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氟西汀对慢性不可预知性温和刺激抑郁症模型小鼠外周及海马脑区NOD样受体家族3炎症小体活性影响的研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨NOD样受体家族3(NOD-like receptors3,NLRP3)炎症小体介导的炎症反应与抑郁症发病的相关性,并研究氟西汀对该过程的影响。方法:选取雄性 C57BL/6J(野生型)小鼠120只,采用随机数字表法将其随机分为对照1组、对照2组、慢性不可预知性温和刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS组)及CUMS+氟西汀组。另取雄性 C57BL/6J(NLRP3基因敲除,NLRP3-/-)小鼠30只,作为NLRP3-/-组。对照1组及对照2组:不做处理;CUMS组、CUMS+氟西汀组及NLRP3-/-组给予慢性不可预知性温和刺激,连续6周。造模后,对照2组、CUMS+氟西汀组小鼠经腹腔注射氟西汀[10 mg/(kg·d)],其他3组小鼠每天注射等量生理盐水,连续4周。各组小鼠在应激前即刻及应激后每周进行1次行为学测试。应激前即刻、应激后3周、应激后6周抽取尾静脉血,3 000 r/min离心10 min,留取上清液冻存备用,采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)水平。各组小鼠在给予药物干预[10 mg/(kg·d)氟西汀或等量生理盐水]后每周进行1次行为学测试,包括糖水偏好实验、强迫游泳实验(forced swimming test,FST)及悬尾实验(tail suspension test,TST),每组小鼠在给药后1、3、4周抽取尾静脉血,离心留取上清液冻存备用,采用酶联免疫吸附法检测血清IL-1β及IL-18水平,并分别于上述时间点每次每组处死5只小鼠,收集新鲜海马组织低温冻存备用,采用Western-Blot检测海马脑区NLRP3、胱冬肽酶-1(caspase-1)、诱导转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、IL-1β及IL-18的表达。结果:(1)造模情况:CUMS 6周后,与对照1组和对照2组相比,CUMS组及CUMS+氟西汀组小鼠糖水消耗量明显降低,FST及TST不动时间明显延长,造模成功。NLRP3-/-组小鼠经CUMS后,在FST、糖水偏好实验及TST中均未表现出抑郁样改变,造模失败。(2)经腹腔注射氟西汀后,对照2组小鼠与对照1组小鼠相比,糖水消耗量、FST及TST不动时间的差异均无统计学意义( P>0.05),CUMS+氟西汀组小鼠相较CUMS组小鼠糖水消耗量明显增加( P<0.05),FST及TST不动时间明显缩短( P<0.05)。(3)酶联免疫吸附实验检测结果显示,给予CUMS后,与对照1组及对照2组相比,CUMS组及CUMS+氟西汀组小鼠血清 IL-1β、IL-18水平显著升高( P<0.05),NLRP3-/-组小鼠则变化不明显( P>0.05)。给药后,CUMS+氟西汀组小鼠血清中IL-1β、IL-18较CUMS组下降( P<0.05)。(4)蛋白免疫印迹检测结果显示,给予CUMS后,与对照1组及对照2组相比,CUMS组及CUMS+氟西汀组小鼠海马脑区NLRP3的表达、胱冬肽酶-1的活化及诱导转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、IL-1β、IL-18的表达增加( P<0.05),氟西汀治疗后,CUMS+氟西汀组小鼠海马脑区NLRP3的表达、胱冬肽酶-1的活化及NF-κB、IL-1β、IL-18的表达显著下降(分别恢复至对照1组的99%、91%、97%、95%及97%)。 结论:(1)CUMS可引起小鼠海马区NLRP3、胱冬肽酶、NF-κB、IL-1β、IL-18蛋白表达增加以及血清上述炎症指标水平升高,而NLRP3基因敲除小鼠未发现此现象;(2)氟西汀治疗可显著降低抑郁症模型小鼠NLRP3、胱冬肽酶-1、NF-κB、IL-1β、IL-18蛋白表达及血清水平,改善小鼠抑郁样表现。
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编辑人员丨1周前
