目的:探讨黄花蒿花粉对鼻黏膜上皮细胞（HNEpC）紧密连接的损伤作用及机制。方法:体外培养HNEpC，采用不同质量浓度黄花蒿花粉（0、20、40、80、100、160、200 μg/ml）分别干预细胞24 h，CCK-8法检测细胞增殖活性；p38丝裂原素活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580干预HNEpC前后，Western Blot法检测p38MAPK信号通路表达及其磷酸化水平；免疫荧光化学染色法、Western Blot法和实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）观察细胞紧密连接Occludin、Claudin-1的表达和分布情况。采用SPSS 21.0软件分析数据。结果:CCK-8结果显示，与对照组相比，不同质量浓度黄花蒿花粉干预6 h后，HNEpC增殖活性均增高（ P值均<0.05）；干预12 h后，20、40、80、100、160 μg/ml组的HNEpC增殖活性未见明显改变（ P值均>0.05），200 μg/ml组降低（ P<0.05）；干预24 h后，20、40 μg/ml组的细胞增殖活性未见明显改变（ P值均>0.05），80、100、160、200 μg/ml组降低（ P值均<0.05）。免疫荧光染色可见正常对照组Occludin和Claudin-1蛋白定位于细胞膜上，表达多，围绕细胞膜形成环状结构；而在高浓度黄花蒿花粉干预下，其表达水平下降，出现断裂、模糊，分布不均匀。Western Blot和qPCR实验结果表明，干预24 h后，黄花蒿花粉（40、80、100、160、200 μg/ml）干预组HNEpC Claudin-1蛋白及其mRNA表达水平较对照组降低（mRNA表达量分别为0.567±0.214、0.443±0.109、0.462±0.160、0.497±0.134、0.388±0.076比1.001±0.067， P值均<0.05），而Occludin蛋白及其mRNA仅在200 μg/ml黄花蒿花粉处理组降低（mRNA表达量为0.631±0.109比1.016±0.026， P<0.05），其他处理组均增高（mRNA表达量分别为1.258±0.134、1.827±0.1034、2.429±0.077、1.707±0.085、1.477±0.066比1.016±0.026， P值均<0.05）。Western Blot结果表明，100、160、200 μg/ml黄花蒿花粉干预24 h后，磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）表达增加。SB203580能够抑制黄花蒿花粉引起的紧密连接蛋白Occludin表达下降（mRNA表达量为1.255±0.179比0.631±0.109， P<0.05），而对Claudin-1蛋白表达无影响。 结论:黄花蒿花粉可能通过激活p38MAPK信号通路，破坏HNEpC的紧密连接。

