目的:探讨基因Panel在诊断新生儿重症监护病房（neonatal intensive care unit，NICU）患儿的基因变异中的应用价值。方法:前瞻性纳入2022年11月至2023年1月湖州市妇幼保健院NICU收治的所有日龄≤28 d的新生儿（病例组）以及在本院足月出生的200例表型无明显异常的健康新生儿作为对照组。以中国可防可治罕见病、中国新筛病种等为基础，筛选明确致病基因与变异位点为靶标，设计适合中国新生儿的基因Panel，针对542种疾病、601个基因。制备干血斑样本，采用该基因Panel进行检测，检出的致病位点采用Sanger测序验证。结合临床特征分析患儿基因检测结果，依据患儿的主要临床诊断（早产儿、新生儿高胆红素血症、出血性疾病、新生儿感染、室间隔缺损/动脉导管未闭和其他）数，分为1、2、3和≥4种诊断。采用 χ2检验及线性关联 χ2检验进行统计学分析。 结果:病例组共纳入173例患儿，致病变异检出率为30.6%（53/173），包括致病基因阳性52例及染色体拷贝数变异1例。病例组致病基因阳性检出率高于对照组［30.1%（52/173）与15.0%（30/200）， χ2=12.26， P<0.001］；病例组共检出14个致病基因，分别为 FLG、UGT1A1、G6PD、MYH7、AR、ABCC2、ACADS、C YP21A2、GJB2、MEFV、PAH、PKHD1、SCN4A及 HBA。在病例组，致病变异检出率在黄疸新生儿中高于无黄疸者［35.2%（44/125）与18.8%（9/48）， χ2=4.42， P=0.036］，但在男婴女婴间、母亲是否高龄及是否有妊娠期糖尿病、是否早产儿、是否发生出血性疾病、是否有新生儿感染、是否发生室间隔缺损/动脉导管未闭组间差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。临床诊断数目1、2、3和≥4种的患儿，致病变异检出率呈线性增长［21.1%（8/38）、25.4%（15/59）、38.2%（13/34）与40.5%（17/42），线性关联 χ2=4.84， P=0.028］。在病例组，变异（包含致病基因阳性及携带者）检出率较高的基因有7个，检出率最高的为 UGT1A1［检出率为24.9%（43/173）］，其他依次为 GJB2、 FLG、 DUOX2、 ABCA4、 G6PD和 MUT基因；7个高频变异位点为 UGT1A1基因c.211G>A（p.Gly71Arg）、c.1091C>T（p.Pro364Leu）、c.-41_-40dupTA及c.686C>A（p.Pro229Gln）， GJB2基因c.109G>A（p.Val37Ile）， FLG基因c.12064A>T（p.Lys4022Ter）及c.3321del（p.Gly1109GlufsTer13）。 结论:本研究设计的基因Panel可以为部分NICU患儿提供有效的基因检测，尤其是临床诊断复杂的患儿。

目的:探讨HER2低表达三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）的生物学特征。方法:收集山西省肿瘤医院2017—2019年具有完整临床资料的93例TNBC相关病理切片及石蜡包埋组织，依据HER2表达状态分为HER2 0和HER2低表达两组，回顾性分析比较两组临床病理特征及预后差异，并对肿瘤组织进行基因检测，阐明体细胞突变状态及两组间的差异。结果:入组93例患者，发病年龄26~86岁。HER2 0组60例，HER2低表达组33例。HER2低表达在腔面大汗腺型（14/23，60.87%）与非腔面大汗腺型（19/70，27.14%）分布差异有统计学意义（ P=0.005）；HER2 0和HER2低表达两组在年龄、pT分期、组织学分级、浸润方式、淋巴结转移及生存分析差异均无统计学意义。HER2低表达在肿瘤内的表达具有异质性，包括不同比例的微弱、弱到中等强度的不完整到完整膜着色；随着阳性表达细胞占比数量的变化及在总体肿瘤细胞的分布情况不同，包括聚类型、马赛克型、散点型。93例样本中有71例提取的DNA满足要求，包括HER2 0组43例、HER2低表达组28例。基因突变以错义突变、单核苷酸变异、碱基C替换成碱基T的点突变为主。两组间突变发生频率>3次的基因差异无统计学意义，CTNNB1和FGFR3基因只在HER2低表达组发生突变，而ALK、CYP2D6、FAT1基因只在HER2 0组发生突变。HER2低表达组包括HER2 1+18例和HER2 2+10例，两组之间突变发生频率>3次的基因包括PIK3CA、TP53、SLX4、ATM、BRCA1，PIK3CA在HER2 2+中的突变频率显著高于HER2 1+组（ P<0.05），SLX4基因只在HER2 1+组发生突变。 结论:在组织学形态及分子层面，HER2 0组与HER2低表达组均存在一定差异，HER2低表达组中HER2 1+与HER2 2+病例在基因变异上也存在一定差异，有助于TNBC进行更精准的分层以及进一步寻找HER2低表达组TNBC的治疗靶点及精准治疗方案。