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早期睡眠剥夺对成年抑郁模型小鼠行为及海马突触可塑性的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨青春期睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)对成年慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型小鼠抑郁行为及海马突触可塑性的影响。方法:将30只清洁级2周龄雄性小鼠按照随机数字表法分为对照组(CON组)、CUMS组和SD+CUMS组,每组10只。SD+CUMS组小鼠在青春期(3~6周龄)每天进行睡眠剥夺4 h,并于成年后(9周龄)采用CUMS方法建立抑郁模型;CUMS组小鼠在9周龄时建立CUMS抑郁模型;CON组小鼠不进行睡眠剥夺干预,不进行CUMS干预。采用体质量、糖水偏爱实验、悬尾实验、强迫游泳实验评价小鼠抑郁行为;采用高尔基染色技术检测小鼠海马CA1脑区基底神经元以及顶端神经元的树突棘密度,电生理膜片钳技术检测小鼠海马CA1脑区锥体神经元微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic current,mEPSC)频率以及幅值的变化。采用Graphpad Prism 7.0软件统计分析和制图,多组间比较应用单因素方差分析,进一步两两比较采用Tukey检验。结果:(1)应激造模后,三组小鼠体质量、糖水偏爱率、强迫游泳不动时间和悬尾时间均差异有统计学意义( F=71.63,39.82,44.13,43.07,均 P<0.01),CUMS组和SD+CUMS组小鼠体质量均低于CON组[(22.92±0.31)g,(20.12±0.27)g,(25.51±0.37)g](均 P<0.01),糖水偏爱率低于CON组[ (63.42±3.33)%,(49.68±3.70)%,(87.40±1.65)%,均 P<0.01],强迫游泳不动时间长于CON组[ (119.20±12.03) s ,(153.80±9.17) s ,(34.30±5.32) s;均 P<0.01],悬尾实验不动时间长于CON组[(115.20±8.19 )s,(156.80±4.35) s,(192.00±4.12) s,均 P<0.01]。与CUMS组相比,SD+CUMS组小鼠体质量低( P<0.01),糖水偏爱率低( P<0.05),强迫游泳的不动时间和悬尾实验的不动时间均更长(均 P<0.01)。(2)在高尔基染色中,三组小鼠海马CA1区顶端神经元和基底神经元树突棘密度均差异有统计学意义( F=38.41,41.34,均 P<0.01),与CON组相比,CUMS组和SD+CUMS组小鼠海马基底神经元树突棘密度以及顶端神经元树突棘密度均较低[基底神经元树突棘:(7.74±0.22)个/10 μm, (6.58±0.27)个/10 μm,(5.00±0.13)个/10 μm,均 P<0.01;顶端神经元树突棘:(8.90±0.23)个/10 μm,(7.63±0.30)个/10 μm, (6.01±0.14)个/10 μm,均 P<0.01];与CUMS组相比,SD+CUMS组小鼠海马基底神经元树突棘密度以及顶端神经元树突棘密度均较低(均 P<0.01)。(3)电生理结果显示:三组小鼠海马锥体神经元mEPSC的频率和幅值均差异有统计学意义( F=38.90,63.37,均 P<0.01)。与CON组相比,CUMS组和SD+CUMS组小鼠CA1脑区锥体神经元mEPSC频率和幅值明显低[频率:(0.39±0.03)Hz,(0.20±0.02)Hz,(0.07±0.02)Hz,均 P<0.01;幅值:(9.98±0.31)pA,(7.74±0.21)pA,(6.36±0.13)pA,均 P<0.01);与CUMS组相比,SD+CUMS组小鼠mEPSC频率和幅值更低(均 P<0.01)。 结论:青春期的SD会加重CUMS模型成年小鼠抑郁行为以及海马突触可塑性的损害。
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编辑人员丨1周前
