碳青霉烯类耐药已经逐渐成为中国新生儿重症监护室面临的严峻问题。耐碳青霉烯类肠杆菌(carbapenem-resistant enterobacteriaceae，CRE)通过产生碳青霉烯酶，水解包括碳青霉烯类在内的绝大部分β-内酰胺类抗生素，具有高度的耐药性。碳青霉烯酶根据Amber分类可分为A、B、D三类，不同碳青霉烯酶对特定β-内酰胺类抗生素的水解活性不同。目前，CRE在中国NICU住院新生儿中检出率高、病死率高、具有高度的传播性。CRE在新生儿的治疗非常困难，可选药物极其有限、药代/药效动力学数据匮乏、最佳剂量/用药间隔不确定、缺少联合用药研究等因素均给有效抗菌药物治疗带来巨大挑战。成人和儿童中针对CRE主要的抗菌药物包括碳青霉烯类、头孢他定/阿维巴坦、磷霉素、多黏菌素类、氨曲南等，但在新生儿中的使用鲜有研究。CRE一旦定植和感染，清除和治疗极其困难，因此在新生儿病房严格执行医院感染防控措施和抗菌药物使用管理，减少CRE产生、遏制传播、降低感染率是应对CRE流行的最重要措施。

目的:评估mCIM联合eCIM试验、Carba-5和Carba-R三种方法检测碳青霉烯类耐药细菌(carbapenem-resistant organisms，CRO)中常见碳青霉烯酶型的性能。方法:随机挑选2019年1月至2020年12月浙江大学医学院附属邵逸夫医院临床分离的122株非重复CRO菌株，应用生物梅里埃MALDI-TOF MS全自动快速质谱仪对菌株进行菌种鉴定，分别采用改良碳青霉烯类抗生素灭活试验(mCIM联合eCIM试验)、Carba-5检测条和Carba-R试剂盒对所有菌株进行碳青霉烯酶型检测；以PCR法检测结果为金标准，评价上述3种检测方法的性能。结果:122株CRO菌株属于12个不同菌种，PCR法碳青霉烯酶型检测结果：共112株检测结果阳性，KPC-2型阳性70株，占57%(70/122)，其中肺炎克雷伯菌46株，铜绿假单胞菌12株，其他菌株12株；OXA-232型阳性19株占15%(19/122)，均为肺炎克雷伯菌；NDM型阳性20株占16%(20/122)，其中NDM-1型阳性7株和NDM-5型阳性13株，以大肠埃希菌为主(12/20)；IMP-4型阳性2株，分别为肺炎克雷伯菌和阿氏肠杆菌；检测出1株同时产KPC-2和IMP-4的肺炎克雷伯菌；未检测到VIM型碳青霉烯酶；有10株未检出以上5种基因型。与金标准PCR方法相比mCIM联合eCIM试验灵敏度为95.65%(22/23)，特异度为100.00%(90/90)，阳性预测值(PPV)为100.00%(22/22)，阴性预测值(NPV)为98.90%(90/91)，诊断准确度为99.11%(112/113)；Carba-5和Carba-R试验的灵敏度、特异性、PPV、NPV和诊断准确度均为100%。结论:碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌和铜绿假单胞菌临床微生物实验室可以使用Carba-5试验快速、准确地检测常见碳青霉烯酶型，有条件的实验室还可以选择Carba-R试验，并监测患者是否存在碳青霉烯耐药菌的定植；而Carba-5和Carba-R检测结果阴性时，建议结合药敏结果进行mCIM联合eCIM试验检测。

