目的:探讨右美托咪定对SHG-44胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:采用0.1 μmol/L(低浓度组)、1.0 μmol/L(中浓度组)和10.0 μmol/L(高浓度组)右美托咪定处理SHG-44胶质瘤细胞(购自中国科学院细胞库)。将si-DEAD/H盒解旋酶11反义核糖核酸1(DDX11-AS1)和pcDNA-DDX11-AS1分别转染至SHG-44胶质瘤细胞并采用10.0 μmol/L右美托咪定处理。采用噻唑蓝(MTT)法、克隆形成实验、流式细胞仪、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞增殖、克隆形成数、凋亡率、DDX11-AS1、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)、Caspase-3前体(pro-Caspase-3)表达。采用 t检验或单因素方差分析。 结果:低浓度组、中浓度组和高浓度组SHG-44胶质瘤细胞吸光度( A) 490值、克隆形成数、DDX11-AS1和pro-Caspase-3表达依次降低[ A490值为1.17±0.05、0.90±0.04、0.55±0.03，克隆形成数为(108.67±3.09)、(82.00±2.45)、(55.00±2.16)个，DDX11-AS1为0.96±0.04、0.68±0.03、0.36±0.02，pro-Caspase-3为0.72±0.04、0.48±0.02、0.24±0.02]，凋亡率和cleaved-Caspase-3表达依次升高[凋亡率为(6.38±0.18)%、(16.78±0.71)%、(21.77±0.77)%，cleaved-Caspase-3为0.23±0.01、0.45±0.02、0.64±0.03]，差异有统计学意义( F＝140.693、198.187、262.395、321.333、611.199、135.429， P<0.05)。si-DDX11-AS1组SHG-44胶质瘤细胞 A490值、克隆形成数和pro-Caspase-3表达低于si-NC组SHG-44胶质瘤细胞[0.72±0.03比1.20±0.05、(65.00±2.45)个比(110.33±4.78)个、0.34±0.02比0.73±0.04， t＝14.258、14.617、15.105， P<0.05]，凋亡率和cleaved-Caspase-3高于si-NC组SHG-44胶质瘤细胞[(18.38±0.53)%比(6.45±0.20)%、0.53±0.02比0.21±0.01， t＝36.477、24.787， P<0.05]。高浓度右美托咪定＋pcDNA-DDX11-AS1组SHG-44胶质瘤细胞 A490值、克隆形成数和pro-Caspase-3表达高于高浓度右美托咪定＋pcDNA组[0.98±0.04比0.54±0.03、(93.33±3.09)个比(56.00±2.16)个、0.63±0.03比0.24±0.01， t＝15.242、17.150、21.361， P<0.05]，凋亡率和cleaved-Caspase-3表达低于高浓度右美托咪定＋pcDNA组[(13.93±0.33)%比(21.79±0.72)%、0.34±0.02比0.65±0.03， t＝20.189、15.892， P<0.05]。 结论:右美托咪定通过下调DDX11-AS1表达来抑制胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡。

