目的 分析外周血缺血修饰蛋白(IMA)、色素框同源蛋白7(CBX7)信使RNA(mRNA)、微小RNA(miRNA)-181c-5p对缺血性脑卒中(IS)患者预后不良的预测价值.方法 选取2021年1-12月在河北省邯郸市中医院就诊的150例IS患者作为观察组,根据改良Rankin量表(mRS)评分将IS患者分为预后良好组(mRS评分≤2分)和预后不良组(mRS评分＞2分),另选取同期在河北省邯郸市中医院体检的150例健康人群作为对照组.比较观察组、对照组外周血IM A、CBX7 mRN A、miRN A-181 c-5 p水平,比较预后良好组和预后不良组临床资料.采用Pearson相关分析IS患者外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p水平与mRS评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析IS患者预后不良的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血I MA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p对IS患者预后不良的预测价值.结果 观察组外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).随访结果显示预后良好组有103例患者,预后不良组有47例患者.预后良好组和预后不良组性别、年龄,以及合并高血压、糖尿病患者比例比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).预后不良组外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181 c-5p水平高于预后良好组,差异均有统计学意义(P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p水平升高为IS患者预后不良的危险因素(P＜0.05).Pearson相关分析结果显示,IS患者外周血 IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p 水平与 mRS 评分呈正相关(r=0.629、0.475、0.419,P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p 3项指标联合预测IS患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.873,高于单项指标预测的AUC(Z=3.347、3.125、2.974,P＜0.05).结论 外周血IMA、CBX7 mRNA、miRNA-181c-5p水平升高为IS患者预后不良的危险因素,与其预后存在相关性,3项指标联合检测对IS患者预后不良有较高的预测价值.

目的:探讨达拉菲尼治疗皮肤黑色素瘤（CMM）的效果及其对垂体同源框1（PITX1）蛋白表达的影响。方法:选取武汉市第一医院2016年11月至2017年12月收治的86例CMM患者为研究对象，采用随机数字表法分为观察组和对照组各43例，对照组行化疗，观察组在对照组化疗方案基础上加用达拉菲尼。采用免疫组织化学法检测两组患者PITX1蛋白表达情况。比较两组治疗效果、复发率、生存情况、PITX1阳性表达率及不良反应发生情况。结果:观察组治疗有效率高于对照组[46.51%（20/43）比25.58%（11/43）]，差异有统计学意义（ χ2=3.23， P=0.043）；观察组疾病控制率高于对照组[93.02%（40/43）比72.09%（31/43）]，差异有统计学意义（ χ2=5.17， P=0.023）。与对照组比较，观察组总生存、无进展生存均更好，复发率更低，PITX1阳性表达率更高（均 P<0.05）。观察组不良反应发生率低于对照组[11.63%（5/43）比32.56%（14/43）]，差异有统计学意义（ χ2=5.47， P<0.05）。 结论:达拉菲尼治疗CMM效果较好，可提高PITX1蛋白表达水平，降低复发率及不良反应发生率，并延长患者生存时间。