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骨髓干细胞来源外泌体通过促进海马能量代谢和微血管新生改善小鼠抑郁样行为
编辑人员丨1周前
目的:观察骨髓间充质干细胞来源外泌体(BMSC-Exo)对抑郁症模型小鼠的海马微血管、能量代谢及其行为学的改善作用。方法:(1)分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,提取BMSC-Exo。采用透射电镜观察BMSC-Exo的形态,采用Zetaview分析仪测定BMSC-Exo的粒径分布范围,采用Western blotting实验检测BMSC-Exo中CD9和CD63的表达。(2)取2只小鼠,采用慢性不可预见性温和应激(CUMS)建立抑郁症模型后于海马分别注射磷酸盐缓冲液(PBS)、DiR标记的BMSC-Exo,24 h后采用活体成像系统检测小鼠体内摄取BMSC-Exo情况。(3)将36只小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和BMSC-Exo组,每组12只。后2组小鼠采用CUMS建立抑郁症模型。造模后BMSC-Exo组小鼠海马注射1 μL BMSC-Exo,对照组小鼠注射等量PBS。采用强迫游泳实验(FST)、悬尾实验(TST)及开放旷场实验(OFT)检测小鼠的行为学。采用碱性磷酸酶染色检测小鼠海马微血管数量及长度。采用微正电子发射断层显像/X线计算机体层成像(mPET/CT)检测小鼠海马的能量代谢情况。采用Western blotting实验检测小鼠海马葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达。结果:(1)BMSC-Exo呈典型的盘状囊泡样结构,粒径为(100.5±1.4) nm。Western blotting实验结果证实BMSC-Exo表达CD9、CD63。(2)活体成像检测结果显示注射PBS后小鼠的脑和肝脏未见明显荧光,注射BMSC-Exo后小鼠的脑和肝脏呈现显著局部荧光。(3)与对照组比较,模型组和BMSC-Exo组小鼠FST、TST的静止时间较长,OFT的中央区域运动路程、中央区域运动时间较短,差异均有统计学意义( P<0.05);与模型组比较,BMSC-Exo组小鼠FST、TST的静止时间较短,OFT的中央区域运动路程、中央区域运动时间较长,差异均有统计学意义( P<0.05)。与对照组比较,模型组和BMSC-Exo组小鼠海马标准摄取值(SUV)、微血管长度及微血管数量、海马GLUT1的表达较低,差异均有统计学意义( P<0.05);与模型组比较,BMSC-Exo组小鼠海马SUV值、微血管长度及微血管数量、GLUT1的表达较高,差异均有统计学意义( P<0.05)。3组小鼠海马微血管长度与SUV值呈正相关关系( r=0.540, P<0.001),海马微血管数量与SUV值呈正相关关系( r=0.600, P<0.001)。 结论:BMSC-Exo可促进抑郁症模型小鼠海马微血管新生,提高海马葡萄糖代谢,从而改善抑郁样行为。
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编辑人员丨1周前
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短链脂肪酸对抑郁模型小鼠肠道菌群及海马TLR4/MyD88/NF-κB通路蛋白的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨短链脂肪酸(short chain fatty acid,SCFAs)是否通过改善抑郁模型小鼠肠道菌群失调及调控TLR4/MyD88/NF-κB炎性通路产生抗抑郁作用。方法:60只SPF级6~8周龄C57BL/6J雄性小鼠根据随机数字表法分为对照组、抑郁模型组、SCFAs组,每组20只。抑郁模型组和SCFAs组小鼠采用慢性不可预知温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)方法建立抑郁模型,造模共进行8周,并从第6周开始,SCFAs组小鼠给予短链脂肪酸盐混合溶液饮用,模型组小鼠给予0.78% NaCl溶液饮用,直至造模完成。采用糖水偏爱实验(sucrose preference test,SPT)、强迫游泳实验(forced swimming test,FST)检测小鼠抑郁样行为,旷场实验(open field test,OFT)检测小鼠焦虑样行为。