目的:评估mCIM联合eCIM试验、Carba-5和Carba-R三种方法检测碳青霉烯类耐药细菌(carbapenem-resistant organisms，CRO)中常见碳青霉烯酶型的性能。方法:随机挑选2019年1月至2020年12月浙江大学医学院附属邵逸夫医院临床分离的122株非重复CRO菌株，应用生物梅里埃MALDI-TOF MS全自动快速质谱仪对菌株进行菌种鉴定，分别采用改良碳青霉烯类抗生素灭活试验(mCIM联合eCIM试验)、Carba-5检测条和Carba-R试剂盒对所有菌株进行碳青霉烯酶型检测；以PCR法检测结果为金标准，评价上述3种检测方法的性能。结果:122株CRO菌株属于12个不同菌种，PCR法碳青霉烯酶型检测结果：共112株检测结果阳性，KPC-2型阳性70株，占57%(70/122)，其中肺炎克雷伯菌46株，铜绿假单胞菌12株，其他菌株12株；OXA-232型阳性19株占15%(19/122)，均为肺炎克雷伯菌；NDM型阳性20株占16%(20/122)，其中NDM-1型阳性7株和NDM-5型阳性13株，以大肠埃希菌为主(12/20)；IMP-4型阳性2株，分别为肺炎克雷伯菌和阿氏肠杆菌；检测出1株同时产KPC-2和IMP-4的肺炎克雷伯菌；未检测到VIM型碳青霉烯酶；有10株未检出以上5种基因型。与金标准PCR方法相比mCIM联合eCIM试验灵敏度为95.65%(22/23)，特异度为100.00%(90/90)，阳性预测值(PPV)为100.00%(22/22)，阴性预测值(NPV)为98.90%(90/91)，诊断准确度为99.11%(112/113)；Carba-5和Carba-R试验的灵敏度、特异性、PPV、NPV和诊断准确度均为100%。结论:碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌和铜绿假单胞菌临床微生物实验室可以使用Carba-5试验快速、准确地检测常见碳青霉烯酶型，有条件的实验室还可以选择Carba-R试验，并监测患者是否存在碳青霉烯耐药菌的定植；而Carba-5和Carba-R检测结果阴性时，建议结合药敏结果进行mCIM联合eCIM试验检测。

目的:评估Xpert Carba-R平台在血培养碳青霉烯耐药基因的快速检测中的应用价值。方法:本研究选取16株携带不同碳青霉烯耐药基因型的肠杆菌目菌株制备模拟阳性血培养样本，采用Xpert Carba-R直接检测模拟血培养液中的碳青霉烯耐药基因。收集2022年1—6月南京医科大学第一附属医院临床血培养鉴定为肠杆菌目的样本117份进行前瞻性研究，采用Xpert Carba-R检测5种碳青霉烯耐药基因，以PCR测序法为参考方法评价其灵敏度与特异性。同时收集阳性患者临床资料进行预后分析。结果:16份制备的模拟阳性血培养样本采用Xpert Carba-R检出 bla KPC阳性8份， bla NDM阳性5份， bla IMP阳性1份，阴性2份，与已知结果完全一致。117份临床血培养阳性样本中28份经Xpert Carba-R检出为碳青霉烯耐药基因阳性，其中 bla KPC阳性24份， bla NDM 2份， bla KPC+bla NDM 2份，与PCR测序法相比其敏感度和特异度均为100%，且检测用时明显减少。25例患者中9例采用单药治疗，5例治疗有效；16例采用联合治疗，12例治疗有效；共17例治疗有效，8例治疗无效其中3例死亡，病死率为12%（3/25）。 结论:Xpert Carba-R可快速、准确地检测血培养液中碳青霉烯耐药基因，为临床早期合理用药提供依据。