目的:探讨二甲双胍调控miR-340-5p/DEAD-box解旋酶17（DEAD-box helicase 17，DDX17）轴对高糖诱导成骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:MC3T3-E1细胞分为对照组、高糖组、二甲双胍组、inhibitor NC组、miR-340-5p inhibitor组、二甲双胍+mimic NC组、二甲双胍+miR-340-5p mimic组，qRT-PCR检测miR-340-5p表达；Western blot检测DDX17、细胞周期素D1（Cyclin D1）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein，Bax）、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Cleaved aspartate-specific cysteine protease-3，Cleaved caspase-3）蛋白；CCK-8、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（5-ethynyl-2’-deoxyuridine，EdU）染色检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；荧光原位杂交实验、双荧光素酶分别验证miR-340-5p与DDX17的定位、靶向关系。结果:与对照组比较，高糖组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达升高（ t=19.81，39.47，24.61，21.62， P均<0.001），OD 450值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达降低（ t=7.624，30.100，26.54，19.46，21.20， P均<0.001）；与高糖组比较，二甲双胍组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达降低（ t=13.37，28.55，18.35，18.78， P均<0.001），OD 450值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达升高（ t=7.97，25.76，18.48，12.39，18.98， P均<0.001）；与高糖组、inhibitor NC组比较，miR-340-5p inhibitor组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达降低（ F=85.92，301.11，142.64，170.35， P均<0.001），OD 450值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达升高（ F=26.54，447.72，249.31，113.46，393.27， P均<0.001）；与二甲双胍组、二甲双胍+mimic NC组比较，二甲双胍+miR-340-5p mimic组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达升高（ F=36.27，395.56，94.90，18.59， P均<0.001），OD 450值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达降低（ F=21.44，128.47，24.28，25.89，18.06， P均<0.001）。miR-340-5p靶向调控DDX17表达，且二者共定位于细胞质中。 结论:二甲双胍通过下调miR-340-5p表达，上调DDX17表达进而促进高糖诱导的MC3T3-E1细胞增殖，抑制凋亡。

目的:检测DEAD盒RNA解螺旋酶5(DDX5)和微小RNA-205(miR-205)在前列腺癌(PCa)中的表达情况，并分析二者与PCa预后的关系。方法:选取2015年4月至2017年4月于北京市朝阳区双桥医院行前列腺癌根治术或穿刺活检术的86例PCa患者为研究对象，取患者术中切除的癌组织及癌旁组织分别作为PCa组和对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中DDX5 mRNA、miR-205的水平。采用免疫组化法检测组织中DDX5的表达情况。分析DDX5、miR-205表达水平与临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier生存分析DDX5、miR-205表达水平与PCa患者的预后关系。采用Cox回归分析PCa预后不良的影响因素。结果:PCa组的DDX5 mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(均 P<0.05)，miR-205表达水平低于对照组( P<0.05)。PCa患者中DDX5、miR-205表达与肿瘤分期、血清PSA、Gleason评分、肿瘤转移均有相关性(均 P<0.05)，而与患者年龄、切缘性质均无相关性(均 P>0.05)。经Kaplan-Meier生存分析，DDX5阳性表达患者的3年累积生存率低于DDX5阴性表达患者( P<0.05)；miR-205高表达患者的3年累积生存率高于miR-205低表达患者( P<0.05)。多因素Cox分析结果显示，DDX5水平偏高、miR-205水平偏低是PCa不良预后的危险因素( HR＝2.598、3.342，均 P<0.01)。 结论:在PCa患者癌组织中DDX5高表达，miR-205低表达，二者与PCa的多种临床病理及预后有关，是PCa患者预后不良的危险因素。

目的 发现严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)木瓜样蛋白酶(PLpro)的宿主互作分子,探索其生物学意义.方法 邻近蛋白标记结合质谱分析筛选宿主互作分子DEAD-box解旋酶3(DDX3);免疫荧光法分析PLpro与DDX3的胞内共定位;免疫共沉淀法分析PLpro与DDX3的相互作用,以及PLpro对DDX3与IκB激酶ε(IKKe)和TANK结合激酶1(TBK1)、DDX3与线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)互作的影响;荧光素酶报告基因法检测PLpro对β干扰素(IFN-β)通路的影响和对底物的酶切效率.结果 DDX3能够与PLpro发生细胞内共定位和相互作用;PLpro可能抑制DDX3-MAVS复合体形成,抑制DDX3-IKKε-TBK1之间的相互作用,负调控Ⅰ型干扰素通路;DDX3过表达情况下,PLpro/PLP-TM对底物位点的切割效率显著升高,而DDX3表达降低时,切割效率则显著降低.结论 DDX3可能是PLpro的宿主相互作用分子之一;PLpro负调控DDX3活化的IFN-β表达,为病毒复制提供有利的免疫环境,提升蛋白酶切割活性,共同促进病毒复制.

