目的:探讨2个近亲婚配分别导致遗传性激肽释放酶原(PK)和高分子量激肽原(HMWK)缺陷症家系的分子致病机制。方法:选取分别于2021年12月3日和2022年6月16日就诊于温州医科大学附属第一医院的1个PK缺陷症家系(共4代10人)和1个HMWK缺陷症家系(共3代6人)作为研究对象。收集相关临床资料，检测先证者及其家系成员的相关凝血指标。提取受试者外周血基因组DNA后，对 KLKB1和 KNG1基因进行测序，并对候选变异进行生物信息学分析。本研究通过温州医科大学附属第一医院医学伦理委员会的审查(伦理号：KY2022-R193)。 结果:先证者A为29岁女性，与其弟弟血浆PK活性均极度降低(<1.0%)。先证者B为66岁男性，血浆HMWK活性极度降低(<1.0%)。测序结果发现，先证者A及其弟弟 KLKB1基因第5外显子均存在c.417_418insCATTCTTA(p.Arg140Hisfs*3)纯合插入变异，其祖母、外祖母、父亲、母亲、妹妹和儿子均携带杂合插入变异，其外祖父和丈夫均为野生型；先证者B的 KNG1基因第4外显子存在c.460C>A(p.Pro154Thr)纯合错义变异，其儿子携带杂合错义变异，家系其他成员均为野生型。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)相关指南，上述2个变异分别被评定为致病性(PVS1＋PM2_Supporting＋PM4)与可能致病性(PS4＋PM2_Supporting＋PP3＋PP4)。 结论:KLKB1基因c.417_418insCATTCTTA(p.Arg140Hisfs*3)与 KNG1基因c.460C>A(p.Pro154Thr)变异可能分别为2个家系PK活性与HMWK活性降低的遗传学病因。

目的 探究外周血程序性坏死中受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)、RIPK3表达水平与乙型肝炎病毒(HBV)慢性化、重症化的关系.方法 选择2021年3月—2023年3月于温州市中西医结合医院消化内科就诊的103例HBV感染患者作为研究组,依据患者病情严重程度分为慢性乙型肝炎(CHB)组(n=56)与重症乙型肝炎(CHB-S)组(n=47),同时选择同期到医院体检健康者43名作为对照组;测定并比较各组外周血程序性坏死RIPK1、RIPK3以及HBV-DNA水平,分析外周血RIPK1、RIPK3临床意义.结果 研究组患者外周血RIPK1、RIPK3、MLKL表达水平均高于对照组(P＜0.05);外周血RIPK1、RIPK3、MLKL与肝纤维化程度呈正相关关系(r=0.613,0.654,0.766;P＜0.001),与炎症活动分级也呈正相关关系(r=0.429,0.572,0.491;P＜0.001);CHB-S组患者周血RIPK1、RIPK3、MLKL以及HBV-DNA水平均高于CHB组患者(P＜0.05);外周血RIPK1、RIPK3、MLKL 与 HBV-DNA 水平呈正相关关系(r=0.455,0.396,0.627;P＜0.001);受试者工作特征(ROC)曲线显示,外周血RIPK1、RIPK3、MLKL对HBV感染慢性化与重症化鉴别价值AUC值分别为0.760、0.688、0.877,三指标联合AUC值为0.929.结论 外周血程序性坏死RIPK1、RIPK3表达与HBV感染患者慢性化、重症化关系密切,其作用机制可能与肝纤维化、炎症反应以及HBV复制有关.

柚皮苷是一种天然的类黄酮化合物,主要存在于葡萄柚、酸橙及其变种的果皮中,被广泛应用于医学、食品科学、化学等方面.柚皮苷具有多种药理活性,如调血脂、抗糖尿病、神经保护等,并在282 nm处有强烈的紫外吸收峰,柚皮苷在自然界中来源丰富,药理作用极其广泛.诸多研究表明,柚皮苷通过多种信号通路影响细胞增殖,发挥抗肿瘤作用.本文介绍黄酮类药物的功能及作用机制,结合DNA损伤机制,进一步阐述DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)的基本结构及相关功能,总结柚皮苷在多种肿瘤及疾病中的作用及机制,从理论角度推测柚皮苷能够提高非小细胞肺癌放疗增敏作用的可能性.