使用16S rRNA基因序列分析小鼠的肠道菌群;采用免疫荧光染色和Western blot方法测定海马组织中星形胶质细胞和TLR4/MyD88/NF-κB炎性通路的活化情况。采用SPSS 26.0进行统计分析,3组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD- t检验。 结果:3组小鼠糖水偏爱率、强迫游泳不动时间和旷场中心区活动时间百分比均差异有统计学意义( F=10.554,10.912,12.599,均 P<0.05)。抑郁模型组小鼠的糖水偏爱率和旷场中心区活动时间百分比均低于对照组(均 P<0.05),强迫游泳不动时间高于对照组( P<0.05)。SCFAs组小鼠糖水偏爱率[(84.7±3.5)%,(75.3±6.0)%]和旷场中心区活动时间百分比[(7.4±1.4)%,(3.2±0.9)%]均高于抑郁模型组(均 P<0.05),强迫游泳不动时间短于抑郁模型组[(110.5±21.5)s,(148.0±20.1)s; P<0.05]。3组小鼠肠道菌群的β多样性差异有统计学意义( P=0.001),与抑郁模型组相比,在科水平,SCFAs组理研菌科与拟杆菌科相对丰度增加,梭菌杆相对丰度降低;在属水平,梭菌属和普雷沃氏菌属相对丰度降低,另枝杆菌属相对丰度增加(均 P<0.05)。免疫荧光结果显示,3组小鼠GFAP表达水平差异有统计学意义( F=16.565, P=0.004);抑郁模型组小鼠GFAP表达高于对照组和SCFAs组(均 P<0.05)。Western blot结果显示,3组小鼠海马组织TLR4、MYD88、NF-κB表达水平均差异有统计学意义以( F=70.59,174.39,14.40,均 P<0.05)。抑郁模型组小鼠TLR4、MyD88和NF-κB的蛋白表达水平均高于对照组和SCFAs组(均 P<0.05)。 结论:SCFAs可以改善抑郁模型小鼠的抑郁样行为,降低星形胶质细胞的激活,这可能与改善肠道菌群失调及下调TLR4/MyD88/NF-κB通路蛋白的过表达有关。
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编辑人员丨1周前
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三七总皂苷对卒中后抑郁模型大鼠学习记忆的影响及其作用机制
编辑人员丨1周前
目的:探讨三七总皂苷(total saponins of Panax notoginseng,TSPN)对卒中后抑郁(post stroke depression,PSD)模型大鼠学习记忆的影响及其作用机制。方法:采用四血管阻断法制作大鼠卒中模型,7 d后采用社会隔离+慢性不可预见性温和应激(CUMS)方法制备PSD模型。大鼠被随机分成假手术组(Sham组, n=10)、卒中组(Model组, n=10)、卒中后抑郁组(PSD组, n=10)和PSD+三七总皂苷组(TSPN组, n=10)。Model组和PSD组在脑缺血后30 min腹腔注射等体积生理盐水,1次/d;TSPN组给予PSD大鼠腹腔注射剂量为75 mg/kg的TSPN,1次/d,连续30 d。30 d后采用水迷宫实验检测各组大鼠的学习记忆,免疫印迹技术检测海马微管相关蛋白(DCX)和巢蛋白(Nestin)的表达,免疫荧光观察海马齿状回的颗粒下层(SGZ)区DCX与内源性细胞增殖标记物(Ki67)的共表达。 结果:与Sham组、Model组相比[(10.4±3.2) s、(19.8±3.7) s],PSD组在第5天的逃避潜伏期[(31.8±3.8) s]显著延长( t=9.23,5.15;均 P<0.05);给予TSPN干预后,大鼠的逃避潜伏期[(14.2±2.8)s]较PSD组明显缩短( t=8.56, P<0.05)。与Sham组相比[(10.3±1.7)次],PSD组跨越平台次数[(4.1±1.1)次]显著减少( t=11.24, P<0.05),给予TSPN干预后PSD大鼠跨越平台次数[(8.4±1.6)次]显著增加( t=5.77, P<0.01)。PSD组海马DCX、Nestin的蛋白水平分别为(0.60±0.02)、(0.58±0.03),给予TSPN干预之后,PSD大鼠海马DCX、Nestin的蛋白水平显著升高(1.07±0.07)、(0.95±0.11),两组DCX、Nestin的蛋白水平的差异有统计学意义( t=20.22,7.68;均 P<0.01)。PSD组大鼠海马SGZ区DCX/Ki67细胞为(16.2±2.8)个/mm 2,TSPN组为(21.2±3.1)个/mm 2,差异有统计学意义( t=2.42, P<0.05)。 结论:三七总皂苷可通过促进海马神经再生改善卒中后抑郁大鼠的学习记忆。