目的 探讨含 OTU 结构域的泛素醛结合蛋白 2(OTUB2)影响RNA解螺旋酶 54(DDX54)的活性及其对中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的形成和结直肠癌(CRC)细胞活力、侵袭的影响.方法 分离CRC患者和健康对照组的外周血中性粒细胞,并使用佛波酯(PMA)或脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)刺激中性粒细胞4 h;Western blot检测NETs标记物髓过氧化物酶(MPO)和瓜氨酸组蛋白H3(Cit-H3)的表达;干预SW480 细胞中OTUB2 或DDX54 的表达并将其和中性粒细胞共培养,细胞分为如下组:对照组(不做任何处理),NETs 组、vector 组、OTUB2 组、NETs+si-OTUB2 组(SW480 细胞、转染了vector、OTUB2 过表达质粒和si-OTUB2的SW480 细胞分别与 PMA 处理的中性粒细胞共培养),OTUB2+DNase Ⅰ组(转染了OTUB2 过表达质粒的SW480细胞与DNase Ⅰ处理的中性粒细胞共培养),si-OTUB2 组、OTUB2+si-NC 组和 OTUB2+si-DDX54 组(转染了 si-OTUB2、OTUB2 过表达质粒和 si-NC、OTUB2 过表达质粒和si-DDX54 的 SW480 细胞分别与中性粒细胞共培养).ELISA检测 SW480 细胞上清液中 MPO-DNA 复合物相对表达量和Cit-H3 的浓度;MTT和Transwell检测SW480 细胞活力和侵袭能力;RNA测序筛选OTUB2 调控的下游基因并使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫共沉淀(co-IP)和谷胱甘肽 S-转移酶(GST)亲和纯化(GST-pull-down)、His-tag pull-down实验验证 DDX54 和OTUB2 的相互作用.结果 与健康对照相比,CRC患者外周血中NETs的形成增加.与对照组相比,NETs组CRC细胞活力和侵袭增加(P<0.05).与vector组比较,OTUB2 组MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3 的浓度增加,细胞活力和侵袭增加(P<0.05);而与OTUB2 组比较,OTUB2+DNase Ⅰ组MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3 的浓度减少,细胞活力和侵袭减少(P<0.05).Co-IP 实验、GST pull down 实验和His-tag pull down实验表明OTUB2 和DDX54 之间存在相互作用.与 OTUB2+si-NC 组比较,OTUB2+si-DDX54 组MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3 的浓度减少,细胞活力和侵袭减少(P<0.05).结论 去泛素化酶OTUB2 可以通过上调DDX54 的增加NETs的形成并促进CRC细胞活力和侵袭.

目的 探讨长链非编码 RNA人蛋白酶体 α亚基 3 型的反义 RNA1(PSMA3-AS1)调节 miR-140-3p/DEAD box p68 RNA 解旋酶(DDX5)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响.方法 qRT-PCR、Western blot、免疫组化法分别检测 40 例肺癌组织和细胞系中PSMA3-AS1、miR-140-3p、DDX5 表达.将A549 细胞分为:control组、si-NC组、si-PSMA3-AS1 组、si-PSMA3-AS1+inhibitor-NC组、si-PSMA3-AS1+miR-140-3p inhibitor组,qRT-PCR检测转染效率;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及DDX5 蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与PSMA3-AS1 和DDX5 的关系;构建肺癌裸鼠模型,分为si-NC、si-PSMA3-AS1 组,测量肿瘤质量与体积,qRT-PCR检测移植瘤组织中miR-140-3p表达,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、DDX5 蛋白表达.结果 在肺癌组织/细胞系中,PSMA3-AS1 mRNA、DDX5 蛋白表达升高,miR-140-3p mRNA表达水平降低(P＜0.05);敲低PSMA3-AS1 表达可显著抑制A549 细胞增殖、迁移与侵袭,降低PCNA、MMP-2、vimentin、DDX蛋白表达,促进miR-140-3p、Bax、E-cadherin表达及细胞凋亡(P＜0.05);下调miR-140-3p,可减弱敲低PSMA3-AS1 对A549 细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用(P＜0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-140-3p与PSMA3-AS1、miR-140-3p与DDX5 存在靶向调控关系(P＜0.05);体内实验显示,抑制PSMA3-AS1 表达可显著降低移植瘤质量和体积,降低 Ki-67、DDX5 表达水平,升高 miR-140-3p 表达(P＜0.05).结论 敲低PSMA3-AS可能通过调节miR-140-3p/DDX5 轴,抑制肺癌细胞的增殖和EMT,促进细胞凋亡.