目的:评价NG-Test Carba5对耐碳青霉烯肠杆菌科细菌（CRE）中碳青霉烯酶的检测能力。方法:收集2018—2022年中国21个省77家医院的1 210株CRE菌株，采用NG-Test Carba5快速检测菌株中的碳青霉烯酶酶型，以全基因组测序结果为金标准，比较分析NG-Test Carba5的检测性能。结果:NG-Test Carba5对不同菌属CRE菌株中的5大类碳青霉烯酶［肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC）、新德里金属β内酰胺酶（NDM）、亚胺培南酶（IMP）、维罗纳整合子编码金属β内酰胺酶（VIM）、苯唑西林酶（OXA）-48］均表现出优异的检测性能，其敏感度达98.47%（1 161/1 179），特异度100%（31/31），阳性预测值为100%（1 161/1 161）。NG-Test Carba5对OXA-48、NDM、IMP和VIM酶的敏感度为100%（307/307），对KPC酶的检测敏感度为97.70%（763/781）。对于11株产KPC-25、KPC-78和KPC-93型KPC突变体的菌株，NG-Test Carba5可报告所有KPC酶阳性（11/11），但对于产KPC-33、KPC-77型KPC突变体的菌株，NG-Test Carba5未能检出KPC酶。此外，对于同时产2种或3种碳青霉烯酶的CRE菌株，NG-Test Carba5的敏感度达100%（91/91）。结论:NG-Test Carba5对于CRE菌株中的碳青霉烯酶的快速检测显示出优异的检测性能。然而，对于NG-Test Carba5检测阴性的菌株，必须结合其他表型检测及基因型检测方法以避免漏检。

目的 探讨 NG-Test CARBA 5 在血培养肠杆菌科细菌碳青霉烯酶含量检测的应用价值.方法 收集我院临床标本中分离培养的已知基因型别的 62 株肠杆菌目细菌,包含耐碳青霉烯肠杆菌科细菌 38 株和对碳青霉烯敏感的肠杆菌科细菌 24 株,分别采用 NG-Test CARBA 5 试剂盒、Carba NP和 mCIM试验检测待测菌株的主要碳青霉烯酶,并采用PCR法对碳青霉烯酶基因表型进行测序确认和 Kappa 一致性检验;再从 38 株耐碳青霉烯菌株中随机取出 20 株菌株进行模拟血培养,并对其进行 NG-Test CARBA 5 试剂盒、Carba NP法和 mCIM法检测和Kappa一致性检验分析.结果 38 株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌菌株的耐药药物均为美罗培南和/或亚胺培南,PCR扩增测序结果表明,分别有 33 株菌株携带有耐药基因,5 株菌株未携带常见耐药基因.NG-Test CARBA 5 15 min内检测到KPC、NDM、IMP、KPC+NDM以及 NDM+IMP 的敏感度和特异度均为 100%.Carba NP 法和 mCIM法的敏感度分别为 93.94%、96.97%,特异度分别为 80.00%、100.00%,与基因测序结果一致性 Kappa 值分别为0.857、0.902(P<0.05).20 株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌模拟血培养,大肠杆菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌分别有 6 株、5 株、4 株、5 株,NG-Test CARBA 5 敏感度和特异度均为 100.0%,与基因测序结果一致性Kappa值为 1.000;Carba NP法和 mCIM法的敏感度分别为 87.50%、93.75%,特异度均为 100%,与基因测序结果一致性Kappa值分别为 0.812、0.898(P<0.05).结论 NG-Test CARBA 5 检测过程简单、高效,检测结果准确度高,大大简化了临床上检测碳青霉烯酶的复杂流程,有助于增强院内感染控制和及时指导临床治疗.

