目的 探讨食管鳞癌(esophageal squamous cell carcino-ma,ESCC)中CBX4的表达情况,揭示CBX4对ESCC细胞增殖的影响及其潜在机制.方法 TCGA数据库中分析CBX4在不同肿瘤中的表达情况;GEO在线数据库对ESCC及其对应癌旁组织CBX4的表达水平进行t检验分析;过表达或敲低CBX4后,通过MTT、菌落集成实验和流式凋亡术检测CBX4对ESCC细胞活力的影响;裸鼠皮下成瘤和免疫组化法验证CBX4对瘤体增殖的影响;qRT-PCR和Western blot方法验证凋亡相关基因PARP、Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达水平;筛选转录组测序结果推测CBX4可能的作用机制,并通过qRT-PCR和Western blot进行验证.结果 CBX4在多种肿瘤中高表达;ESCC组织中CBX4表达高于正常组织.敲低CBX4后ESCC细胞凋亡增加,增殖被抑制(P＜0.05);同时,被剪切的PARP和Bax抑癌基因mRNA和蛋白表达水平升高,促癌基因Bcl-2表达水平降低.体内裸鼠成瘤结果表明,过表达CBX4后,瘤体体积和Ki67表达明显增加(P＜0.05).转录组测序结果表明CBX4与p38 MAPK通路基因相关性高,敲低CBX4后,p38 MAPK通路被激活,其下游转录因子表达量增加(P＜0.05),从而诱导ESCC细胞凋亡.结论 CBX4在ESCC中高表达,发挥促癌作用,可能通过调控p38 MAPK信号通路影响ESCC细胞增殖.

目的:探讨miR-503靶向调控色素框同源蛋白（chromobox2，CBX2）对乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药性的影响及潜在的作用机制。方法:实验设置miR-con组、miR-503组、si-con组、CBX2组、anti-miR-con组、anti-miR-503组、miR-503+pcDNA组、miR-503+pcDNA-CBX2组；采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测miR-503和CBX2 mRNA的表达水平；Western blot实验检测蛋白表达；MTT法检测细胞活性；双荧光素酶实验检测其靶向调控关系。结果:与正常乳腺细胞HBL-100（1.02±0.09）相比，乳腺癌细胞MCF-7（0.41±0.05）、MDA-MB-231（0.25±0.03）和BT474（0.35±0.04）中miR-503的表达水平显著降低；乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、BT474细胞中CBX2 mRNA的表达量分别为（4.02±0.35）、（4.62±0.36）、（3.47±0.33）；乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、BT474细胞中CBX2蛋白的表达量分别为（0.64±0.07）、（0.74±0.05）、（0.68±0.06）；正常乳腺细胞HBL-100中CBX2 mRNA和蛋白含量分别为（1.01±0.08）（0.40±0.04），乳腺癌细胞中CBX2的表达较于正常乳腺细胞明显升高（ P<0.05）；过表达miR-503（3.64±0.30）、沉默CBX2均可抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭，抑制CBX2（0.26±0.03）、细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin-dependent kinases，CDK）4（0.32±0.03）、细胞周期蛋白（Cyclin，CCN）D1（0.58±0.03）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）-2（0.32±0.03）、MMP-9（0.32±0.04）的表达（ P<0.05）。miR-503靶向调控CBX2的表达，过表达CBX2（0.75±0.03）能逆转miR-503对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与耐药性。 结论:miR-503可能通过下调CBX2表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的 探讨纤维蛋白胶凝素-3(FCN3)调控非小细胞肺癌细胞A549的潜在机制.方法 通过在线软件预测对FCN3进行生物信息学分析,并构建其过表达载体和siRNA干扰体系.采用CCK8法和流式细胞仪检测过表达、敲低FCN3对A549细胞增殖和凋亡的影响.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测FCN3对肺腺癌相关基因[染色体盒同源物5(CBX3)、细胞周期依赖激酶抑制剂3(CDKN3)和含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)]表达的影响.结果 过表达FCN3后,A549细胞的凋亡水平升高,增殖水平下降,差异有统计学意义(P＜0.05).敲低FCN3后,A549细胞的凋亡水平下降,增殖水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).过表达FCN3可抑制CBX3、CDKN3和BIRC5 mRNA表达,促进FABP4 mRNA表达;敲低FCN3可促进CBX3、CDKN3和BIRC5 mRNA表达,抑制FABP4 mRNA表达.结论 FCN3可以抑制A549细胞增殖,并促进其凋亡.FCN3或可作为非小细胞肺癌的潜在治疗靶点.