目的:探讨miR-503靶向调控色素框同源蛋白（chromobox2，CBX2）对乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药性的影响及潜在的作用机制。方法:实验设置miR-con组、miR-503组、si-con组、CBX2组、anti-miR-con组、anti-miR-503组、miR-503+pcDNA组、miR-503+pcDNA-CBX2组；采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测miR-503和CBX2 mRNA的表达水平；Western blot实验检测蛋白表达；MTT法检测细胞活性；双荧光素酶实验检测其靶向调控关系。结果:与正常乳腺细胞HBL-100（1.02±0.09）相比，乳腺癌细胞MCF-7（0.41±0.05）、MDA-MB-231（0.25±0.03）和BT474（0.35±0.04）中miR-503的表达水平显著降低；乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、BT474细胞中CBX2 mRNA的表达量分别为（4.02±0.35）、（4.62±0.36）、（3.47±0.33）；乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、BT474细胞中CBX2蛋白的表达量分别为（0.64±0.07）、（0.74±0.05）、（0.68±0.06）；正常乳腺细胞HBL-100中CBX2 mRNA和蛋白含量分别为（1.01±0.08）（0.40±0.04），乳腺癌细胞中CBX2的表达较于正常乳腺细胞明显升高（ P<0.05）；过表达miR-503（3.64±0.30）、沉默CBX2均可抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭，抑制CBX2（0.26±0.03）、细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin-dependent kinases，CDK）4（0.32±0.03）、细胞周期蛋白（Cyclin，CCN）D1（0.58±0.03）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）-2（0.32±0.03）、MMP-9（0.32±0.04）的表达（ P<0.05）。miR-503靶向调控CBX2的表达，过表达CBX2（0.75±0.03）能逆转miR-503对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与耐药性。 结论:miR-503可能通过下调CBX2表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的:探讨高压氧（HBO）对人肺癌A549吉西他滨（Gem）耐药细胞的逆转作用及其作用机制。方法:采用体外低浓度梯度递增法构建Gem耐药A549细胞株（A549/Gem）模型。根据实验设计将A549/Gem耐药细胞株分为耐药对照组、高压氧组（HBO组）、Gem组及HBO联合Gem组（HBO+Gem组），处理方式分别为：不做处理，0.2 MPa HBO处理3 h，10.0 μmol/L Gem处理24 h，0.2 MPa HBO处理3 h后用10.0 μmol/L Gem处理24 h。CCK-8法检测A549/Gem耐药细胞的增殖能力，流式细胞术检测A549/Gem耐药细胞的凋亡水平，Western blotting实验检测A549/Gem耐药细胞凋亡蛋白、耐药蛋白及通道蛋白色素框同源蛋白6（CBX6）表达量的变化。结果:与其他3组比较，HBO+Gem组A549/Gem耐药细胞增殖能力明显受到抑制（ P<0.01）。HBO+Gem组A549/Gem耐药细胞凋亡率（32.4%）明显高于对照组（1.08%）、HBO组（5.42%）和Gem组（9.28%），差异均有统计学意义（ P<0.01）。与其他3组相比，HBO+Gem组凋亡蛋白Bcl-2表达量明显降低，Bad、caspase-3表达量明显升高，差异均有统计学意义（ P<0.01）；HBO+Gem组耐药P糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MRP）表达量明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.01）；HBO+Gem处理明显上调A549/Gem耐药细胞CBX6的表达（ P<0.01）。 结论:HBO联合Gem能够显著降低A549/Gem耐药细胞对Gem的耐药性，其主要作用机制是通过调控A549/Gem耐药细胞通道蛋白、耐药蛋白和凋亡相关蛋白的表达，促进A549/Gem耐药细胞凋亡而实现的。

目的:利用生物信息学分析方法筛选与肝细胞癌(HCC)患者预后、诊断和免疫细胞浸润相关的关键基因,并分析其潜在治疗药物.方法:从基因表达汇编(GEO)数据库和癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载HCC基因表达谱数据及相应的HCC患者临床信息.采用R软件limma包筛选HCC差异表达基因(DEGs),对DEGs进行基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,利用STRING数据库构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,使用Cytoscape软件对PPI网络进行可视化并筛选关键基因.通过Kaplan-Meier生存曲线和LASS O回归算法鉴定HCC预后相关关键基因,并利用外部数据集对其表达进行验证和诊断效能分析.采用CIBERSORT算法评估预后相关的关键基因表达与HCC免疫细胞浸润的关系.利用MiRNet和Network Analyst数据库分别构建微小RNA(miRNA)-关键基因mRNA和转录因子(TFs)-关键基因mRNA分子调控网络.利用CMap数据库筛选潜在治疗HCC的小分子药物.结果:共筛选出146个DEGs,其中表达上调基因30个,表达下调基因116个.GO功能和KEGG信号通路富集分析,DEGs明显富集在类固醇、烯化合物和激素代谢等生物过程(BP)及视黄醇代谢、药物代谢-细胞色素P450(CYP450)、补体和凝血级联反应等信号通路.PPI网络分析筛选得到14个关键基因,其中甲酰氨基转移酶环化脱氨酶(FTCD)、分泌型磷蛋白2(SPP2)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、补体C6(C6)和CYP450家族成员2C9(CYP2C9)与HCC患者预后、临床病理分期和组织学分级有明显相关性,在HCC诊断中具有较高的诊断效能,与HCC的免疫细胞浸润有密切关联.Hsa-mir-182-5p、同源框CUT样蛋白1(CUX1)、早期生长反应1(EGR1)、SMAD家族成员4(SMAD4)和肿瘤蛋白P53(TP53)是靶向上述预后相关关键基因的重要调控因子.DL-硫沙芬(DL-thiorphan)、异丙嗪(promethazine)和芹菜素(apigenin)可能对HCC有治疗作用.结论:FTCD、SPP2、TAT、C6和CYP2C9可能是HCC诊断、预后判断和治疗的潜在靶点,预测得到的3种小分子药物DL-thiorphan,promethazine和apigenin可为HCC治疗药物的研发提供参考.