目的 评价头孢他啶/阿维巴坦(CAZ-AVI)、多黏菌素B和替加环素对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的体外抗菌效应研究,指导临床正确选择并合理使用抗菌药物.方法 收集2018-2021年期间从广东地区8家三级综合医院临床分离的对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌172株,采用聚合酶链反应(PCR)以及NG-Test?CARBA5检测菌株的5种常见碳青霉烯酶耐药基因;采用微量肉汤稀释法药敏试验分别检测CAZ-AVI、多黏菌素B和替加环素的单药最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值.结果 172株CRKP对CAZ-AVI耐药率为13.4％,对多黏菌素B的耐药率为1.7％,对替加环素耐药率为1.2％.PCR检测172株CRKP菌株产碳青霉烯酶基因,其中产碳青霉烯酶菌株166株(96.5％).以PCR检测产碳青霉烯酶基因为参考方法,NG-Test?CARBA5检测碳青霉烯酶基因型KPC、NDM、VIM、IMP和OXA-48-like,显示特异性为100％,灵敏度为99.4％.结论 CAZ-AVI、多黏菌素B以及替加环素对本地区CRKP菌株具有较好的体外抗菌活性,对采用NG-Test? CARBA5试验检测CRKP产碳青霉烯酶的耐药基因型,有利于早期指导临床实现个体化精准治疗.

目的 探讨栖冷克吕沃尔氏菌临床株PD49对碳青霉烯类耐药的分子机制.方法 细菌鉴定和药敏分别通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪和VITEK 2 Compact系统.碳青霉烯酶的检测通过NG-Test CARBA 5卡.基于Illumina MiSeq和Nanopore MinION技术平台对菌株测序,然后进行生物信息学分析.通过液相接合试验和S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)检测菌株所携带质粒的水平转移能力.结果 栖冷克吕沃尔氏菌临床株PD49对广谱头孢菌素敏感,环丙沙星和左氧氟沙星中介,厄他培南、亚胺培南和美罗培南耐药.通过测序平台获得了 PD49株的基因组序列,进一步的生物信息学分析显示:PD49株的染色体(命名为PD49-chr,4844 054 bp)携带blaKLUC-1基因以及多个外排泵基因;该菌株携带1个Co1KP3/IncX3型杂合质粒(命名为pPD49-OXA-181,51 479 bp),且blaOXA-181和qnrS1基因位于该质粒上.液相接合和S1-PFGE结果显示PD49株将携带的pPD49-OXA-181质粒传递到大肠埃希菌J53AziR.结论 本研究表明栖冷克吕沃尔氏菌临床株PD49对碳青霉烯类耐药的分子机制是因为该菌携带了blaOXA-181基因.经检索,同时携带blaKLUC-1、blaOXA-181和qnrS1基因的克吕沃尔氏菌为国内外首次报道.

目的:评估Carba NP直接纸片法快速检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶菌株的实用价值.方法:收集2015年4月至2016年12月来自各类标本的肠杆菌科细菌212株,其中122株试验菌,90株对照菌分别进行Carba NP试验和Carba NP直接纸片法检测,同时将耐药基因的普通PCR的检测结果作为金标准.结果:在122株细菌中,KPC-2耐药基因阳性菌株为112株;NDM-1基因阳性菌株为8株;2株未检出耐药基因;未发现携带D组OXA-48基因的实验菌.与PCR结果相比,Carba NP试验与Carba NP直接纸片法对于所测菌株的碳青霉烯酶的敏感性高达98％,特异性高达100％;Carba NP试验在60 min内完成检测,而Carba NP直接纸片法最快可以在5 min内完成检测.结论:相对于Carba NP试验,Carba NP直接纸片法无需昂贵的蛋白抽提液,试剂成本价廉,操作简便,可以有效协助临床抗感染治疗.