目的 探讨CircFN1调节miR-375/染色框同源物3(CBX3)轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞放射敏感性的影响.方法 将si-NC、si-CircFN1、si-CircFN 1+inhibitor NC和si-CircFN1+miR-375 inhibitor分别转染至ESCC细胞(KYSE-150),分别作为 si-NC 组、si-CircFN1 组、si-CircFN1+inhibitor NC 组和 si-CircFN1+miR-375 inhibitor 组.细胞转染后用2、4、6和8 Gy 6 MV-X射线照射.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞CircFN1和miR-375表达;蛋白质印迹法检测细胞CBX3蛋白表达;克隆形成实验检测KYSE-150细胞受照后的克隆形成能力;CCK8检测KYSE-150细胞活力;Transwell和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;双荧光素酶报告基因实验验证CircFN1与miR-375以及miR-375与CBX3的关系.数据以6次重复实验的(X)±S表示,单因素方差分析和SNK-q检验比较多组间差异.结果 2、4、6 和 8 Gy 照射后,si-CircFN1 组较 si-NC 组 KYSE-150 细胞克隆形成率降低,si-CircFN1+miR-375 inhibitor 组较 si-Cir-cFN1 组和 si-CircFN1+inhibitor NC 组克隆形成率升高(P＜0.05),si-CircFN1 组、si-CircFN1+inhibitor NC 组和 si-CircFN1+miR-375 inhibitor 组放射增敏比(SER)分别为为 1.352、1.374 和 1.011.在 0 Gy 6 MV-X 射线照射下,si-Cir-cFN1组较si-NC组相比,CircFN1与CBX3水平、迁移率和侵袭细胞数量均下降(P＜0.05),miR-375表达量增高(P＜0.05);D(450 nm)值(0.51±0.05 vs 0.97±0.11)降低,q=14.196,P＜0.001;凋亡率[(16.51±1.45)％vs(5.97± 0.62)％]升高,q=22.412,P＜0.001.与 si-CircFN1+inhibitor NC 组相比,si-CircFN 1+miR-375 inhibitor 组 CBX3 水平、迁移率、侵袭细胞数量上升(P＜0.05),miR-375 表达量下降(P＜0.05),D(450 nm)值(0.94±0.09 vs 0.53±0.05)升高(q=12.653,P＜0.001),凋亡率[(6.23±0.67)％vs(15.76±1.55)％]下降,q=20.207,P＜0.001.在 4 Gy 6 MV-X射线照射下,si-CircFN1组与si-NC组相比,CircFN1与CBX3水平、迁移率和侵袭细胞数量均下降(P＜0.05),miR-375 表达量升高(P＜0.05),D(450 nm)值(0.23±0.02 vs 0.77±0.08)下降(q=25.456,P＜0.001),凋亡率[(22.23± 2.58)％vs(9.77±0.98)％]升高,q=15.263,P＜0.001;与 si-CircFN 1+inhibitor NC 组相比,si-CircFN1+miR-375 in-hibitor 组CBX3水平、迁移率、侵袭细胞数量上升(P＜0.05),miR-375表达量均下降(P＜0.05),D(450 nm)值(0.73± 0.06 vs 0.22±0.02)上升(q=24.042,P＜0.001),凋亡率[(10.34±1.23)％vs(23.67±2.62)％]下降,q=16.329,P＜0.001.且4 Gy照射后各组KYSE-150细胞CBX3水平、D(450 nm)、迁移率和侵袭细胞数量低于对应的0 Gy各组,miR-375表达量和凋亡率高于对应的0 Gy各组,均P＜0.05.结论 沉默CircFN1可能通过上调miR-375来抑制CBX3表达,进而增加ESCC细胞放射敏感性.