随着新的免疫治疗和靶向治疗的发展,其他肿瘤的预后明显得到改善.但胰腺癌的5年生存率一直维持在10％以下,是极具挑战性的恶性肿瘤,亟待寻找新的治疗策略.DNA损伤修复通路形成复杂的调控网络,其功能缺陷将导致肿瘤的发生,但同时增加对基因毒性药物及放射治疗的敏感性.DNA损伤修复通路的异常与恶性肿瘤的发展和肿瘤的耐药密切相关,而PARP抑制剂在BRCA1/2缺陷肿瘤中的成功应用,极大地促进了针对DNA损伤修复缺陷肿瘤的分子靶向治疗研究.除PARP抑制剂外,针对ATR、CHK1、WEE1、DNA-PK等DNA损伤修复的抑制剂均已进入临床试验.在转移性胰腺导管癌中发现,15％～20％的患者存在DNA损伤修复基因的体细胞突变或种系突变,然而其中的部分突变并不影响基因的功能.DNA损伤修复基因在胰腺癌等肿瘤中频繁发生表观遗传异常改变,深入研究其对DNA修复调控网络的影响,有望获得新的"协同致死"治疗策略.

目的 了解山西省晋中市猪刚地弓形虫的感染情况和基因型现状,为猪弓形虫病的防控提供依据.方法 2021年从山西省晋中市太谷区、平遥县、昔阳县采集猪淋巴组织和肌肉组织,用动物组织提取试剂盒提取样品基因组DNA,半巢式PCR扩增弓形虫B1基因并测序.运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,扩增弓形虫阳性样品和8个参考虫株的SAG1、5'-SAG2、3'-SAG2、alter.SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1和Apico等12个位点,用限制性内切酶对扩增片段进行酶切,将弓形虫阳性样品的酶切产物与8个弓形虫国际参考虫株进行对比,通过条带大小确定基因型.结果 山西省晋中市130只猪共检出37份弓形虫阳性样品,阳性率为28.5％(37/130).其中,太谷区阳性率为32.7％(18/55),平遥县阳性率为26.0％(13/50),昔阳县阳性率为24.0％(6/25).猪淋巴组织的弓形虫阳性率为33.0％(33/100),肌肉组织的弓形虫阳性率为13.3％(4/30).在37份弓形虫阳性组织中,1个样品成功扩增和酶切出所有位点,鉴定为ToxoDB#9;1个样品成功扩增和酶切出8个位点,疑似ToxoDB#9、ToxoDB#20或ToxoDB#137;3个样品成功扩增和酶切出6个位点,疑似ToxoDB#9、ToxoDB#20或ToxoDB#137;1个样品成功扩增和酶切出8个位点,疑似Type Ⅰ、ToxoDB#27或ToxoDB#35;1个样品成功扩增和酶切出6个位点,疑似Type Ⅰ、ToxoDB#24、ToxoDB#27或ToxoDB#35.结论 本研究对山西省晋中市猪弓形虫感染情况进行了分子检测和基因型鉴定,阳性率较高,淋巴组织阳性率高于肌肉组织,PCR-RFLP鉴定出ToxoDB#9基因型和疑似ToxoDB#9、Type Ⅰ基因型样品.

