目的:探讨BRD4对高表达程序性死亡受体配体1(PD-L1)非小细胞肺癌细胞PD-L1的表达及增殖迁移的影响。方法:通过GEPIA中TCGA数据库，获取有关于非小细胞肺癌患者的相关数据，对高表达PD-L1、BRD4的非小细胞肺癌患者进行总生存率分析，并对PD-L1和BRD4的表达情况进行相关性分析。PD-L1 mRNA及蛋白的表达水平，选择高表达PD-L1的细胞株进行后续实验。分别用si-NC和si-BRD4转染A549细胞株，获得NC组和敲低BRD4组。通过实时荧光聚合酶链反应和蛋白质印迹法分别检测2组的BRD4和PD-L1的mRNA及蛋白表达水平。集落形成实验检测细胞的增殖成瘤能力，划痕实验检测细胞的迁移能力。分别加入DMSO和BRD4抑制剂JQ1获得对照组和JQ1组，蛋白质印迹法和CCK-8实验检测2组0、12、24、36、48 h的A549细胞PD-L1蛋白的表达和细胞增殖水平。结果:高表达BRD4、PD-L1的非小细胞肺癌患者中表现出低生存率( χ2值分别为6.538、8.258，均 P<0.05)。PD-L1和BRD4的表达呈正相关( r＝0.57， P<0.05， n＝105)。A459细胞PD-L1 mRNA及蛋白的表达水平均高于H460、H1975细胞，差异均有统计学意义( F值分别为2.58、2.67，均 P<0.05)。敲低BRD4组A549细胞中PD-L1的mRNA及蛋白表达水平低于NC组，差异均有统计学意义( t值分别为6.37、7.54，均 P<0.05)。敲低BRD4的表达后，非小细胞肺癌A549细胞的迁移能力、集落形成能力以及生长的能力较对照组降低。随着时间的增加，JQ1组PD-L1蛋白的表达水平逐步下调。自12 h开始，2组PD-L1蛋白的表达水平比较差异均有统计学意义( t值分别为7.25、8.24、10.25、12.23，均 P<0.05)。CCK-8实验显示，随着时间的增加，JQ1组A549细胞增殖水平逐步下调。自12 h开始，2组A549细胞增殖水平差异均有统计学意义( t值分别为8.86、12.25、15.24、7.586，均 P<0.05)。 结论:抑制BRD4可以抑制高表达PD-L1非小细胞肺癌细胞PD-L1的表达及增殖迁移。