探讨重症监护病房耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP）碳青霉烯酶分布情况，并比较耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant hypervirulent Klebsiella pneumoniae，CR-hvKP）和耐碳青霉烯非高毒力肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant non-hypervirulent Klebsiella pneumoniae，CR-non-hvKP）两者之间的临床特征。收集并回顾性分析2020年5月至2021年3月西安交通大学第二附属医院重症监护病房49例患者分离的53株非重复CRKP菌株，使用碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行产碳青霉烯酶菌株初筛，拉丝试验进行高黏液表型初筛，使用PCR方法检测5种主要的碳青霉烯酶基因（ blaKPC-2、 blaNDM、 blaIMP、 blaVIM和 blaOXA-48-like），常见血清型（K1和K2）和毒力基因（rmpA和iutA），将同时检测出rmpA和iutA基因的菌株视为高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulent Klebsiella pneumoniae，hvKP），并对CR-hvKP进行全基因组测序。针对49例感染患者的临床资料，采用独立样本 t检验，Mann-Whitney U检验，χ2检验或Fisher精确概率法比较CR-hvKP和CR-non-hvKP两者的临床特征差异。重症监护病房分离的CRKP存在广泛耐药，对多黏菌素B和替加环素仍具有良好的敏感性。CRKP主要的耐药机制为产碳青霉烯酶（52/53，98.1%），53株CRKP除1株未检测到碳青霉烯酶外，其余52株CRKP至少检测到1种碳青霉烯酶耐药基因，其中45株携带单一酶型，包括36株 blaKPC-2（36/53，67.9%）、8株 blaNDM（8/53，15.1%）和1株 blaIMP（1/53，1.9%），7株携带两种酶型 blaKPC-2和 blaNDM（7/53，13.2%）。拉丝试验和毒力基因检测结果显示，53株CRKP检出7株（13.2%）CR-hvKP，其中2株拉丝试验阳性。测序结果表明CR-hvKP主要属于ST11型。CR-hvKP感染患者年龄几乎都在60岁以上（7/7），存在侵入性治疗（7/7）、肺部感染高黏液表型（2/7）以及具有较高的死亡率（5/7）；CR-hvKP感染患者的中性粒细胞百分比（86.44±4.70）%高于CR-non-hvKP感染患者（78.90±19.15）%，差异有统计学意义（ t =-2.225， P=0.032）。综上，重症监护病房CR-hvKP菌株以产KPC-2酶，荚膜血清型K2和ST11序列型为主，需加强对CR-hvKP菌株的监测与控制，防止耐药和高毒力菌株的共同进化。

目的:评价NG-Test Carba5对耐碳青霉烯肠杆菌科细菌（CRE）中碳青霉烯酶的检测能力。方法:收集2018—2022年中国21个省77家医院的1 210株CRE菌株，采用NG-Test Carba5快速检测菌株中的碳青霉烯酶酶型，以全基因组测序结果为金标准，比较分析NG-Test Carba5的检测性能。结果:NG-Test Carba5对不同菌属CRE菌株中的5大类碳青霉烯酶［肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC）、新德里金属β内酰胺酶（NDM）、亚胺培南酶（IMP）、维罗纳整合子编码金属β内酰胺酶（VIM）、苯唑西林酶（OXA）-48］均表现出优异的检测性能，其敏感度达98.47%（1 161/1 179），特异度100%（31/31），阳性预测值为100%（1 161/1 161）。NG-Test Carba5对OXA-48、NDM、IMP和VIM酶的敏感度为100%（307/307），对KPC酶的检测敏感度为97.70%（763/781）。对于11株产KPC-25、KPC-78和KPC-93型KPC突变体的菌株，NG-Test Carba5可报告所有KPC酶阳性（11/11），但对于产KPC-33、KPC-77型KPC突变体的菌株，NG-Test Carba5未能检出KPC酶。此外，对于同时产2种或3种碳青霉烯酶的CRE菌株，NG-Test Carba5的敏感度达100%（91/91）。结论:NG-Test Carba5对于CRE菌株中的碳青霉烯酶的快速检测显示出优异的检测性能。然而，对于NG-Test Carba5检测阴性的菌株，必须结合其他表型检测及基因型检测方法以避免漏检。

目的:分析一株同时产KPC-2和NDM-5碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌耐药基因特征。方法:肺炎克雷伯菌KPN-hnqyy分离自我院血液科一位患者的粪便标本，使用仪器BD Phenix-M50鉴定菌株并测定最小抑菌浓度；酶联免疫层析试验和PCR方法检测碳青霉烯酶基因型；接合试验检测相关质粒的转移性；PacBio和Illumina平台对菌株全基因组测序，并在BacWGSTdb数据库中检索菌株MLST分型、耐药基因和质粒类型，使用软件Easyfig_2.2.3比对基因组和开放读码框序列，BRIG v0.95生成可视化质粒圈图。结果:肺炎克雷伯菌KPN-hnqyy对碳青霉烯类抗生素耐药，MLST分型为ST11型， blaKPC-2和 blaNDM-5碳青霉烯酶基因阳性；接合子 blaKPC-2基因阳性， blaNDM-5阴性；全基因组测序显示菌株含有1个染色体和3个质粒；肺炎克雷伯菌KP69和KP19-2029等与本研究菌株染色体基因组相似性大于99.9%，且其各自携带的不同种类的质粒上含有相似的IncR和IncFⅠ耐药基因融合区， blaKPC-2基因位于此融合区中一个由Tn3-△Tn4401-Tn1721/Tn1722序列演化而来的两端插入IS26转座酶基因的结构中； blaNDM-5基因位于一种含有噬菌体插入片段特殊质粒的Ⅰ型转座子上，两端也插入了IS26转座酶基因。 结论:ST11型肺炎克雷伯菌携带 blaKPC-2的IncR和IncFⅡ耐药基因融合区与染色体基因组可能一起广泛存在，特殊质粒携带的 blaNDM-5基因可能是通过IS26转座元件介导的基因重组方式偶然获得；携带 blaKPC-2基因的ST11型肺炎克雷伯菌在中国广泛传播并能通过IS26转座元件获得其他碳青霉烯酶基因的能力应引起重视。