目的:研究DDX3X/NF-κB通路在蛛网膜下腔出血(SAH)小鼠早期神经元凋亡过程中的作用.方法:利用颈内动脉穿刺的方法构建SAH小鼠模型,对小鼠进行神经功能评分.使用表达DDX3X靶向shRNA的重组慢病毒(Lv-shDDX3X)预先敲低脑内DDX3X的表达,或者通过NF-κB抑制剂NF-κB-IN-1(简称IN-1)抑制NF-κB信号通路,利用Western Blot检测小鼠皮质DDX3X和NF-κB(p65)的表达,通过TUNEL/NeuN染色检测各组小鼠大脑皮质神经元的凋亡.结果:SAH术后24d小鼠神经功能显著障碍(P＜0.05),皮质中DDX3X表达显著增加而NF-KB(p65)的表达显著降低(P＜0.05).预先敲低DDX3X后,小鼠神经功能显著恢复,NF-KB(p65)蛋白表达显著高于SAH组(P＜0.05);当在敲低DDX3X表达的同时使用IN-1抑制NF-κB活性,则小鼠神经功能恢复不明显.TUNEL/NeuN染色显示敲低DDX3X表达后小鼠脑组织中TUNEL阳性的死亡神经元数量少于SAH组(P＜0.05),而如果在敲低DDX3X表达的同时使用IN-1抑制NF-κB活性,则TUNEL阳性的神经元数量减少不明显.结论:DDX3X/NF-κB通路介导了 SAH后早期脑损伤小鼠的细胞死亡.

目的:探讨结直肠癌(CRC)组织及结肠癌细胞DLD-1中DEAD盒解旋酶10(DDX10)与Bystin-like(BYSL)的关系及其临床意义.方法:收集2017年3月至2018年3月间福建医科大学附属第二医院手术切除的78例CRC组织和配对癌旁组织,采用免疫组织化学Envision法检测癌组织和癌旁组织中DDX10和BYSL的表达水平,采用卡方检验、Pearson相关性分析和Kaplan-Meier法分别分析CRC组织中DDX10、BYSL蛋白表达与其患者的临床病例特征的关系,两者表达的相关性,以及与患者PFS和OS的关系.利用瞬时转染技术在DLD-1细胞中分别转染siDDX10和siNC,用qPCR法检测DLD-1细胞中敲减DDX10的表达对BYSL表达的影响,用CCK-8及Transwell实验验证DDX10及BYSL表达对结肠癌细胞增殖迁移及侵袭的影响.结果:免疫组织化学Envision法检测显示,与癌旁组织相比,DDX10和BYSL在CRC组织中呈高表达(73.08%和74.36%).CRC组织中DDX10与BY肿瘤分期、是否发生淋巴结转移及复发等临床病例特征均有关联(均P<0.05).Pearson相关分析结果显示,DDX10与BYSL的表达呈正相关(r=0.636,P<0.001).Kaplan-Meier生存分析结果显示,DDX10与BYSL的高表达与患者更差的预后相关.Logistic回归分析发现,DDX10与BYSL均是CRC复发的独立风险因素.CCK-8法及Transwell实验检测结果显示,敲降DDX10的表达可使BYSL表达降低,且可抑制DLD-1细胞的增殖、迁移、侵袭能力(均P<0.05).结论:DDX10和BYSL在CRC组织中呈高表达,两者表达水平呈正相关,且与患者更差的预后相关,是CRC复发的独立风险因素.可调控结直肠癌DLD-1细胞的增殖、迁移、侵袭能力.