目的:探讨含溴结合域蛋白4(BRD4)抑制剂对野生型Kras分化型甲状腺癌(DTC)的影响及其机制。方法:选取DTC细胞株Kras WT TPC-1，构建基因突变型Kras G12D TPC-1细胞。采用CCK-8法检测BRD4抑制剂JQ-1对Kras WT TPC-1细胞增殖活力的影响。用0.2 μmol/L JQ-1处理Kras WT TPC-1细胞(JQ-1组)，另设阴性对照(NC)组，分别采用Transwell侵袭实验、流式细胞术检测JQ-1对Kras WT TPC-1细胞侵袭和凋亡的影响；检测JQ-1对BRD4、miR-106b-5p、P21表达的影响，以及P21抑制剂UC2288对P21、BRD4表达的影响。将Kras WT TPC-1细胞分为JQ-1+NC-OE组、JQ-1+p21-OE组(过表达p21)及JQ-1+p21-OE+miR-106b-5p mimic组(同时过表达p21和miR-106b-5)，检测各组细胞增殖、侵袭及凋亡情况。将TPC-1细胞分为Kras WT组、Kras WT+JQ-1组、Kras G12D组及Kras G12D+JQ-1组，检测各组细胞增殖、侵袭及凋亡情况。 结果:JQ-1以剂量和时间依赖方式抑制Kras WT TPC-1细胞的增殖活力。在NC组和JQ-1组中，细胞侵袭数分别为124.67±9.61、82.67±8.02，细胞凋亡率分别为(5.91±0.34)%、(10.33±1.10)%，差异均具有统计学意义( t＝5.812， P＝0.004； t＝6.653， P＝0.003)。JQ-1显著抑制Kras WT TPC-1细胞中BRD4及miR-106b-5p的表达并促进P21的表达。UC2288显著抑制P21表达，但对BRD4表达无显著影响。JQ-1+NC-OE组、JQ-1+p21-OE组及JQ-1+p21-OE+miR-106b-5p mimic组中，Kras WT TPC-1细胞24 h增殖活力分别为0.46±0.03、0.35±0.04、0.44±0.03( F＝8.720， P＝0.017)，JQ-1+p21-OE组较JQ-1+NC-OE组显著降低( P<0.05)；3组细胞侵袭数分别为83.00±9.17、56.67±6.03、79.67±10.07( F＝8.347， P＝0.018)，JQ-1+p21-OE组较JQ-1+NC-OE组显著减少( P＝0.009)；3组细胞凋亡率分别为(10.00±0.49)%、(15.39±1.14)%、(10.32±0.80)%( F＝37.764， P<0.001)，JQ-1+p21-OE组较JQ-1+NC-OE组显著增加( P<0.001)；JQ-1+p21-OE+miR-106b-5p mimic组与JQ-1+NC-OE相比，细胞增殖活力、侵袭数及凋亡率差异均无统计学意义(均 P>0.05)。在Kras WT组、Kras WT+JQ-1组、Kras G12D组及Kras G12D+JQ-1组中，24 h细胞增殖活力分别为0.50±0.05、0.39±0.04、0.68±0.08、0.64±0.05( F＝17.776， P<0.001)，与Kras WT组相比，Kras WT+JQ-1组增殖活力显著降低，Kras G12D组增殖活力显著升高(均 P<0.05)；各组细胞侵袭数分别为129.33±11.50、86.00±9.54、161.67±13.01、146.33±13.20( F＝22.598， P<0.001)，与Kras WT组相比，Kras WT+JQ-1组侵袭数显著降低( P＝0.002)，Kras G12D组侵袭数显著增加( P＝0.010)；各组细胞凋亡率分别为(6.17±0.50)%、(10.42±0.73)%、(3.43±0.47)%、(3.41±0.32)%( F＝119.170， P<0.001)，与Kras WT组相比，Kras WT+JQ-1组中细胞凋亡率显著增加( P<0.001)，Kras G12D组凋亡率显著降低( P<0.001)；Kras G12D+JQ-1组细胞增殖活力、侵袭数及凋亡率与Kras G12D组相比差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:BRD4抑制剂能够通过调节BRD4/miR-106b-5p/P21分子轴，特异性抑制Kras野生型DTC的发展，而对Kras突变型DTC肿瘤细胞的增殖、侵袭和凋亡无显著影响。

溴结构域蛋白 4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)是溴结构域和超末端结构域家族的成员,在调节基因转录、细胞增殖、凋亡和炎症方面发挥着重要作用.BRD4 与各种疾病密切相关,包括癌症、神经系统疾病和病毒感染.虽然 BRD4 在癌症研究领域引起了广泛的关注,但是关于它在骨相关疾病中的影响,包括骨关节炎、椎间盘退变、骨质疏松和骨肿瘤等方面的研究还很有限.最近的研究表明 BRD4 参与骨相关疾病的发病机制,突出其重要作用.因此,笔者综述了近年来 BRD4 及其抑制剂在骨相关疾病中的研究进展.通过阐述 BRD4 的结构和功能以及 BRD4 及其抑制剂在骨相关疾病中的作用,提示BRD4 可能是治疗骨相关疾病的潜在靶点.

Bromodomain-containing protein 4(BRD4),a pivotal member of the bromodomain and extra-ter-minal domain(BET)family,is integral to the regulation of vital biological processes,including the cell cycle and gene ex-pression.Studies have identified extensive expression of BRD4 in cardiomyocytes and its influence on various signaling pathways.The dysregulation of BRD4 leads to significant alterations in these pathways,culminating in pathological states such as myocardial inflammation,fibrosis,oxidative stress,and hypertrophy.These changes are instrumental in the onset and progression of cardiovascular diseases.This review summarizes the advances in research on BRD4 and its inhibitors in the context of cardiovascular diseases,with a focus on providing insights for precise therapeutic interventions.