目的 探讨CYP2C19基因多态性对使用氯吡格雷预防缺血性脑血管事件发生的影响.方法 应用DNA微阵列芯片法对137例冠状动脉支架植入后长期服用氯吡格雷合并缺血性脑卒中的患者(病例组)、122例冠状动脉支架植入后长期服用氯吡格雷无缺血性脑卒中的患者(对照组)CYP2C19基因的多态位点进行基因分型.病例组与对照组的基因分型差异行卡方检验分析,使用Logistic回归方程分析校正相关危险因素,分析不同的CYP2C19基因型是否影响氯吡格雷预防缺血性脑卒中的效力.结果 CYP2C19基因野生型频率为47.5％ 、突变型频率为52.5％.合并缺血性脑卒中组与对照组突变型分布频率,差异具有统计学意义(59.9％vs.44.3％,χ2=6.398,P=0.042).CYP2C19基因突变型可能导致脑卒中发生风险增加1.13倍(OR=2.13,95％C I:1.23～3.71,P=0.0073).结论 在冠状动脉支架植入患者中,CYP2C19突变型基因携带者比野生型患者有更高的缺血性脑卒中发生风险.CYP2C19基因多态性检测可指导合理地选择抗血小板药物,降低缺血性脑血管事件的发生率.

目的:基于丹参基因组和转录组筛选、克隆及分析丹参酮合成途径候选的CYP450编码基因.方法:设计引物克隆SmCYP76AK5编码基因,通过MEGA软件构建系统进化树并结合实时定量PCR分析其在根不同组织(周皮、韧皮部、木质部)、根、茎、叶、花中的差异表达;最后利用在线生物信息学工具分析其理化性质,预测其二级结构、保守结构域等.结果:系统进化树分析表明SmCYP76AK5属于CYP71 clan;基因差异表达显示SmC-YP76AK5在根周皮中表达最高,与丹参酮的合成和积累相一致.结论:预测丹参SmCYP76AK5参与丹参酮的生物合成.

目的:评价血栓弹力图法(TEG)和光学比浊法(LTA)检测经双联抗血小板药物治疗行冠脉介入术(PCI)后的急性冠脉综合征(ACS)患者氯吡格雷抵抗(CPGR)一致性,并结合CYP2C19基因酶活性程度进行相关性比较.方法:收集2016年1月～6月期间心内科经双联抗血小板治疗并行PCI后的急性冠状动脉综合征患者372例,其中CYP2C19基因酶活性快代谢148例(40％),中间代谢153例(41％),慢代谢71例(19％).对血栓弹力图的ADP诱导的血小板抑制率(TEGADP)与ADP诱导的光学比浊法血小板聚集率(LTAADP)检测CPGR进行一致性和相关性分析,以及CYP2C19基因表达的酶活性程度与这两种方法检测CPGR的关系.结果:TEG法所测血小板抑制率检测CPGR为10.48％,LTA法所测血小板聚集率检测CPGR为11.02％.两种方法在检测CPGR上无明显差异(P>0.05).CYP2C19基因酶活性程度与TEG法检测CPGR相关性的比较有明显差异(P<0.05),CYP2C19基因酶活性程度与LTA法检测CPGR相关性的比较无明显差异(P>0.05).TEG法检测CPGR在CYP2C19慢代谢基因检出率为23.94％,TEG法检测CPGR在CYP2C19慢代谢基因检出率为16.90％.结论:TGE法与LTA法在监测氯吡格雷疗效上有较好的一致性,TEG法检测CPGR在CYP2C19慢代谢基因检出率更高.

目的 观察85例肾移植术后受者CYP2D6基因单核苷酸多态性和他克莫司血药浓度/剂量比值(C/D),探讨通过检测CYP2D6基因型指导肾移植术后患者他克莫司用量的可行性.方法 采用Sequenom MassArray系统基因分型方法检测85例肾移植术后受者CYP2D6基因rs1065852位点和rs16947位点的基因型和等位基因频数,患者应用他克莫司期间监测患者他克莫司血药浓度,计算他克莫司C/D.结果 85例受者中CYP2D6基因rs1065852位点基因型为GG者27例、GA者39例、AA者16例,等位基因G、A频数分别为93(56.71％)、71(43.29％);rs16947位点基因型为GG者47例、GA者27例、AA者11例,等位基因G、A频数分别为121(71.17％)、49％(28.82％).CYP2D6基因rs1065852位点基因型GG、GA和AA型患者他克莫司C/D值分别为104.48±57.83、143.46±77.49、124.74±80.17,GG型和GA型患者他克莫司C/D值相比,P<0.05.CYP2D6基因rs16947位点GG、GA和AA型患者他克莫司C/D值分别为159.10±121.21、128.49±81.68、108.84±70.19,P>0.05.结论 CYP2D6基因rs1065852位点单核苷酸多态性与肾移植术后受者他克莫司C/D有关.CYP2D6基因rs16947位点基因多态性与肾移植术后受者他克莫司C/D无相关性.