目的 观察内关穴电针预处理后急性心肌梗死小鼠(AMI)心功能、局部炎症水平及巨噬细胞M2 型极化变化,并从调控DNA-PK/Rictor/Myc信号通路角度探讨其可能机制.方法 将雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组 10 只.采用结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型.电针组接受双侧内关穴电针干预,疏密波,2/15 Hz,1 mA,每次20 min,每日 1 次,连续 3 d,电针干预结束后 30 min造模.采用超声心动图检测心脏射血分数(EF)和短轴收缩率(FS);HE、TUNEL染色观察小鼠心肌病理形态和心肌细胞凋亡;免疫组化和ELISA法检测梗死区心肌组织和外周血中IL-1β、TNF-α、NLRP3 的表达水平;流式细胞术检测心脏中巨噬细胞极化状态,Western blot法检测梗死心肌中DNA-PK、p-DNA-PK、Rictor、Myc的蛋白表达水平.结果 与假手术组相比,模型组的EF、FS明显降低(P<0.000 1),炎性细胞浸润明显,心肌细胞凋亡指数显著升高(P<0.001),心肌组织和血清中IL-1β、NLRP3、TNF-α表达上调(P<0.01,P<0.001),巨噬细胞百分比明显增加(P<0.001),M2 型巨噬细胞百分比下降(P<0.000 1),心肌组织中p-DNA-PK、Rictor和Myc蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.000 1);与模型组相比,电针组的EF、FS显著升高(P<0.000 1),炎性细胞浸润减少,心肌细胞凋亡指数下降(P<0.01),心肌组织和血清中IL-1β、NLRP3、TNF-α表达下调(P<0.05,P<0.01,P<0.001),巨噬细胞百分比下降(P<0.05),M2型巨噬细胞百分比上升(P<0.01),心肌组织中p-DNA-PK、Rictor和Myc蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.000 1).结论 电针预处理可能通过调控DNA-PK/Rictor/Myc信号通路,促进巨噬细胞M2 极化,减轻局部炎症,减少心肌细胞凋亡,从而提高心功能,实现心肌保护效应.

目的 拟筛选宫颈鳞癌预后相关的miRNAs分子并探索其可能的作用机制,为改善宫颈鳞癌预后提供实验依据.方法 通过生物信息学方法比较分析宫颈鳞癌患者和正常对照的基因表达情况,获得差异表达的miRNA;然后进行生存分析,找到与预后相关的关键 miRNA;最后通过构建 lncRNA-miRNA-mRNA 竞争性内源 RNA(ceRNA)网络及基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析,探索预后相关的ceRNA网络.结果 共获得宫颈鳞癌中差异表达的miR-NA 106 个,其中,9 个 miRNAs(hsa-miR-425-5p、hsa-miR-145-3p、hsa-miR-1307-3p、hsa-miR-200c-3p、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-210-5p、hsa-miR-142-3p)与预后显著相关.成功构建了一个宫颈鳞癌预后相关的ceRNA网络,其中包括5 个miRNA节点、132 个mRNA节点、44 个lncRNA节点和181 条边.最后,GO和KEGG分析显示该网络主要涉及蛋白结合、生长因子结合、转录因子的活化、DNA特异序列的结合等功能,主要参与环磷酸鸟苷酸-蛋白激酶(cGMP-PK)G、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、叉头框蛋白(Fox)O信号通路等的调节.结论 hsa-miR-425-5p等9 个miRNAs与宫颈鳞癌预后显著相关,并可能通过lncRNA-miRNA-mRNA ceRNA网络的方式参与预后调控,为宫颈鳞癌预后相关机制研究提供新思路.

目的 探讨DDX46基因对结肠癌细胞的电离辐射敏感性的影响及其作用机制.方法 DDX46基因RNA干扰慢病毒转染的SW480细胞为实验组,空载质粒慢病毒转染的SW480细胞为对照组.两组细胞转染72 h后,分别进行0和4 GyX射线照射,采用CCK-8方法检测两组的细胞活力;实验组联合4GyX射线照射24 h后,采用免疫荧光技术和Western blot法检测细胞γ-H2AX foci数量以及DNA损伤修复通路关键蛋白的表达水平,确定DDX46与辐射诱导的DNA损伤修复的关系.结果 4GyX射线照射24 h后,实验组的细胞活力比照射前降低(15.02±3.92)％(t=-4.696,P＜0.05),比对照组降低(17.43±1.83)％(t=4.844,P＜0.01);而对照组照射前后比较差异无统计学意义(P＞0.05).同时,实验组γ-H2AX foci数量相比于对照组增加了(43.03±17.6)％(t=-3.108,P＜0.05),ATM的蛋白水平显著升高(t=7.530,P＜0.01),而ATM的活性形式p-ATM以及ATM的下游靶蛋白Rad50的蛋白水平则明显降低(t=4.260、4.260、P＜0.05),同时γ-H2AX的蛋白表达水平也有一定程度的升高(t=-3.090,P＜0.05),DNA-PK在两组细胞内的蛋白水平变化不大.结论 沉默DDX46可以提高结肠癌细胞系SW480的辐射敏感性,其机制可能是DDX46表达沉默抑制结肠癌细胞系SW480中ATM的活化,从而抑制辐射诱导的DNA损伤的修复,提高SW480的辐射敏感性.