目的:观察三石汤对BRD4/NF-κB/NLRP3通路介导的巨噬细胞焦亡的影响,从而阐明三石汤抑制痛风性关节炎的分子机制.方法:以佛波酯诱导THP-1人单核细胞株分化巨噬细胞,并分为空白组、模型组、三石汤低剂量、中剂量、高剂量和BRD4抑制剂组.除空白组外,余下各组以尿酸单钠结晶诱导构建痛风性关节炎细胞模型.分别采用CCK8检测巨噬细胞的活性,流式细胞术检测巨噬细胞焦亡水平,酶联免疫吸附法检测LDH的活性和IL-1β及IL-18的含量,Western blot检测BRD4/NF-κB/NLRP3通路中相关蛋白的表达.结果:与空白组比较,模型组巨噬细胞活性下降,焦亡水平、LDH活性、IL-1β与IL-18含量、BRD4、p-NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1 p20和IL-1β蛋白的表达均显著的上调,差异均具有统计学意义(P<0.05).与模型组相比,三石汤组巨噬细胞活性上调,焦亡水平、LDH活性、IL-1β与IL-18含量、BRD4、p-NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1 p20和IL-1β蛋白表达均显著的下降,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论:三石汤通过抑制BRD4/NF-κB/NLRP3通路激活抑制巨噬细胞焦亡,从而改善痛风性关节炎的炎症水平.

蛋白水解靶向嵌合分子(protein proteolysis-targeting chimeras,PROTACs)是一种杂合双功能小分子化合物,通过将目标靶蛋白和细胞内的E3泛素连接酶拉近,利用泛素-蛋白酶体途径特异性的降解靶蛋白.近年来,CRL4CRBN、CRL2VHL、cIAP等E3泛素连接酶特异性小分子配体的发现,使PROTACs技术取得了巨大的突破,利用PROTACs实现了对溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)、雌激素受体(estrogen receptor,ER)和雄激素受体(androgen receptor,AR)等多种癌症相关蛋白的降解,展现出了小分子抑制剂类抗肿瘤药物不具备的独特优势,是抗肿瘤药物研发的新策略,有望在靶向抗肿瘤药物研究方面实现新的突破.本文详细总结了PROTACs技术在抗肿瘤药物研发中的研究进展,并总结了其所面临的问题与挑战.

目的 探讨BRD4抑制剂JQ1对膀胱癌细胞株的作用及其作用机制.方法 以浓度分别为0.0032、0.016、0.08、0.4、2、10μmol/L JQ1处理膀胱癌细胞株,在24、48、72 h用CCK8法检测JQ1对膀胱癌细胞增殖的影响并计算JQ1在膀胱癌细胞中的IC50值,之后选取浓度为0.5、1 μmol/L的JQ1,采用流式细胞仪检测JQ1对膀胱癌细胞凋亡及周期作用,Transwell侵袭实验检测JQ1对膀胱癌细胞侵袭能力的影响,qRT-PCR法检测癌基因C-MYC及抗凋亡基因Bcl-2的表达.结果 JQ1抑制膀胱癌细胞的增殖,促进膀胱癌细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期,抑制膀胱癌细胞侵袭,下调癌基因C-MYC及抗凋亡基因Bcl-2的表达.结论 JQ1可以抑制膀胱癌细胞株的生长,其作用机制可能与JQ1抑制癌基因C-MYC及抗凋亡基因Bcl-2表达有关.