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编辑人员丨1周前
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孕期慢性应激对雌鼠和子代肠道菌群组成及多样性的影响
编辑人员丨1周前
目的:观察孕期慢性应激雌鼠及子代肠道菌群的变化,探索肠道菌群在孕期慢性应激中发挥的作用。方法:于2019年11月,选择SPF级健康成年SD大鼠,16只雌鼠随机分为对照组和模型组,每组8只;12只雄鼠随机分为对照交配组(4只)和模型交配组(8只)。建立孕期慢性不可预知温和应激(CUMS)模型,雌鼠在应激前1天和应激第1、7、14、21天进行眼内眦静脉采血,利用放射免疫法测定血浆皮质酮含量;应激完成后,收集雌鼠新鲜粪便待测。两组子鼠在出生后20 d(PND20)收集新鲜粪便待测,分为对照子鼠组和模型子鼠组样品。采用Illumina Miseq测序技术,测定大鼠粪便中微生物16S rRNA V3-V4区序列,并对群落结构和多样性进行分析。结果:模型组雌鼠在应激第7、14天血浆皮质酮含量均高于同期对照组雌鼠( P<0.05);与对照组比较,模型组Sobs指数、Chao指数、Ace指数、Shannon指数均降低( P<0.05);对照组所特有的物种丰度(OTU)数目为130种,模型组91种;对照组雌鼠厚壁菌门的相对丰度(64.87%)高于模型组(50.83%),而拟杆菌门的相对丰度(31.72%)低于模型组(46.35%);对照子鼠组Sobs指数、Chao指数、Ace指数、Shannon指数和Simpson指数均高于模型子鼠组( P<0.05);模型子鼠组所特有的OTU数目为75种,对照子鼠组93种;对照子鼠组厚壁菌门相对丰度(60.24%)高于模型子鼠组(52.95%)。 结论:孕期慢性应激不仅会引起雌鼠肠道菌群紊乱,而且可能会导致宫内环境改变,进而对子代肠道菌群的群落多样性产生影响。
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编辑人员丨1周前
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脑源性神经营养因子前体对脑卒中后抑郁大鼠行为学及额前皮质凋亡信号通路的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨外源性给予脑源性神经营养因子前体(brain-derived neurotrophic factor precursor,proBDNF)后脑卒中后抑郁(post-stroke depression,PSD)大鼠额前皮质凋亡信号通路蛋白的表达变化。方法:在55只健康成年雌性SD大鼠中,随机选取25只作为PSD组,其余30只随机分为正常组、抑郁组、卒中组,每组10只。卒中组采用线栓法建立大脑中动脉栓塞模型;抑郁组采用慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)结合孤养法制备大鼠慢性应激抑郁模型;PSD组采用线栓法建立MCAO模型,术后1周加以CUMS及孤养法制备PSD模型;PSD组大鼠造模后2周,随机选取15只进行侧脑室埋管,并随机分为proBDNF组、组织型纤溶酶原激活剂组(tPA组)和NS组,埋管后1周进行侧脑室注射tPA、ProBDNF,连续给药1周。于造模后第4周及第8周末采用Western blot检测各组大鼠额前皮质c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p-JNK、p53、p-p53、Bax蛋白表达。采用SPSS 17.0进行数据分析,组间比较采用单因素方差分析,采用SNK- q进行两两比较。 