目的 克隆粉防己Stephania tetrandra苄基异喹啉类生物碱生物合成途径中的细胞色素P450 基因StCYP80G,进行生物信息学分析、表达载体构建和组织特异性表达分析.方法 设计特异性引物,从粉防己cDNA中克隆得到StCYP80G编码蛋白的基因序列;利用生物信息学在线工具预测StCYP80G蛋白的结构域、理化性质和跨膜区等分子特征;利用MEGA11.0对氨基酸进行多序列比对和系统进化关系分析;通过同源重组法构建含有 StCYP80G 基因的重组质粒;采用实时荧光定量PCR技术分析该基因在粉防己不同组织中的相对表达量.结果 StCYP80G基因开放阅读框长度为 1 458 bp,编码485 个氨基酸,蛋白质相对分子质量为 54 770,预测其具有CYP450 的保守结构域,含有跨膜结构域,可能定位在内质网上.氨基酸序列比对与系统进化树分析显示,StCYP80G 与莲 Nn CYP80G、智利桂 LsCYP80G 的序列具有同源性且一致度较高,推测StCYP80G与这 2 条序列具有相似的功能.StCYP80G基因在粉防己叶中表达量显著高于根中.质粒序列分析结果表明,重组质粒pESC-Leu-StCYP80G构建成功.结论 StCYP80G基因的克隆、生物信息学分析、重组质粒的构建、以及组织表达特异性的研究结果,为进一步探究其在苄基异喹啉类生物碱生物合成途径中的功能奠定了基础.

目的 研究小檗碱对肿瘤干细胞增殖的体外抑制作用机制,并评价其体内安全性.方法 采用流式细胞术从小鼠皮肤黑色素瘤B16F10细胞中分选肿瘤干细胞;以CD44、CD133、Nanog同源盒蛋白(NANOG)、八聚体结合转录因子4(OCT4)为指标对肿瘤干细胞进行表征.将肿瘤干细胞分为对照组、全反式维甲酸(ATRA)组和小檗碱组,采用CCK-8法检测小檗碱对肿瘤干细胞活力的影响;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率、CD44+/CD133+细胞比例和性别决定区Y框蛋白2(SOX2)阳性细胞率;记录小檗碱处理后肿瘤球的形态变化;记录各组细胞焦亡形态图并检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率,采用Western blot法检测焦亡相关蛋白消皮素E(GSDME)、消皮素E氮端(GSDME-N)、胱天蛋白酶3(caspase-3)和裂解胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达水平.采用斑马鱼胚胎毒性实验对小檗碱的体内安全性进行初步评价.结果 与B16F10细胞比较,肿瘤干细胞中CD44+/CD133+细胞比例和NANOG、OCT4荧光强度均显著升高(P＜0.000 1).小檗碱对肿瘤干细胞的半数抑制浓度为50.98 μmol/L;与对照组比较,小檗碱组细胞凋亡率显著升高,CD44+/CD133+细胞比例和SOX2阳性细胞率均显著降低(P＜0.000 1),肿瘤干细胞球皱缩,部分细胞死亡.小檗碱处理后的肿瘤干细胞,其最外层细胞膜肿胀,LDH释放率显著增加,且随剂量增大而升高(P＜0.05);小檗碱20、40 μmol/L组的GSDME-N、cleaved-caspase-3蛋白表达水平显著上升,GSDME、caspase-3蛋白表达水平显著下降(小檗碱20 μmol/L组除外,P＜0.05).经小檗碱处理的斑马鱼胚胎发育几乎未受影响,胚胎存活率达到100%,未观察到明显畸形.结论 小檗碱具有较好的抗肿瘤干细胞增殖活性,其作用机制可能与激活GSDME、促进细胞焦亡有关;且小檗碱体内安全性良好.