目的探讨高三尖杉酯碱(HHT)联合BRD4抑制剂JQ1对急性髓系白血病(AML)细胞株Kasumi-1、Mv4-11的凋亡诱导作用.方法MTS法测HHT、JQ1单药及两药联合对AML细胞株的抑制作用,流式细胞仪检测两药联合对AML细胞株凋亡的作用,Western blot法检测两药联合对凋亡相关蛋白(Bcl-2、Caspase-3、Parp)的作用.结果与HHT、JQ1单药比较,两药联合的抗白血病效应明显增强,能明显抑制AML细胞株Kasumi-1、Mv4-11的增殖;可促进细胞凋亡作用,并明显抑制Bcl-2蛋白表达,激活Caspase-3,促进Parp的裂解.结论HHT联合JQ1可以增强抗AML细胞株的作用,促进AML细胞株的凋亡,是有效的联合方案.

目的:探讨BRD4抑制剂JQ1对前列腺癌细胞增殖的影响及其作用机制.方法:JQ1浓度分别为0.016,0.08,0.4,2,10,20,50 μmol/L处理前列腺癌细胞DU145,在24,48,72 h用CCK8法检测JQ1对前列腺癌细胞DU145增殖的影响并计算JQ1在前列腺癌细胞DU145的IC50值,之后选取JQ1浓度为10,20 μmol/L.流式细胞仪检测JQ1对前列腺癌细胞株DU145凋亡及细胞周期的影响,细胞划痕实验检测JQ1对前列腺癌细胞DU145迁移能力的影响,Western Blot法检测癌基因C-MYC蛋白表达量.结果:浓度为10,20 μmol/L的JQ1抑制前列腺癌细胞DU145的增殖及迁移,促进前列腺癌细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期,下调C-MYC蛋白表达量.结论:JQ1可以抑制前列腺癌细胞株的生长,其作用机制可能与JQ1下调癌基因C-MYC表达有关.

目的 探索BRD4抑制剂JQ1协同传统化疗药物阿霉素(adriamycin,ADM)治疗骨肉瘤的有效性.方法 选取人骨肉瘤细胞系143b,在体外进行CCK8细胞增殖实验,了解ADM和JQ1对143b细胞的半数抑制率(IC50)剂量;应用低于IC50剂量的ADM或JQ1或联合应用ADM和JQ1,进行平板克隆实验和细胞凋亡实验;利用裸鼠皮下成瘤实验,观察应用ADM或JQ1或联合应用ADM和JQ1对体内肿瘤生长的抑制,以及诱导体内肿瘤细胞凋亡的作用;通过Western印迹法探索JQ1协同ADM抑制骨肉瘤细胞的可能机制.结果 ADM和JQ1对人骨肉瘤细胞系143b的IC50分别为0.23 μmol/L和9.47 μmol/L;选取0.2μmol/L ADM和8μmol/L JQ1进行平板克隆和细胞凋亡实验.单独应用ADM或JQ1可以抑制骨肉瘤细胞的克隆形成能力并诱导凋亡,联合ADM和JQ1可显著抑制骨肉瘤细胞的克隆形成能力并诱导凋亡,效果显著优于单药(P＜0.05).单独应用ADM或JQ1可抑制小鼠体内骨肉瘤的生长,联合应用ADM和JQ1对肿瘤生长的抑制要明显优于单独用药,差异具有统计学意义(P＜0.05).Caspase3免疫组化染色提示单独应用ADM或JQ1都可以在体内诱导人骨肉瘤细胞143b的凋亡,联合ADM和JQ1显著增强了对骨肉瘤细胞凋亡的诱导.Western印迹法提示骨肉瘤细胞在单独应用ADM后,磷酸化的Akt(p-Akt)和磷酸化的mTOR(p-mTOR)蛋白表达都上调了,而JQ1能够抑制p-Akt和p-mTOR的表达,JQ1联合ADM处理过的骨肉瘤细胞中p-Akt和p-mTOR的表达显著低于单独应用ADM组.结论 JQ1联合ADM能够显著抑制骨肉瘤细胞在体外和体内的生长,并诱导骨肉瘤细胞的凋亡;JQ1可能是通过抑制Akt/mTOR通路协同ADM发挥抑制人骨肉瘤细胞的作用.