目的:了解临沂地区碳青霉烯酶的基因型及耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）对头孢他啶-阿维巴坦（CAZ/AVI）的药物敏感性，为临床合理用药提供依据。方法:选取临沂市人民医院2019年1月至2020年12月临床标本分离获得的179株CRE，用改良碳青霉烯酶灭活试验（mCIM试验）和乙二胺四乙酸（EDTA）协同碳青霉烯酶灭活试验（eCIM试验）与荧光定量PCR快速检测系统GeneXpert 2种方法检测碳青霉烯酶，用K-B法检测CAZ/AVI的药物敏感性。结果:179株CRE中，mCIM阳性174株（97.2%），eCIM阳性147株（84.5%）；产丝氨酸酶27株（15.5%），金属β-内酰胺酶147株（84.5%）。GeneXpert检测结果与mCIM、eCIM表型检测结果一致。174株mCIM阳性菌株对CAZ/AVI的敏感率为33.3%（58/174），其中27株产丝氨酸酶菌株的敏感率为96.3%（26/27），147株产金属β-内酰胺酶菌株的敏感率为100%。结论:临沂地区CRE的碳青霉烯酶型以金属β-内酰胺酶为主。产丝氨酸酶CRE对CAZ/AVI有较高敏感性。

目的:分析碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因分布特征及其机制。方法:收集青岛大学附属威海市中心医院2021年1-12月临床标本分离得到的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌58株，通过改良Hodge试验和改良碳青霉烯灭活试验确认表型，聚合酶链式反应（PCR）扩增后纯化测序，脉冲场凝胶电泳法（PFGE）聚类分析和多位点序列分型（MLST）分析其分子流行病学特征。结果:碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）对阿米卡星敏感率为51.7%，对环丙沙星、左旋氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑、哌拉西林/他唑巴坦等抗生素均具有较高耐药率（> 60%），对头孢唑林、头孢他啶、头孢替坦及头孢吡肟耐药率为100.0%。58株菌株中46株（79.3%）改良Hodge试验阳性，31株（53.5%）改良碳青霉烯灭活试验阳性。PCR扩增及基因测序显示，42株（72.4%）菌株主要携带KPC-2基因，12株（20.7%）菌株携带IMP-4基因，4株（6.9%）菌株携带NDM-1基因。且携带IMP-4基因的12株菌株均携带KPC-2基因，表现为改良Hodge试验和改良碳青霉烯灭活试验双阳性。PFGE聚类分析和MLST分析显示，产KPC-2型菌株主要为ST11-B型和ST395-A型，产KPC-2型和IMP-4型菌株主要为ST345-M型和ST11-B型，产NDM-1型菌株为ST263-F型和ST15-C型。结论:CRKP耐药现象严重，菌株中存在多种碳青霉烯酶，多携带KPC-2及IMP-4基因。