目的:探讨沉默色素框同源蛋白4(CBX4)对食管胃腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法:RT-qPCR检测2017年6月至2019年6月于山西省肿瘤医院进行食管胃结合部腺癌手术患者的癌组织和癌旁组织及食管胃结合部腺癌细胞系中CBX4的mRNA表达水平.以食管胃结合部腺癌细胞AGS和SK-GT-4为研究对象,分别转染阴性对照(NC)和CBX4 siRNA,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell实验检测细胞的侵袭,Western blot检测细胞中CBX4、β-catenin、c-MYC和cyclin D1的蛋白表达水平.结果:(1)与临近正常组织相比,食管胃结合部腺癌组织中CBX4表达量明显上调;(2)与正常胃上皮细胞GES-1相比,食管胃结合部腺癌细胞中CBX4 mRNA水平显著升高(P<0.05);(3)沉默CBX4表达后,AGS和SK-GT-4细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降;(4)沉默CBX4后,Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达均降低(P<0.05).结论:CBX4在食管胃结合部腺癌组织和细胞中高表达,沉默CBX4可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制食管胃结合部腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.

目的:应用重组cDNA表达克隆血清学鉴定技术(SEREX)筛选与识别短暂性脑缺血发作(TIA)血清相关性抗原基因.方法:采集19例TIA患者血清,免疫筛选人主动脉内皮细胞cDNA表达文库;对阳性靶抗原行单克隆扩增,经单克隆内切除后转换载体pBluescript SK(+)提取质粒;对包含cDNA插入目的基因片段的质粒进行DNA序列检测,通过NCBI-BLAST同源性检索,鉴定具有免疫原性的独立的TIA重组cDNA表达克隆血清抗原基因.结果:(1) SEREX筛选出172个重组cDNA阳性单克隆;(2)单克隆内切除后获得167个pBluescript质粒,酶切鉴定质粒中均包含有目的基因插入片段;(3)生物信息学分析:识别11个独立的重组cDNA表达克隆抗原基因.(4)基因功能解析:发现matrix metalloproteinase 1(MMP1)、chromobox homolog 1(CBX1)和chromobox homolog 5(CBX5)与TIA和脑梗死(CI)的发生、发展关系密切.结论:应用SEREX技术成功筛选及鉴定出TIA相关靶抗原基因,发现MMP1、CBX1和CBX5可能与短暂性脑缺血发作(TIA)和脑梗死(CI)发生发展有关.

目的:探讨TE与FEC新辅助化疗对局部晚期乳腺癌(LABC)患者癌组织SOX4及CBX7表达的影响.方法:选取2015年1月至2017年1月海南医学院第二附属医院东湖分院收治的LABC患者100例,按随机数字表法分为FEC辅助化疗组和TE辅助化疗组,每组50例.比较两组临床疗效、癌组织SOX4和CBX7表达情况以及不良反应发生率.结果:TE辅助化疗组有效率为86.00％,明显高于FEC辅助化疗组(62.00％)(P<0.05).治疗前,两组患者癌组织中SOX4 mRNA、CBX7 mRNA表达量及SOX4蛋白、CBX7蛋白表达阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05).治疗后,两组SOX4 mRNA及其蛋白阳性率下降,而CBX7 mRNA及其蛋白阳性率升高,且以TE辅助化疗组治疗后上述指标变化更为显著(P<0.05).两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:TE方案新辅助化疗治疗LABC的疗效显著,癌组织中SOX4表达下调及CBX7表达上调,且并未增加不良反应的发生率.