结果:大鼠MCAO造模第4周末和第8周末,正常组、抑郁组、卒中组和PSD组大鼠额前皮质p-p53、p53、p-JNK、JNK和Bax表达均差异有统计学意义( F=3.426~90.355,均 P<0.05)。事后两两比较结果显示,相比正常组,在第4周末,PSD大鼠额前皮质p-JNK(0.378±0.042)、Bax(0.478±0.054)蛋白的表达均升高(均 P<0.05);在第8周末,PSD组大鼠额前皮质中p-JNK(0.411±0.056)、p-p53(0.286±0.083)、Bax(0.471±0.008)蛋白表达均升高(均 P<0.05)。予侧脑室注射proBDNF后,proBDNF组、tPA组和NS组p-p53、p53、p-JNK、JNK和Bax表达差异有统计学意义( F=16.915~287.039,均 P<0.01)。事后两两比较结果显示,相比NS组,proBDNF组大鼠额前皮质p-JNK(0.35±0.01)、p-p53(0.31±0.01)的表达显著增加(均 P<0.05)。予侧脑室注射proBDNF后,proBDNF组、tPA组和NS组大鼠体质量、蔗糖偏好率、水平运动距离和垂直运动距离均差异有统计学意义( F=18.741~76.305,均 P<0.01),与NS组和tPA组相比,proBDNF组行为学指标[体质量(224.36±3.23)g、蔗糖偏好率(69.83±1.72)%、水平运动距离(57.93±2.09)格、垂直运动距离(19.79±1.81)次]均显著下降(均 P<0.05)。 结论:proBDNF促进了PSD大鼠凋亡信号通路的激活。
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编辑人员丨1周前
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银杏二萜内酯改善慢性不可预知性温和刺激(CUMS)大鼠抑郁样行为并影响细胞因子和神经递质水平
编辑人员丨1周前
目的:探讨银杏二萜内酯对慢性不可预知性温和刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)大鼠抑郁样行为的作用及其机制。方法:40只SD大鼠随机分为对照组、慢性应激组,以及慢性应激+银杏二萜内酯低剂量(1.5 mg·kg -1·d -1)组、中剂量(3 mg·kg -1·d -1)组和高剂量(6 mg·kg -1·d -1)组。除对照组,各组造模3周后给予药物治疗,持续给药3周并同时造模。应激期间和结束后测试行为学,取血清和海马下丘脑组织用于炎症因子、神经递质等试剂盒检测。 结果:慢性应激造成大鼠出现抑郁样行为,持续给予银杏二萜内酯可以改善大鼠糖水偏好、强迫游泳不动时间和旷场试验评分。银杏二萜内酯能够显著改善CUMS造成的血清中免疫细胞因子IL-1β、IFN-γ分泌减少,显著升高IL-10、IL-4分泌水平。此外,CUMS造成大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA)轴功能亢进,增加促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)和血浆皮质醇(cortisol,COR)的分泌,负反馈调节海马中神经递质释放,造成CUMS大鼠脑中神经递质水平如5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-hydroxyindoleacetic acid, 5-HIAA)和去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)含量降低。银杏二萜内酯能够显著抑制HPA轴功能亢进,增加脑中神经递质水平。结论:银杏二萜内酯可能通过调节机体免疫环境,抑制HPA轴亢进,增加神经递质释放改善大鼠抑郁样行为。
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编辑人员丨1周前
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孕期慢性应激对子代雌性大鼠抑郁样行为及印记基因IGF-2/H19甲基化的影响
编辑人员丨1周前