目的 探讨老年耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌感染的耐药机制,分析承德市中心医院高毒力荚膜基因型的分布特点.方法 收集2016年1月至2017年3月间从承德市中心医院收治的老年患者中分离出的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌18株,鉴定菌株和药敏试验;采用改良Hodge试验、EDTA协同试验、Carba NP试验初筛碳青霉烯酶,进一步检测菌株毒力情况,PCR检测耐药基因、荚膜血清型和毒力基因.结果 碳青霉烯酶检出Kpc基因6株(33.33%),Ndm基因7株(38.89%);超广谱β-内酰胺酶中Shv检出15株(83.33%),明显高于 Ctx-M 基因10株(55.56%)、Tem基因7株(38.89%)(P<0.01);AmpC 酶中检出 DHA 基因2株(11.11%).膜孔蛋白基因检测显示,Ompk36编码基因缺失率明显高于Ompk35(P<0.05);且当Ompk35基因缺失时Ompk36也缺失.荚膜分型显示,K1型4株,K57型2株,未检出K2、5、20及54,未分型12株;rmpA阳性率明显高于Acrobactin(P<0.05);4株K1型肺炎克雷伯菌均携带rmpA基因,其中1株同时携带Acrobactin基因;2株K57型肺炎克雷伯菌均携带rmpA基因;18株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌均携带FimH-1基因.结论 老年耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌感染的主要耐药机制为携带Kpc和Ndm基因以及超广谱β-内酰胺酶合并膜蛋白缺失;该院Kpc基因荚膜血清型菌株分离率较高,应加以重视.

目的:研究碳青霉烯类高水平耐药的阴沟肠杆菌临床分离株对碳青霉烯类耐药主要机制.方法:筛选对碳青霉烯类高水平耐药的阴沟肠杆菌临床分离株21株, 同时采用微量肉汤稀释法测定这些细菌对不同抗生素的最小抑菌浓度 (minimal inhibitory concentration, MIC), 改良Hodge实验、Carba NP试验检测是否产碳青霉烯酶;PCR检测碳青霉烯酶类型 (bla KPC、bla IMP、bla NDM、bla VIM、bla IMI、bla SPM、bla NDMOXA-23、bla NDMOXA-24、bla NDMOXA-48、bla NDMOXA-58) .结果:药敏试验显示碳青霉烯类高水平耐药阴沟肠杆菌具有多重耐药性.改良Hodge实验、Carba NP试验阳性率分别为61.9％ (13/21) 、90.5％ (19/21);PCR扩增碳青霉烯酶基因, 21株试验阴沟肠杆菌19株有扩增产物, IMP、KPC、NDM阳性率分别为23.8％ (5/21) 、9.5％ (2/21) 、61.9％ (13/21), 其中一株阴沟肠杆菌既产IMP又产NDM.结论:产碳青霉烯酶是临床分离碳青霉烯类高水平耐药阴沟肠杆菌的主要耐药机制, 应当引起院感控制人员的高度重视.

目的 了解深圳地区耐亚胺培南临床菌株的分布及携带碳青霉烯酶基因的情况,并检测其携带的可移动基因元件.方法 2014—2016年中山大学附属第八医院(深圳)送检标本中分离耐亚胺培南菌株96株,参照美国CLSI的M100S25标准进行药敏分析;采用Carba NP-d试验检测碳青霉烯酶表型;PCR检测碳青霉烯酶基因及可移动基因元件I类整合子、插入序列共同区(Insertion sequence common region,ISCR),对肠杆菌科加测质粒复制子类型.结果 96株耐亚胺培南临床菌株对多种临床常用抗菌药物均耐药;其中52株碳青霉烯酶表型阳性;68株携带碳青霉烯酶基因,其中61株携带D类碳青霉烯酶基因,3株携带blaVIM,2株携带blaKPC,1株携带blaIMP,1株携带blaNDM-1;I类整合子检出率为69.8％,其可变区携带有耐药相关基因盒aadA1、aacA4、dfrA12、aadA5、dfrA17和未知功能的orfF,未发现碳青霉烯是耐药基因;ISCR1检出率为16.7％;肠杆菌科菌株64.3％携带质粒,以IncF型为主.结论 深圳地区耐亚胺培南临床菌株具有多重耐药表型,绝大多数产碳青霉烯酶,碳青霉烯酶基因多存在于细菌染色体上,这类菌株同时携带多种可移动的基因元件及耐药基因,因此,其耐药性具有稳定遗传和水平播散的能力,应密切关注.