目的:探讨双氢睾酮(DHT)浓度波动对前列腺上皮细胞(RWPE-2细胞系)中错配修复基因MutL同源物(MLH1)表达的影响及其机制。方法:将RWPE-2细胞分为空白组，恒定组(DHT浓度为1、10 nmol/L)以及波动组(DHT浓度为1、10 nmol/L，每24 h波动1次)，以不同浓度的DHT干预不同的时间(0、24、48、72 h)，观察细胞的形态、生长状态及细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力；应用蛋白质印迹法(Western blot)、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测雄激素受体(AR)信号通路靶基因[前列腺特异抗原(PSA)、FK506结合蛋白(FKBP5)]、苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路靶基因[细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)]和MLH1基因表达的改变；免疫荧光法检测基因分布位置的变化。应用Graph Pad 7.0统计软件分析，组间差异采用 t检验分析。 结果:恒定组与波动组中RWPE-2细胞形态学变化与DHT作用具有浓度(1～10 nmol/L)依赖性；CCK-8结果提示，72 h后，与空白组(6.904±0.143)比较，恒定组(7.073±0.103)、(8.508±0.187)与波动组(8.662±0.327)、(9.239±0.167)相对吸光度( A)值均增加，提示DHT干预增强细胞增殖，呈时间浓度依赖性(1～10 nmol/L)，差异有统计学意义( t＝6.805、4.922、10.6， P<0.01)；Western blot结果提示，与空白组比较，波动组与恒定组中各靶基因的mRNA及蛋白表达水平均上调，波动组较恒定组中上述基因表达进一步上调，波动组FKBP5基因较恒定组表达下调，差异有统计学意义( t＝5.488、15.730、7.976、3.695、3.952、2.830， P<0.05)；免疫荧光结果显示，与空白组比较，波动组和恒定组中各靶基因核内分布增多，且波动组上述基因分布差异更显著。 结论:DHT能上调RWPE-2细胞中错配修复基因MLH1的表达，而DHT波动会使这种趋势增加，通过AR和Akt信号通路介导的细胞增殖是其可能机制之一。

目的:探讨lncRNA SNHG6与乳腺癌的关系及其可能的作用机制。方法:荧光定量PCR检测人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A与人乳腺癌细胞系MCF-7中SNHG6、miR-30-5p、FKBP3的表达情况；按照实验内容将MCF-7细胞分组：①si-NC组、si-SNHG6组、si-NC+miR-30-5p inhibitor组和si-SNHG6+miR-30-5p inhibitor组；②miR-NC组、miR-30-5p inhibitor组、miR-30-5p inhibitor+sh-NC组和miR-30-5p inhibitor+sh-FKBP3组。通过siRNA技术抑制SNHG6表达，采用脂质体介导法分别将miR-30-5p模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）及其阴性对照（miR-NC）转染MCF-7细胞，构建针对FKBP3基因的短发夹RNA（shRNA）慢病毒表达载体抑制FKBP3表达。CCK-8、细胞集落形成实验、细胞伤口愈合实验及Transwell实验观察各组MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭。通过生物信息学软件、双荧光素酶报告基因实验及蛋白质印迹法分析SNHG6与miR-30-5p、miR-30-5p与FKBP3之间的靶向关系。结果:与MCF-10A细胞比较，MCF-7细胞中SNHG6和FKBP3的表达水平显著增加而miR-30-5p的表达水平显著下降（ t=21.097, P=0.000； t=17.812， P=0.000； t=33.671， P=0.000）。与si-NC组比较，si-SNHG6组MCF-7细胞增殖活性被显著抑制（ t=19.569， P=0.000； t=25.077， P=0.000），细胞集落形成数显著下降（ t=34.071， P=0.000），细胞迁移与侵袭也受到抑制（ t=33.419， P=0.000； t=29.372， P=0.000）。miR-30-5p与SNHG6存在互补结合位点，miR-30-5p mimic与SNHG6-WT共转染组荧光素酶活性较miR-NC与SNHG6-WT共转染组显著降低（ t=31.596， P=0.000）。各组MCF-7细胞的增殖、迁移与侵袭之间差异显著（ F=268.014， F=398.483， F=244.962），与si-SNHG6组比较，si-SNHG6+miR-30-5p inhibitor组的MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭能力显著增加（ P=0.000），与si-NC+miR-30-5p inhibitor组比较，si-SNHG6+miR-30-5p inhibitor组的MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭能力显著下降（ P=0.000）。miR-30-5p与FKBP3的3’UTR存在互补结合位点，miR-30-5p mimic与FKBP3-WT共转染组荧光素酶活性较miR-NC与FKBP3-WT共转染组显著降低（ t=28.557， P=0.000）。转染后各组MCF-7细胞间FKBP3蛋白表达差异显著（ F=102.523），与miR-NC组比较，miR-30-5p mimic组FKBP3的蛋白表达显著降低，而miR-30-5p inhibitor组FKBP3蛋白表达则显著升高（ P=0.000）。各组MCF-7细胞间的增殖、迁移与侵袭差异均显著（ F=177.036， F=285.530， F=217.992），与miR-30-5p inhibitor组和miR-30-5p inhibitor+sh-NC组比较，miR-30-5p inhibitor+sh-FKBP3组的MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭能力显著下降（ P=0.000）。 结论:抑制miR-30-5p表达可逆转下调SNHG6对MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。