探讨黄花蒿花粉变应原舌下滴剂对季节性变应性鼻炎进行免疫治疗的疗效及其影响免疫治疗的依从性因素。本研究采用单中心对照研究，于2021年7—9月，共纳入80例就诊于山西医科大学第一医院耳鼻喉科门诊对黄花蒿花粉过敏的季节性变应性鼻炎患者，其中40例接受舌下免疫治疗作为舌下免疫治疗组（SLIT组），另40例仅接受对症药物治疗作为对照组。记录并比较两组患者在治疗开始前蒿属花粉高峰期、治疗后第一年蒿属花粉高峰期的鼻结膜炎症状总评分（total rhinoconjunctivitis symptom score，TRSS）、视觉模拟量表评分（the visual analogue scale，VAS）、总用药评分（total medication score，TMS）、药物鼻结膜炎症状联合评分（combined scores of medication and rhinoconjunctivitis symptoms，CSMRS），用于评估黄花蒿花粉舌下免疫治疗的疗效。跟踪分析研究免疫治疗过程中患者的脱落情况，详细记录脱落原因，分析探讨其安全性及影响免疫治疗依从性因素。结果显示，治疗前蒿属花粉高峰期两组患者TRSS、VAS、TMS、CSMRS比较，TRSS（SLIT组：12.393±3.023，对照组：12.450±3.029， t=-0.077， P=0.939）、VAS（SLIT组：8.357±1.026，对照组：8.400±0.982， t=-0.173， P=0.862）、TMS（SLIT组：3.214±0.568，对照组：3.175±0.501， t=0.301， P=0.764）、CSMRS（SLIT组：5.286±0.680，对照组：5.253±0.677， t=0.199， P=0.843），组间比较差异均无统计学意义（ P>0.05）；治疗后第一年花粉高峰期SLIT组的相应各项观察评分低于对照组，TRSS（SLIT组：3.964±1.551，对照组：7.750±2.169， t=-7.918， P<0.05）、VAS（SLIT组：2.893±0.956，对照组：5.175±1.481， t=-8.286， P<0.05）、TMS（SLIT组：1.821±0.863，对照组：3.175±0.501， t=-8.163， P<0.05）、CSMRS（SLIT组：2.489±0.921，对照组：4.468±0.601， t=-10.723， P<0.05），组间比较差异均有统计学意义（ P<0.05）；SLIT组在治疗后第一年花粉高峰期的相应各项评分较治疗前显著降低，TRSS（治疗前：12.393±3.023，治疗后：3.964±1.551， t=20.576，P<0.05）、VAS（治疗前：8.357±1.026，治疗后：2.893±0.956， t=30.070， P<0.05）、TMS（治疗前：3.214±0.568，治疗后：1.821±0.863， t=7.151， P<0.05）、CSMRS（治疗前：5.286±0.680，治疗后：2.489±0.921， t=14.533， P<0.05），治疗前后比较差异均有统计学意义（ P<0.05）；SLIT组患者用药期间未出现明显不良反应，SLIT组共有12例患者脱落，依从率为70%，脱落原因分别为用药疗程长（4例，33%）、药物价格昂贵（3例，25%）、工作生活因素（3例，25%）、疫情影响（2例，17%）。综上，使用黄花蒿花粉舌下滴剂治疗1年可能改善蒿属花粉期黄花蒿花粉引起的季节性变应性鼻炎患者的症状，但由于患者对免疫治疗缺乏足够的认识或者难以坚持规范化用药，接受舌下免疫治疗的依从性较差，故有待通过患者教育进一步提高舌下免疫治疗的依从性。

目的:优化黄花蒿花粉变应原致敏BALB/c小鼠鼻炎模型，探索可用于过敏反应评价的体液免疫和细胞免疫指标。方法:以BALB/c小鼠为实验动物，以黄花蒿花粉变应原提取物为致敏蛋白，通过不同含量的主要变应原(Art a1)和不同致敏次数，设置不同免疫程序，皮下免疫小鼠，末次免疫后1周和5周分别用含50 μg/ml和500 μg/ml Art a1的黄花蒿花粉变应原提取物滴鼻激发，每天1次，每次持续1周。观察小鼠的过敏反应，检测鼻部组织病理变化，测定各组小鼠血清中抗原特异性IgE、IgG1、IgG2a等抗体水平及动态变化，检测小鼠脾脏中抗原特异性IL-4、IL-5、IL-2、IFN-γ等淋巴细胞数量变化。结果:致敏小鼠经抗原激发后出现明显的抓挠和喷嚏反应；鼻部组织出现明显的变应性炎症；血清中黄花蒿花粉特异性IgE抗体水平的增高与激发抗原呈明显的相关性；致敏小鼠脾脏中抗原特异性IL-4淋巴细胞数量明显增多，而IFN-γ特异性淋巴细胞数量未见显著变化。结论:成功建立黄花蒿花粉变应原过敏小鼠模型，通过ELISPOT技术检测到黄花蒿过敏小鼠抗原特异性IL-4淋巴细胞数量的升高，为后续脱敏治疗用制剂的疗效评价提供实验资料。

