备型高效液相色谱等技术进行化合物的分离纯化,根据理化性质、波谱数据结合参考文献鉴定化合物结构.从金钗石斛茎中分离得到 8 个化合物,分别为soltorvum F(1)、对羟基苯丙酸(2)、香草酸(3)、对羟基苯甲酸(4)、N-反式桂皮酸酰对羟基苯乙胺(5)、(+)-(1R,2S,3R,4S,5R,6S,9R)-2,11,12-trihydroxypicrotoxane-3(15)-lactone(6)、dendronobilin H(7)、soltorvum E(8).其中化合物 1 为新化合物,命名为soltorvum F,化合物 8 为首次从石斛属中分离得到.

综述中药单体靶向磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路防治糖尿病肾病(DN)的研究进展.研究表明,PI3K/Akt/mTOR信号通路可以抑制炎症反应、氧化应激、细胞凋亡和自噬,在DN发生发展中起着重要作用;中药单体(黄芩苷、石斛碱、姜黄素、三七皂苷R1、桔梗皂苷D、蛇床子素)可通过靶向调控该信号通路有效防治DN.

目的 基于网络药理学探讨及比较金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.和霍山石斛D.huoshanense活性成分治疗阿尔茨海默病的作用机制.方法 基于中国知网、万方和PubMed数据库收集金钗石斛、霍山石斛的有效成分;PubChem平台查询活性成分结构;SwissADME平台筛选金钗石斛、霍山石斛活性成分的靶点;SwissTartgetPrediction平台预测各活性成分的作用靶点;GeneCards和OMIM数据库检索阿尔茨海默病相关靶点;Cytoscape 3.9.1 构建"活性成分-疾病-靶点"网络图;String数据库分析并构建药物与疾病的蛋白质相互作用(PPI)网络;利用Metascape进行基因本体(GO)功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果 共获得金钗石斛有效成分 84 个,核心成分为crepidatin、N-isopentenyl-6-hydroxydendroxinium、3-O-methylgigantol等;霍山石斛有效成分 56 个,核心成分为erianin、dendrocrepine、dendrocandin U等;金钗石斛和霍山石斛映射疾病靶点分别为 255、243 个,共同靶点 208 个,核心靶点为蛋白激酶B(Akt)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、白蛋白(ALB)等;GO功能和KEGG富集分析结果显示,金钗石斛、霍山石斛治疗阿尔茨海默病的共同作用部位主要在树突;主要通路为磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)-Akt 信号通路、神经退行性变的途径-多种疾病、阿尔茨海默病通路等.此外,金钗石斛可作用于神经元细胞体,调节Toll样受体信号通路;霍山石斛可作用于轴突,调节丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路.结论 金钗石斛与霍山石斛都可能通过不同成分和不同通路治疗阿尔茨海默病.

目的 前期研究发现,石斛碱(DDB)通过诱导自噬,促进溶酶体酸化,改善阿尔茨海默病动物学习记忆功能,本研究拟采用PC12细胞探讨DDB诱导自噬、促进溶酶体酸化的分子机制.方法 将PC12细胞随机分为细胞对照组和DDB给药组.Western印迹法检测LC3,p62,mTOR,pmTOR,S6K,pS6KA,ATP6V1A和ATP6V0a1等蛋白及TFEB的核蛋白及浆蛋白水平,Lyso-Tracker检测溶酶体酸化情况.免疫荧光染色观察LAMP2与mTOR的共定位情况及TFEB与细胞核共定位情况;实时荧光定量PCR法检测溶酶体生物发生相关基因;ELISA检测V-ATP酶的活性.DARTS 实验检测 DDB 和 ATP6V1A 相互作用.沉默ATP6V1A基因后,采用Western印迹法检测LC3、p62蛋白水平及Lyso-Tracker检测溶酶体酸性情况.结果 与细胞对照组相比,DDB给药组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,p62,pmTOR 和 pS6K 蛋白水平及TFEB浆蛋白水平降低;ATP6V1A和ATP6V0a1蛋白水平和TFEB核蛋白水平升高;溶酶体酸化显著增加.DDB抑制mTOR与LAMP2的共定位,增加TFEB与细胞核的共定位,增加溶酶体生物发生相关基因的表达,显著增加V-ATPase的活性.DARTS实验显示,DDB与ATP6V1A结合.在Sh-ATP6V1A的细胞中,DDB增加LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,减少p62蛋白水平以及促进溶酶体酸化作用被显著抑制.结论 DDB靶向结合ATP6V1A,抑制mTORC1向溶酶体募集,导致mTORC1失活,进而诱导自噬;并通过促进TFEB核转位,促进溶酶体生物发生,从而促进溶酶体酸化.