[背景]萎锈灵抗性基因作为筛选标记在植物和真菌中得到广泛应用.[目的]构建可以使用萎锈灵作为筛选标记的香菇遗传转化技术.[方法]利用溶壁酶消化培养4d的香菇菌株411-4的菌丝体获得原生质体,加入适量pL-cbx质粒和聚乙二醇溶液,混合物涂布于再生筛选培养基上,培养后挑选菌落进行验证试验.[结果]在原生质体数目＞108个和添加4 μg质粒DNA的情况下,得到了40个抗性转化子.利用PCR实验和转代实验对转化子进行验证,结果显示38个转化子的抗性可稳定遗传,表明萎锈灵抗性基因整合进入了供试菌株的基因组中.[结论]利用香菇411-4菌株建立了一套运用萎锈灵抗性基因作为分子标记的遗传转化技术体系.

为鉴定牙鲆(Paralichthys olivaceus)色素框同源蛋白(Chromobox homolog,CBX)基因cbx2及探讨其在牙鲆性腺中的表达,通过PCR克隆和测序获得了cbx2 cDNA序列;利用多种生物信息学方法在线分析了牙鲆CBX2蛋白质的理化性质与空间结构,并比较了脊椎动物中cbx2的基因结构、氨基酸同源性、系统进化;运用RT-PCR技术分析了cbx2基因在牙鲆成体不同组织的表达情况.结果 表明获得的牙鲆cbx2 cDNA序列包含1 584 bp的开放阅读框,编码527个氨基酸,其蛋白质分子量和等电点分别为56 578.98和10.03,是一种偏碱性的亲水性蛋白,该蛋白无信号肽,无跨膜区域,且编码该蛋白的氨基酸中以丝氨酸(Sr)的含量为最高;空间结构分析发现,牙鲆CBX2蛋白以α螺旋和无规则卷曲为主,其二级结构中含有1个染色质结构域和4个低复杂结构域,该染色质结构域常结合甲基化氨基酸残基.基因结构、氨基酸同源性和系统进化分析表明cbx2基因在脊椎动物进化中较为保守,牙鲆cbx2与尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)、青鳉(Oryzias latipes)的基因结构更为相似,其氨基酸同源性与杜氏()(Seriola dumerili)最高,为89％.RT-PCR结果显示牙鲆cbx2基因在精巢的表达量最高,卵巢次之,而在其他组织中仅有较低的表达.这些结果提示了cbx2基因在牙鲆的性腺发育中可能具有重要作用.

目的 通过深度挖掘Oncomine数据库中的基因信息,分析泛素结合酶E2C(UBE2C)在卵巢癌中的表达及作用机制.方法 收集Oncomine数据库中关于UBE2C研究的信息,对其在卵巢癌的表达水平变化进行分析.采用Kaplan-Meier法分析UBE2C表达水平与卵巢癌患者生存之间的关系,探讨其临床意义.应用Genecards数据库收集与UBE2C基因相关的蛋白,并通过STRING绘制UBE2C相关蛋白网络图,分析蛋白富集的生理过程.结果 在Oncomine数据库中共收集14项关于卵巢癌和卵巢正常组织UBE2C基因有差异表达的研究,对其数据进行分析,发现卵巢癌组织中UBE2C基因的表达显著高于卵巢正常组织(P<0.05).通过Kaplan-Meier生存分析发现高表达UBE2C基因的卵巢癌患者无病生存期、总生存期明显短于低表达者,低表达患者的预后更好(P<0.05).通过Genecards数据库收集到与UBE2C相关的蛋白有RLIM、CBX4、SIAH2等25个,其相关蛋白富集分析结果显示主要富集在泛素依赖蛋白的分解代谢过程、蛋白质分解代谢过程、蛋白质泛素化、有丝分裂细胞周期中泛素-蛋白连接酶活性的调控、有丝分裂细胞周期的调节、细胞周期等生理过程.结论 UBE2C基因可能通过调节蛋白泛素化过程在卵巢癌发生、发展中发挥作用,高表达时提示卵巢癌患者预后不良,靶向UBE2C可能是一个潜在的肿瘤诊断和治疗工具.