目的:探讨河南省某医院高毒力耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（hv-CRKP）的临床分布、耐药特征和分子流行病学特征，为临床治疗用药和院内感染防控提供科学依据。方法:采用临床资料回顾性研究。回顾性分析2020年1月至2022年12月河南省中医院临床微生物实验室分离的CRKP菌株相关患者的临床资料。利用挑丝试验、毒力基因检测、血清杀伤试验和大蜡螟幼虫毒力试验联合检测筛选出hv-CRKP菌株；WHONET 5.6分析hv-CRKP临床特征及25种抗菌药物耐药率；胶体金法检测hv-CRKP的碳青霉烯酶表型，多聚酶链式反应（PCR）技术和桑格测序技术检测hv-CRKP检测碳青霉烯酶耐药基因、多位点序列分型（MLST）和荚膜血清型。结果:2020—2022年本院共检出非重复CRKP临床分离株264株，其中hv-CRKP 23株，hv-CRKP的检出率为8.71%（23/264），主要分布在重症医学科（10/23）和神经外科（8/23），标本来源主要为痰液（10/23）和支气管肺泡灌洗液（6/23）；hv-CRKP对β-内酰胺类、氟喹诺酮类和氨基糖甙类抗菌药物高度耐药，仅对多黏菌素B、替加环素和头孢他啶/阿维巴坦保持较好的敏感性；23株hv-CRKP中KPC-2型碳青霉烯酶的检出率为91.30%（21/23），未检出B类和D类碳青霉烯酶；MLST和荚膜血清分型结果显示，本院hv-CRKP主要为ST11型，占比56.52%（13/23），荚膜血清型以K64（9/13）和KL47（4/13）为主。结论:hv-CRKP主要来自重症科室的下呼吸道标本，耐药情况较为严重，流行株具有一定的多态性，主要为产KPC-2型碳青霉烯酶的ST11-K64型和ST11-KL47型。

目的 观察两药联合对耐碳青霉烯类肠杆菌(CRE)的体外联合药物敏感性,筛选出有效的抗感染治疗方案.方法 收集2023年1月至12月青岛市第八人民医院临床标本中分离的非重复CRE 60株,胶体金免疫层析法检测碳青霉烯酶型,微量肉汤稀释法测定菌株的最低抑菌浓度(MIC),棋盘法对头孢他啶/阿维巴坦(CZA)联合氨曲南(ATM),黏菌素(COL)分别联合替加环素(TGC)、美罗培南(MEM)、头孢哌酮/舒巴坦(SCF)、阿米卡星(AK)、左氧氟沙星(LEV),TGC分别联合MEM、SCF和AK,MEM分别联合SCF、厄他培南(ETP)进行联合药敏试验,部分抑菌浓度指数(FIC)判定联合效果.结果 60株CRE均检出碳青霉烯酶,其中肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)49株、新德里金属β-内酰胺酶(NDM)10株,亚胺培南酶(IMP)1株.CZA对49株产KPC菌株的MIC均≤8 mg/L,全敏感;对11株产NDM、IMP酶菌株的MIC均＞128 mg/L,全耐药;联合ATM后协同率为100％.MEM+SCF的协同率最高,为63.4％,协同率与相加率之和为96.7％.TGC+AK的协同率与相加率最低,为31.7％.KPC酶型和NDM酶型菌株中,MEM+SCF的协同率与相加率之和最高,分别为100.0％和80.0％,COL+LEV的协同率与相加率之和最低,分别为32.6％和30.0％.11种联合方案均无拮抗作用,对CRE菌株的MIC范围、MIC50和MIC90值与各个单药相比均有不同程度的减低.结论 CZA单独或联合ATM对CRE菌株有效.MEM+SCF的协同率与相加率之和最高,可作为临床经验用药参考.

目的:产KPC-2型肺炎克雷伯菌可引起β-内酰胺类抗生素、碳青霉烯类抗生素产生耐药性.通过噬菌体展示技术从抗KPC-2纳米抗体文库中筛选与KPC-2特异性结合的纳米抗体,为产KPC-2型肺炎克雷伯菌耐药性的检测和诊断提供技术支持.方法:利用重组KPC-2免疫双峰骆驼,从骆驼的外周血淋巴细胞中提取RNA,逆转录为cDNA,通过两轮嵌套式PCR扩增出纳米抗体片段,构建抗体文库,并通过噬菌体展示技术筛选特异性纳米抗体.通过HPLC和OCTET分别进行表位分析和亲和力测定.结果:构建了一个库容为5.47×108 cfu/ml且插入有效片段不低于81.25%的纳米抗体文库;并建立抗KPC-2纳米抗体的免疫淘选方法;获得了2个不同CDR3区的纳米抗体K2和K5,亲和力分别为6.0 nmol/L和4.8 nmol/L.且在KPC-2上具有2个非竞争性结合表位.结论:成功淘选出2个不同表位的特异性纳米抗体,有望替代传统抗体用于肺炎克雷伯菌耐药性疾病的检测和诊断.