目的:探讨2015至2020年首都儿科研究所附属儿童医院过敏性疾病就诊患儿常见吸入变应原的临床分布特征及其变化。方法:回顾性纳入2015年1月1日至2020年12月31日就诊于首都儿科研究所附属儿童医院，怀疑过敏性疾病并进行了血清吸入变应原特异性IgE（sIgE）检测的患儿（0~14岁），sIgE检测采用Phadia1000检测系统的放射变应原吸附试验荧光酶联免疫法。分析这6年期间变应原的特征及变化趋势，计数资料使用构成比描述，率的比较采用卡方检验。结果:共纳入4 608例次检测，患儿共4 575例，年龄（5.4±2.9）岁、中位数5.0岁，男性3 176例（68.9%）、女性1 432例（31.1%），北方地区患儿4 294例次（93.2%）、南方地区患儿295例次（6.4%）、未知地区19例次（0.4%）。入组患儿的常见变应原为点青霉、分枝孢菌、烟曲霉、交链孢菌混合物（1 956/4 457例次，43.9%）及交链孢霉（276/630例次，43.8%），其次为蒿（300/889例次，33.7%）、葎草（12/38例次，31.6%）及豚草、蒿、雏菊、蒲公英、黄花混合物（909/2 874例次，31.6%）。6年间霉菌、草花粉、树木花粉过敏均呈上升趋势，霉菌（2015年38/130例次、29.2%，2020年1 574/3 233例次、48.7%）、草花粉（2015年11/77例次、14.3%，2020年1 069/3 072例次、34.8%）上升显著，差异均有统计学意义（χ 2分别为18.953、49.559， P=0.000）；树木花粉呈上升趋势（2015年1/10例次、10.0%，2020年516/2 122例次、24.3%），但差异无统计学意义（χ 2 =1.111， P=0.292）。尘螨（2015年36/146例次、24.7%，2020年321/1 408例次、22.8%）、宠物毛皮屑（2015年7/33例次、21.2%，2020年411/2 398例次、17.1%）变应原阳性率基本保持稳定（χ 2 =0.258， P=0.611；χ 2 =0.379， P=0.538）。2015年最常见的变应原为霉菌（38/130例次、29.2%），其次为尘螨（36/146例次、24.7%），而2020年最常见的变应原仍为霉菌（1 574/3 233例次、48.7%），其次为草花粉（1 069/3 072例次、34.8%）、树木花粉（516/2 122例次、24.3%）。 结论:霉菌可能是北京地区过敏性疾病患儿最常见的吸入变应原，随着时间的推移，草花粉、树木花粉逐渐超过尘螨成为除霉菌之外的常见变应原。

目的:探索黄花蒿花粉变应性小鼠鼻炎模型维持稳定的激发条件。方法:以BALB/c小鼠为实验动物，选用黄花蒿花粉变应原提取物为致敏蛋白质，于1 d、4 d、7 d对每只小鼠皮下注射0.1 ml的以Art a1计浓度为20 μg/ml的黄花蒿花粉变应原提取液。致敏结束后停息1周，用以Art a1计浓度为500 μg/ml的黄花蒿花粉变应原提取液对小鼠进行首次滴鼻激发，每鼻孔10 μl。将模型组分为3组分别连续激发7 d、10 d、14 d，每隔4周再激发7 d，探索首次激发时间。空白对照组小鼠以生理盐水进行免疫和滴鼻激发。造模后观察各组小鼠行为学和鼻部病理学变化，检测致敏小鼠体液免疫和细胞免疫应答变化。确定最佳首次滴鼻激发周期后，进一步比较不同激发频次对致敏效果的影响。结果:抗原首次激发后，10 d组小鼠过敏症状明显高于7 d和14 d组，且10 d和14 d组小鼠血清特异性IgE抗体水平明显高于7 d组。与空白对照组比较，二次激发后3个模型组小鼠组仍维持明显过敏症状；鼻部均有明显的上皮细胞增生、鼻甲肿大、炎细胞增多等病理变化；血清特异性IgE抗体水平均显著增高；抗原特异性IL-4和IL-6淋巴细胞增殖明显，其中10 d和14 d组高于7 d组。不同激发频次对过敏模型的稳定性有较大影响，每隔2周激发一次的致敏小鼠过敏症状以及血清中抗原特异性抗体水平均显著高于每隔4周激发的小鼠。结论:本研究通过对比不同首次抗原激发时间以及不同激发频次对黄花蒿致敏小鼠模型的影响，最终优化了过敏小鼠评价模型建立的参数，为脱敏治疗药物疗效评价体系的建立提供参考。