目的 探讨乌头碱通过调控微小RNA-181d-5p(miR-181d-5p)/DEAD-box RNA解旋酶3(DDX3)轴对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响.方法 使用不同剂量乌头碱处理宫颈癌HeLa细胞,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖确定给药剂量.将HeLa细胞分为对照组(正常培养,不进行处理),乌头碱低剂量组(4 mg/L)、中剂量组(8 mg/L)、高剂量组(16 mg/L),顺铂组(5 mg/L),乌头碱高剂量+miR-NC组[16 mg/L乌头碱+转染miR-181d-5p siRNA阴性对照(miR-NC)质粒]及乌头碱高剂量+miR-181d-5p低表达组[16 mg/L乌头碱+转染miR-181d-5p小干扰RNA(siRNA)质粒].平板克隆形成实验及流式细胞仪分别检测各组HeLa细胞克隆形成数与凋亡情况;实时荧光定量PCR检测HeLa细胞中miR-181d-5p和DDX3 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测HeLa细胞中DDX3、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平;双萤光素酶报告基因实验验证miR-181d-5p与DDX3的靶向关系.结果 以0.5～64 mg/L的乌头碱分别处理HeLa细胞24 h、48 h、72 h后,对HeLa细胞均有不同程度的抑制作用,选择剂量为4 mg/L、8 mg/L、16 mg/L的乌头碱用于后续实验.与对照组比较,乌头碱低、中、高剂量组及顺铂组HeLa细胞克隆形成数、DDX3 mRNA和蛋白、Cyclin D1、PCNA、Bcl-2 蛋白表达水平依次降低(P＜0.05),凋亡率、miR-181d-5p、Bax、Caspase-3蛋白表达水平依次升高(P＜0.05);与乌头碱高剂量组和乌头碱高剂量+miR-NC组比较,乌头碱高剂量+ miR-181d-5p低表达组HeLa细胞克隆形成数、DDX3 mRNA和蛋白、Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白表达水平升高(P＜0.05),凋亡率、miR-181d-5p、Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低(P＜0.05);双萤光素酶报告基因检测证实miR-181d-5p与DDX3存在靶向关系.结论 乌头碱可调控miR-181d-5p/DDX3轴,促进miR-181d-5p表达,抑制DDX3表达,进而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,促进细胞凋亡.

目的 研究老年胃癌患者DEAD-box蛋白家族RNA解旋酶3(DDX3)的表达情况,分析其表达与临床病理参数的相关性.方法 选择70例经病理证实的老年胃癌患者,采集胃癌组织和癌旁组织标本,分别采用免疫组化法和 RT-PCR 法检测 DDX3蛋白及 mRNA,分析 DDX3的表达与病理参数的相关性.结果 DDX3蛋白在胃癌组织中的阳性表达率(51.4%)高于癌旁组织(8.6%),差异有显著性(Х2=30.6122, P=0.000).DDX3 mRNA 表达吸光度值(1.48 G 0.19)高于癌旁组织(1.05 G 0.23),差异有显著性(t=11.8809,P=0.000).胃癌分化程度、临床分期、肿瘤浸润深度及是否存在淋巴结转移与DDX3表达阳性率有关,胃癌低分化、临床分期Ⅲ~Ⅳ期及出现淋巴结转移者DDX3表达阳性率较高.DDX3 mRNA的表达与胃癌分化程度、临床分期、肿瘤浸润深度及是否存在淋巴结转移显著相关(P<0.05).结论 DDX3的高表达与老年胃癌的发生、发展相关.