目的:探究孕期慢性应激对子代雌性大鼠抑郁行为及海马组织印记基因胰岛素样生长因子-2 (insulin-like growth factor-2,IGF-2)/长链非编码RNA(lncRNA)H19甲基化的影响。方法:32只SPF级雌性SD大鼠按照随机数字表法分为模型组和对照组,模型组大鼠采用慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress model,CUMS)方法建立抑郁模型,对照组正常饲养。应激刺激第7天时,雌雄鼠合笼交配。在应激刺激前1 d和应激刺激第1、7、14、21、28天对两组母鼠行内眦静脉采血,测定血浆皮质酮浓度;在雌性仔鼠出生后第28天和出生后第42天时,每组随机抽取8只,行内眦静脉采血后测定血浆皮质酮浓度;在出生后第42天时,分别通过糖水偏爱实验、悬尾实验和强迫游泳实验测定两组雌性仔鼠的抑郁样行为。采用RT-PCR和Western blot法检测仔鼠海马组织中IGF-2/H19及相关转移酶表达情况。利用Methyl Target技术,对IGF-2差异性甲基化区域(differentially methylated region,DMR)片段2的19个CpG位点,H19印记控制区(imprinting control region,ICR)片段1中8个CpG位点和H19-ICR片段2的15个CpG位点,同时捕获测序,计算每个CpG位点甲基化水平。采用SPSS 26.0,采用重复测量方差分析、 t检验和非参数检验对相关数据进行统计分析。 结果:(1)重复测量方差分析结果显示,母鼠血浆皮质酮的时间与组别的交互效应不显著( F=2.997, P=0.066),时间主效应显著( F=4.44, P=0.010),组别主效应显著( F=41.40, P=0.001)。组间因素的单独效应分析,在应激第14、21、28天,模型组母鼠血浆皮质酮浓度均高于对照组母鼠(均 P<0.001)。(2)在糖水偏爱实验中,模型组雌性仔鼠的液体总消耗[11.10(10.38,11.58)mL,13.55(12.00,15.77)mL, Z=-3.055, P=0.002]、1%蔗糖水消耗[(5.50±1.30)mL,(8.56±2.04)mL, t=-3.582, P=0.003]及1%蔗糖偏爱百分比[(51.35±8.69)%,(62.11±8.05)%, t=-2.576, P=0.022]均低于对照组。(3)模型组雌性仔鼠悬尾实验中静止持续时间[(126.95±39.89)s,(54.30±25.00)s, t=4.375, P=0.001]和强迫游泳实验中持续不动时间[(7.97±6.66)s,(1.85±2.12)s, t=2.478, P=0.037]均长于对照组。(4)模型组雌性仔鼠海马组织IGF-2 mRNA[(0.46±0.24),(1.00±0.00), t=3.821, P= 0.019]、H19 mRNA[(0.60±0.25),(1.00±0.00), t=3.574, P=0.007]表达均低于对照组;模型组雌性仔鼠IGF-2蛋白相对表达低于对照组[(0.77±0.04),(1.00±0.00); t=9.876, P=0.01);CCTC结合因子(CCTC-binding factor,CTCF)的mRNA[(1.29±0.12),(1.00±0.00), t=-4.850, P=0.003]和蛋白相对表达水平[(1.90±0.28),(1.00±0.00), t=-5.513, P=0.005]均高于对照组。(5)模型组雌性仔鼠海马组织IGF-2 DMR区域3个CpG位点甲基化水平均低于对照组( t=-3.21,-3.00,-3.34,均 P<0.05),分别位于chr1215831028、chr1215831055和chr1215831205;IGF-2 DMR片段甲基化水平低于对照组( t=-3.453, P=0.048);模型组雌性仔鼠甲基转移酶DNMT3A mRNA( t=5.102, P=0.002)、DNMT3A( t=10.213, P<0.001)和DNMT3B( t=4.169, P=0.014)蛋白相对表达水平均低于对照组。 结论:孕期慢性应激致雌性仔鼠出现抑郁、绝望状态,其机制可能与甲基化转移酶表达降低引起印记基因IGF-2 DMR甲基化水平降低有关。
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编辑人员丨1周前
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运动对抑郁模型小鼠抑郁样行为及海马齿状回颗粒细胞突触传递的作用