目的:掌握济南市长清区野生及栽培药用植物资源的种类和分布特征,为该区域中药资源的保护和中药产业的发展提供本底数据以及建议.方法:以全国第四次中药资源普查技术规范为指导,采用样方和样线相结合的方式进行实地调查,对现有药用资源进行分类整理和建档.结果:长清区野生药用植物共有106科283属421种,其中被子植物占比93.82％.入药部位以全草类药材居多,占比42.99％.重点及特色品种共计106种,侧柏、黄花蒿、马兜铃、桑、酸枣等药材资源的蕴藏量较大.另发现3种山东新分布物种.调查栽培药材共计22种,以蒲公英、丹参、甘菊的种植面积最大.结论:该研究基本摸清了长清区药用植物资源的概况及利用现状,并提出了合理化建议,为长清区中医药产业的可持续发展提供了科学依据.

目的 对艾草Artemisia argyi β-石竹烯合成酶基因(β-caryophyllene synthase,AaCPS)进行全长克隆、亚细胞定位与表达模式分析,为艾草倍半萜生物合成途径中的基因功能解析奠定基础.方法 基于艾草转录组数据筛选注释为CPS的基因,采用PCR方法克隆获得目的基因cDNA的全长,对其编码区进行生物信息分析;构建原核表达载体,转化至大肠杆菌中进行诱导表达;构建绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体,利用农杆菌侵染烟草叶片的瞬时表达法进行亚细胞定位分析;运用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术分析不同采收期(4月、5月、6月、7月)AaCPS基因表达模式,HS-SPME-GC-MS测定β-石竹烯含量并进行相关性分析.结果 从艾草中克隆得到的AaCPS基因开放阅读框(Open reading frame,ORF)为1647 bp,编码548个氨基酸,相对分子质量为63 667 Da,等电点为5.40,含Terpene_synth和Terpene_synth_C保守结构域.系统进化分析显示AaCPS蛋白与同科植物黄花蒿CPS蛋白的亲缘关系最近.SDS-PAGE结果证实在75 000-120 000 Da出现目的蛋白条带(包含28 132 Da的标签蛋白),说明所获基因能够成功表达出蛋白;亚细胞定位显示其编码蛋白位于细胞质中;实时荧光定量PCR结果表明AaCPS基因表达量呈上升趋势,在7月达到最高.HS-SPME-GC-MS结果显示β-石竹烯含量从4月逐渐升高,在6月达到最高,与4-6月AaCPS基因表达量趋势总体一致.结论 通过对AaCPS基因的克隆与分析,为进一步研究该基因在艾草倍半萜物质生物合成途径的功能鉴定奠定基础.