目的 探讨内质网应激通路抑制剂Salburinal增加射线诱导人头颈鳞癌细胞凋亡的作用机制.方法 将3种头颈部鳞癌细胞系(KB、Fadu、Detroit562)分别设立对照组、sal组、单纯照射组(IR组)和sal联合照射组(IR+sal组),检测头颈部鳞癌细胞DNA损伤修复相关蛋白p-ATM/ATM、DNA-PK及凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3的表达;检测对照组、sal组、IR组和IR+ sal组细胞凋亡分数;MTT法检测Salburinal对细胞存活率的影响.结果 与IR组相比,IR+sal组增加DNA损伤相关蛋白ATM磷酸化水平增加(t=3.5、8.43、9.42,P均＜0.05),DNA双链修复蛋白DNA-PK的表达较IR组相比下调(t=9.19、17.44、16.67,P均＜0.05).放射联合Salubrinal增加凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3表达(t=6.79、9.76、9.78,P均＜0.05).此外,与IR组相比,Salubrinal增加射线诱导的人头颈部鳞癌细胞凋亡(t=5.67、6.95、7.28,P均＜0.05).Salburinal对3种头颈部鳞癌细胞具有浓度依赖性和时间依赖性.结论 内质网应激通路抑制剂Salburinal上调射线诱导人头颈部鳞癌细胞的凋亡,其作用机制可能与射线诱导DNA双链的损伤,抑制其损伤的修复,进而增加肿瘤细胞的凋亡.

Coronary artery disease (CAD)is a major cause of death and disability worldwide, and consumes a considerable amount of medical resources every year.Clopidogrel is a first-line antiplate-let therapy for CHD, butit is associated with substantial variability in PK and pharmacodynamics re-sponse. To date, gene variants explain only a smallproportion of the variability.The study aimed to identify new genetic loci-modifying antiplatelet response to clopidogrel in Chinese patients with CAD by a systematic analysis combining antiplatelet effects and PK, and further to investigate the PON1 gene promoter DNA methylation and genetic variations possibly influencing clinical outcomes in pa-tients undergoing PCI. We identified novel variants in two transporter genes (SLC14A2rs12456693, ATP-binding cassette [ABC]A1 rs2487032) and in N6AMT1 (rs2254638) associated with P2Y12 reac-tion unit (PRU) and plasma active metabolite (H4) concentration. These new variants dramatically im-proved the predictability of PRU variability to 37.7％. The associations between these loci and PK pa-rameters of clopidogrel and H4 were observed in additional patients, and its function on the activation of clopidogrel was validated in liver S9 fractions (P<0.05). Rs2254638 was further identified to exert a marginal risk effect formajor adverse cardiac events in an independent cohort.Multivariate logistic regression analysis indicated that PON1methylation level at CpG site-161 (OR=0.95; 95％ CI=0.92–0.98;P<0.01)and the use of angiotensin converting enzyme inhibitors(OR=0.48;95％ CI=0.26–0.89;P<0.01) were associated with decreased risk of bleeding events. In conclusion, new genetic variants were systematically identified as risk factors for the reduced efficacy of clopidogrel treatment.The ab-normal expression of DNA methylation-regulating key genes in the pharmacokinetic and pharmacody-namics pathways of clopidogrel and aspirin may modify clinical outcomes in dual antiplatelet-treated pa-tients undergoing PCI.