目的:利用生物信息学方法分析糖皮质激素对晶状体上皮细胞(LECs)生物学功能的影响，并预测相关的微小RNA(miRNA)。方法:下载GSE3040数据集，设置1 μmol/L地塞米松处理的人LECs细胞株HLE-B3细胞为实验组，1 μmol/L二甲基亚砜(DMSO)处理的HLE-B3细胞为对照组，利用GEO2R工具分析2个组间的差异表达基因。利用Metascape网站进行差异基因功能富集分析，通过EdU细胞增生实验检测2个组间细胞增生差异。通过STRING网站和cytoscape软件构建蛋白互作网络图，cytohubba app计算出hub基因，采用实时荧光定量PCR法检测2个组间hub基因的表达差异。利用mirCode数据库预测与hub基因相关的miRNA。结果:实验组与对照组间分析出341个差异基因，其中上调基因为300个，下调基因为41个。下调基因中差异最显著的5个基因是 SLC12A1、 MED13L、 ALDH5A1、 SLC15A3和 WWC1基因；上调基因中差异最显著的5个基因是 SCNN1A、 ANKRD36、 FKBP5、 PYY和 ADH1B基因。列出了富集量排名前20的生物学功能关键词，结果显示富集量最大的是对HLE-B3细胞增生的负向调节。实验组细胞增生率为(8.09±0.20)%，低于对照组的(39.63±0.80)%，差异有统计学意义( t＝38.43， P<0.01)。前10位hub基因分别是 SST、 CXCL8、 GRM1、 GNRH1、 CXCL5、 PPBP、 CX3CR1、 PYY、 EDNRA和 GRK5，实时荧光定量PCR结果显示2个组间SST、CXCL8、GRM1、PYY、EDNRA和GRK5 mRNA相对表达量比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与hub基因相关性强的前6位miRNA分别是miR-15abc、miR-214、miR-23abc、miR-129-5p、miR-132和miR-24。 结论:1 μmol/L地塞米松即可对HLE-B3细胞的增生产生负性调控作用。 SST、 CXCL8、 GRM1、 PYY、 EDNRA和 GRK5基因可能是糖皮质激素的作用靶点，miR-15abc、miR-214、miR-23abc、miR-129-5p、miR-132和miR-24最可能与hub基因相关。

Background::Long non-coding RNAs (lncRNAs) play key roles in human cancers. In our previous study, we demonstrated that lncRNA FKBP prolyl isomerase 9 pseudogene 1 (FKBP9P1) was highly expressed in head and neck squamous cell cancer (HNSCC) tissues. However, its functional significance remains poorly understood. In the present study, we identify the role and potential molecular biologic mechanisms of FKBP9P1 in HNSCC.Methods::Quantitative real-time polymerase chain reaction was used to detect the expression of FKBP9P1 in HNSCC tissues, matched adjacent normal tissues, human HNSCC cells (FaDu, Cal-27, SCC4, and SCC9), and human immortalized keratinocytes cell HaCaT (normal control). Cal-27 and SCC9 cells were transfected with sh-FKBP9P1-1, sh-FKBP9P1-2, and normal control (sh-NC) lentivirus. Cell counting kit-8 assay, colony formation assay, wound healing assay, and trans-well assay were used to explore the biologic function of FKBP9P1 in HNSCC cells. Furthermore, western blotting was used to determine the mechanism of FKBP9P1 in HNSCC progression. Chi-squared test was performed to assess the clinical significance among FKBP9P1 high-expression and low-expression groups. Survival analyses were performed using the Kaplan-Meier method and assessed using the log-rank test. The comparison between two groups was analyzed by Student t test, and comparisons among multiple samples were performed