目的 了解宁夏地区过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者的花粉过敏原致敏谱,分析不同年龄和性别间阳性致敏原的差异,为AR患者的治疗和预防提供依据.方法 采用皮肤点刺试验(skin prick test,SPT)对2021年12月至2022年12月就诊于宁夏8所监测医院呼吸科、耳鼻喉科和儿科门诊的7 112例AR患者进行花粉过敏原检测,分析检测结果,并探讨检测结果的年龄和性别差异.结果 7 112例AR患者花粉SPT阳性率为68.81％,其中AR患者花粉过敏原阳性率最高的两种花粉为大籽蒿花粉(57.27％)和黄花蒿花粉(41.42％),合并4种及以上花粉过敏原SPT阳性者占35.45％;大籽蒿花粉和黄花蒿花粉致敏级别主要为3～4级;AR患者花粉过敏原SPT阳性率随年龄增长呈现先递增后递减趋势,10～＜20岁年龄组花粉过敏原SPT阳性检出率达峰值(79.59％),8种花粉过敏原在不同年龄组的差异均有统计学意义(P均＜0.05);不同性别间比较,大籽蒿花粉、葎草花粉、柳树花粉、杨树花粉、家榆花粉、槐树花粉阳性率男性高于女性(P均＜0.05).结论 AR患者常合并4种及以上花粉过敏原致敏,10～＜20岁年龄组SPT阳性检出率达峰值,大籽蒿花粉和黄花蒿花粉是宁夏地区AR患者最常见的花粉过敏原.

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定黄花蒿水提浸膏中青蒿素、青蒿乙素、猫眼草黄素、猫眼草酚D的含量.方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相:乙腈(A)-纯水(B),梯度洗脱;体积流量:0.8 mL·min-1;柱温:30℃;进样量:10 μL;检测波长:210 nm.结果 青蒿素、青蒿乙素、猫眼草黄素和猫眼草酚D进样量分别在 1.608 8～16.088 μg(r=0.999 9)、0.014 1～0.141 4 μg(r=1)、0.185 1～1.850 9 μg(r=0.999 9)、0.144 1～1.441 4 μg(r=0.999 9)范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=6)分别为 102.44%、97.82%、95.07%、95.55%,RSD分别为 1.12%、1.44%、1.29%、1.53%.结论 该方法简便准确、可靠稳定、重复性好,可用于同时测定黄花蒿水提浸膏中青蒿素、青蒿乙素、猫眼草酚D、猫眼草黄素的含量.

同时检测黄花蒿Artemisia annua中多个化合物,以对黄花蒿的品质进行多角度评价.建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)同时检测黄花蒿中紫穗槐-4,11-二烯、青蒿醛、双氢青蒿酸、青蒿酸、青蒿素B、青蒿烯和青蒿素7个青蒿素类相关化合物的方法,并对黄花蒿不同组织部位(根、茎、叶和侧枝)中这7个化合物含量进行差异比较,检测其在黄花蒿中的累积情况.采集生长盛期4月龄黄花蒿的根、茎、叶和侧枝,检测黄花蒿不同组织部位7个青蒿素类相关化合物的含量.采用UPLC-QQQ-MS/MS的多反应监测(MRM)采集模式,大气压力化学离子源(APCI)正离子模式,色谱柱为Eclipse Plus RRHD C18(2.1 mm×50 mm,1.8 μm),流动相为含甲酸(0.1％)-甲酸铵(5 mmol·L-1)水溶液(A)和甲醇(B),梯度洗脱(0～8 min,55％～100％B;8～11 min,100％B;平衡 3 min).流速 0.6 mL·min-1,柱温 40 ℃,进样量 5 μL,检测时间 8 min.通过方法学考察,建立了基于UPLC-QQQ-MS/MS同时定量检测青蒿素生物合成途径中7个代表性化合物含量的方法.对黄花蒿根、茎、叶和侧枝的含量比较分析结果表明:黄花蒿中青蒿素含量高于青蒿素B,且青蒿素和双氢青蒿酸在黄花蒿各部位的含量相对较高;7个化合物在各部位的含量存在较大差异,均在叶片中最高,且青蒿烯和青蒿醛在根中未检测到.该研究建立了基于UPLC-QQQ-MS/MS同时检测青蒿素生物合成途径上7个代表性化合物的定量方法,准确、灵敏且高效,可用于黄花蒿中青蒿素类相关化合物的含量测定、新品种选育和中药材质量控制等.