编辑人员丨1周前
目的:探讨慢性不可预见性温和性应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)抑郁模型小鼠海马齿状回颗粒细胞突触传递功能的变化并探讨运动对其影响。方法:48只7周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠,按照随机区组分为对照组、模型组、运动组、氟西汀组,每组12只。采用CUMS方法制备抑郁动物模型,造模连续21 d。造模期间,运动组小鼠每天给予滚筒运动训练,氟西汀组小鼠在造模期间每日给予氟西汀腹腔注射(10 mg/kg),其余组小鼠腹腔注射等体积0.9%氯化钠溶液。采用糖水偏好实验、悬尾实验、强迫游泳实验检测小鼠抑郁样行为,采用旷场实验检测小鼠焦虑样行为;采用全细胞记录海马齿状回颗粒细胞自发性兴奋性突触后电流(spontaneous excitatory postsynaptic currents,sEPSC)、自发性抑制性突触后电流(spontaneous inhibitory postsynaptic currents,sIPSC)及微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic currents,mEPSC)、微小抑制性突触后电流(miniature inhibitory postsynaptic currents,mIPSC)。采用SPSS 23.0对实验数据进行单因素方差分析。结果:(1)行为学结果显示:4组小鼠旷场中央区探索时间、活动总距离及糖水偏好率差异有统计学意义( F=37.85,18.41,28.81,均 P<0.01),模型组小鼠旷场中央区探索时间[(47.81±3.51) s]、活动总距离[(19.63±1.24) m]及糖水偏好率[(55.63±9.11) %]均低于对照组(均 P<0.01);运动组小鼠旷场中央区探索时间[(59.87±3.25) s]、活动总距离[(23.18±1.24) m]及糖水偏好率[(69.03±8.22) %]均高于模型组(均 P<0.05),糖水偏好率低于对照组及氟西汀组(均 P<0.01)。4组小鼠悬尾实验不动时间与强迫游泳实验不动时间差异有统计学意义( F=113.70,56.97,均 P<0.01),模型组小鼠悬尾实验不动时间、强迫游泳实验不动时间均高于对照组(均 P<0.01),运动组小鼠悬尾不动时间、强迫游泳实验不动时间均低于模型组(均 P<0.05),且高于对照组(均 P<0.01)。(2)4组小鼠sEPSC的频率、幅度和电容量差异有统计学意义( F=22.02,17.98,179.00,均 P<0.01),模型组小鼠sEPSC频率、幅度和电容量均低于对照组(均 P<0.05),运动组小鼠sEPSC频率、幅度和电容量均高于模型组(均 P<0.05),且低于对照组与氟西汀组(均 P<0.05)。4组小鼠sIPSC的频率和电容量差异有统计学意义( F=22.12,184.80,均 P<0.01)。模型组小鼠sIPSC频率和电容量均高于对照组(均 P<0.05),运动组小鼠sIPSC频率和电容量均低于模型组(均 P<0.05),且高于对照组(均 P<0.05)。4组小鼠的sEPSC/sIPSC电容量比值差异有统计学意义( F=267.10, P<0.01),模型组小鼠sEPSC/sIPSC电容量比值低于对照组( P<0.05),运动组小鼠sEPSC/sIPSC电容量比值高于模型组( P<0.05),且低于对照组与氟西汀组(均 P<0.05)。(3)4组小鼠mEPSC频率与幅度差异有统计学意义( F=25.07,23.57,均 P<0.01),模型组小鼠mEPSC频率与幅度均低于对照组(均 P<0.05),运动组小鼠mEPSC频率与幅度均高于模型组(均 P<0.05),且低于对照组与氟西汀组(均 P<0.05);4组小鼠mIPSC频率差异有统计学意义( F=13.79, P<0.01)。运动组小鼠mIPSC频率低于模型组( P<0.05),高于对照组( P<0.05)。 结论:运动能够部分改善小鼠抑郁行为,提高海马颗粒细胞突触传递功能。
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编辑人员丨1周前