黄花蒿Artemisia annua又名青蒿,是中国传统中药,其有效成分青蒿素是一种含过氧桥基团结构的倍半萜内酯类化合物,是一种能有效抗疟的药物.很多理化因子例如盐分、水分、光照、植物激素等均能诱导黄花蒿中次生代谢产物青蒿素的合成,温度作为一种重要的生长因素对青蒿素的合成也有极大地影响.该文旨在研究高温诱导对黄花蒿中青蒿素生物合成的影响.将黄花蒿幼苗放置在25,40℃条件下,分别在0,3,12,36 h后取样,利用液相色谱-质谱联用法测定各个样品中的青蒿素含量;提取样品的总RNA,进行转录组测序并且利用实时荧光定量PCR技术定量分析青蒿素合成途径及竞争途经关键酶基因的表达.结果显示40℃处理3,12,36 h后,青蒿素质量分数分别提高20％,42％,68％;FDS,ALDH1,CYP71AV1和ADS的表达量分别上调4.3,3.3,2.5,1.9倍,SQS和BPS的表达量下调了37％和90％.综上,高温可以通过促进青蒿素合成途径合成酶基因表达量,并且抑制青蒿素竞争途径合成酶基因的表达量从而促进青蒿素的生物合成.

疟疾是一种严重危害人类健康的世界性流行疾病,在青蒿素广泛应用之前,全世界每年约4亿人次感染疟疾,至少有100万人的死亡病例.因此疟疾被世界卫生组织列为世界三大死亡疾病之一.青蒿素的发现,开创了疟疾治疗新方法,全球数亿人因这种“中国神药”而受益.紫穗槐4,11-二烯氧化酶是一种植物细胞色素P450蛋白(CYP71AV1),参与催化紫穗槐4,11-二烯生成青蒿酸的三步氧化反应,是青蒿素生物合成途径上的关键酶.作者拟通过pCW Ori(+)-CYP71AV1重组质粒在原核表达系统中的可溶性表达及蛋白纯化,采用一氧化碳差式光谱分析和基于血红素辅基的生物活性测定,验证CYP71 AV1蛋白的活性,培养该蛋白的晶体.结果表明,构建的重组基因pCW Ori(+)-CYP71AV1在大肠杆菌中得以功能性表达,经过亲和层析和凝胶过滤层析纯化得到了毫克级、有活性的目的蛋白,筛选出了重组CYP71 AV1蛋白的晶体生长条件.这些研究为解析青蒿素生物合成关键酶CYP71AV1的晶体结构,以及通过合成生物学方法批量生产青蒿素奠定了基础,同时为其他植物来源的P450蛋白的表达纯化与结晶提供参考.

bZIP蛋白包含两个结构域,即高度保守、与DNA相结合的碱性区域,以及多样性的亮氨酸拉链,为植物中最大的转录因子家族之一.bZIP以同源或异源二聚体的形式,通过与顺式作用元件G-box、C-box、ABRE、LTRE和BoxII相结合,调控下游相关基因如ERF5、KIN1、CORl5A、COR78、CYP707A1、CYP707A3、ADS和CYP71AV1的表达.植物bZIP参与调控花的发育、种子成熟、休眠和衰老等诸多生物学过程,在盐害、干旱、冷害、渗透胁迫、机械损伤等非生物胁迫以及ABA信号的响应中担任重要作用.另外,bZIP通过水杨酸、茉莉酸及ABA信号转导通路,参与植株对虫害、病原体感染等生物胁迫的应答调控.重点综述了bZIP转录因子的结构特点、分类特征和作用机理,并对植物bZIP在生物和非生物胁迫应答中的最新研究进展进行了全面的介绍.该综述旨为后续深入探究bZIP转录因子的胁迫相关功能提供理论依据和研究思路.

目的:以丹参基因组及全长转录组数据库为基础,对丹参酮生物合成关键酶基因进行预测,进一步推进丹参酮生物合成途径的解析.方法:结合丹参中CYP450s的系统发育鉴定丹参CYP71clan成员,采用生物信息技术分析其差异表达、基因结构和保守基序等;克隆候选基因并进行理化特性和蛋白结构等分析.结果:从丹参基因组注释到161个CYP71clan成员,分为16个家族,其中CYP71家族成员有64个,数量最多且结构域保守.转录组表达分析显示CYP71clan中36％的基因高表达(FPKM>10).克隆到基因SmCYP71AU66全长1503bp,编码500个氨基酸,在丹参根的周皮部位显著高表达,符合丹参酮在丹参体内的分布规律,预测该基因是丹参酮生物合成途径中的关键酶基因.结论:本研究为丹参酮合成相关基因的挖掘以及生物合成途径的解析提供参考.