[目的]分析结肠癌(CC)组织中色素框同源物2(CBX2)蛋白与老年CC患者腹腔镜根治术后远处转移的关系及预测患者术后远处转移风险的价值.[方法]收集腹腔镜根治术治疗且完成3年随访的119例老年CC患者资料,患者均接受病理组织CBX2蛋白检测,病例资料、相关检查资料等完整;统计患者随访期间远处转移发生情况并分组,采集并比较患者相关基线资料、CBX2蛋白表达,重点分析CC组织中CBX2蛋白与老年CC患者腹腔镜根治术后远处转移的关系及预测患者术后远处转移风险的价值.[结果]119例患者随访3年有18例出现远处转移(转移组),转移率为15.13％;转移组TNM/T分期Ⅲ期比例、淋巴结转移比例、癌胚抗原(CEA)水平、糖类抗原199(CA199)水平、CBX2蛋白表达均高于未转移组,差异有统计学意义(P＜0.05);组间其他基线资料比较差异无统计学意义(P＞0.05);经Logistic回归分析结果显示,TNM/T高分期、淋巴结转移、CEA升高、CA199升高、CBX2蛋白过表达均可能是老年CC患者腹腔镜根治术后远处转移的风险因子(OR＞1,P＜0.05);绘制ROC曲线发现,CC组织中CBX2蛋白预测老年CC患者腹腔镜根治术后远处转移风险的AUC＞0.800有一定预测价值.[结论]老年CC患者腹腔镜根治术后远处转移可能与组织中CBX2蛋白过表达有关,且CBX2蛋白对老年CC患者术后远处转移有一定预测价值.

目的:从中华大蟾蜍(Bufo gargarizans Cantor)肝脏组织中克隆细胞色素P450还原酶基因(BgCPR,GenBank登录号:OQ572435)进行生物信息学分析,并进行功能验证.方法:基于中华大蟾蜍转录组数据库挖掘BgCPR基因序列,使用SnapGene软件设计BgCPR基因两端特异性引物,以蟾蜍肝脏组织总RNA逆转录成的cDNA为模板进行PCR扩增.利用生物信息学分析BgCPR蛋白理化性质、空间结构并构建系统进化树;基于CRISPR/Cas9基因编辑系统将蟾蜍BgCPR基因表达框经同源重组整合进入酿酒酵母基因组,利用聚乙二醇法制备转化子微粒体,验证其对细胞色素C的还原功能.结果:克隆得到全长2 043 bp的BgCPR基因cDNA,编码680个氨基酸,相对分子质量77 852 Da.结构预测显示,BgCPR蛋白为非分泌蛋白;有一段跨膜螺旋区,位于蛋白的第24～46位氨基酸之间;亚细胞定位预测显示该蛋白定位于内质网上.采用体外酶活实验证明其具有传递电子功能.结论:本研究克隆得到中华大蟾蜍BgCPR基因,并构建了表达具有生物活性的BgCPR的酿酒酵母工程细胞,为进一步研究蟾蜍CYP450基因功能乃至解析蟾蜍二烯内酯类化合物的生物合成途径奠定了基础.

目的 分析卡瑞利珠单抗治疗原发性肝癌手术后患者的疗效及不良反应.方法 选择 2017-2021 年南通大学附属肿瘤医院收治的 78 例原发性肝癌患者作为研究对象,以数字表法随机将其分成观察组和对照组,每组各 39 例.2 组患者均接受射频消融术治疗,对照组患者术后接受GEMOX方案(吉西他滨+奥沙利铂)化疗,观察组患者在对照组的基础上接受卡瑞利珠单抗治疗.2 组患者均持续治疗 3 个周期(1 个周期为 21 d).比较 2 组患者临床疗效、肿瘤标志物水平、上皮钙黏附素基因蛋白(CDH1)与色素框同源蛋白 7(CBX7)水平、不良反应情况.结果 观察组患者疾病控制率(79.49%)高于对照组(61.54%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2 组患者血清糖类抗原 199(CA199)、癌胚抗原(CEA)及甲胎蛋白(AFP)水平均降低(P<0.05),且观察组更低(P<0.05);2 组患者血清CDH1、CBX7 水平均降低(P<0.05),且观察组更低(P<0.05).2 组患者Ⅰ～Ⅳ级胃肠道反应、骨髓抑制、肝肾功能损害发生率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 卡瑞利珠单抗可提高原发性肝癌手术后患者近期疗效,可降低肿瘤标志物、CDH1、CBX7 水平.