by one-way analysis of variance and a Bonferroni post hoc test. Results::FKBP9P1 expression was significantly up-regulated in HNSCC tissues (tumor vs. normal, 1.914 vs. 0.957, t = 7.746, P < 0.001) and cell lines ( P < 0.01 in all HNSCC cell lines). Besides, the median FKBP9P1 expression of HNSCC tissues (1.677) was considered as the threshold. High FKBP9P1 level was correlated with advanced T stage ( P = 0.022), advanced N stage ( P = 0.036), advanced clinical stage ( P = 0.018), and poor prognosis of HNSCC patients (overall survival, P = 0.002 and disease-free survival, P < 0.001). Knockdown of FKBP9P1 led to marked repression in proliferation, migration, and invasion of HNSCC cells in vitro ( P all < 0.01). Mechanistically, silencing FKBP9P1 was observed to restrain the PI3K/AKT signaling pathway. Conclusions::Silencing lncRNA FKBP9P1 represses HNSCC progression and inhibits PI3K/AKT (phosphatidylinositol 3 kinase/AKT Serine/Threonine Kinase) signaling in vitro. Therefore, FKBP9P1 could be a potential new target for the diagnosis and treatment of HNSCC patients.

目的 基于高通量测序(next generation sequencing,NGS)技术分析高血压大鼠伴或不伴牙周炎状态下牙龈组织中的差异mRNA,旨在为高血压伴牙周炎的防治提供实验基础.方法 获得动物实验伦理委员会批准,通过给予含8％(w/w)NaCl的高盐饲料建立高血压大鼠模型,使用3-0的无菌丝线结扎大鼠下颌第一磨牙建立牙周炎大鼠模型,分为正常对照组(N组)、高血压组(H组)和高血压伴牙周炎组(PH组),测量血压、心率、牙槽骨吸收量和牙槽骨中破骨细胞数量;取3组牙龈组织进行NGS,分析组间差异基因表达;H组和PH组间所有差异基因行基因功能(gene ontology,GO)富集分析,行京都基因与基因百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析,行蛋白相互作用网络(protein-protein interaction,PPI)筛选关键基因;免疫组织化学验证关键通路中的关键基因在各组的表达,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent as-say,ELISA)分析关键基因在各组全身循环中的表达.结果 实验终点(第11周)时,H组和PH组的血压均高于N组(P<0.001),但PH组的血压与H组比较无统计学意义,3组心率无统计学差异.Micro-CT显示PH组下颌第一磨牙的釉牙骨质界(cemento-enamel junction,CEJ)到牙槽骨嵴顶(alveolar bone crest,ABC)距离较N组和H组增加,牙槽骨中破骨细胞数量多于N组和H组(均P<0.016 7).3组的共同差异基因为0个,H组和PH组牙龈组织共 235 个差异基因,相较于H组,在PH组有P-选择素(P-selectin,SELP)、角蛋白 16(keratin 16,KRT16)和S100钙结合蛋白A9(S100 calcium binding protein A9,S100A9)等137个上调基因,以及FK506结合蛋白 5(FK506 binding protein 5,FKBP5)、介体复合体亚基 22(mediator complex subunit 22,MED22)和含锌指和BTB域16(zinc finger and BTB domain containing 16,ZBTB16)等98个下调基因.H组和PH组差异基因的GO分析结果提示,主要富集的生物学过程(biological processes,BP)为白细胞迁移,主要的细胞成分(cellular compo-nent,CC)为胶原三聚体复合物,主要的分子功能(molecular functions,MF)为细胞外基质结构的构建;H组和PH组差异基因的KEGG信号通路主要富集于细胞因子之间受体相互作用、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)信号通路中.通过PPI分析筛选出4个作用于高血压状态下牙周炎的关键基因,包括白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、基质金属蛋白酶9(matrix metallopro-teinase-9,MMP-9)、Ⅰ型胶原α1(collagen type Ⅰ alpha 1,COL1α1)、趋化因子配体 1(chemokine ligand 1,CX-CL1).与N组和H组比较,IL-1β和TNF-α在PH组牙龈组织及全身血清中的表达均上调(P<0.016 7).结论 高血压伴牙周炎或不伴牙周炎时的差异mRNA为IL-1β和MMP-9以及差异信号通路为IL-17和TNF-α信号通路,为今后进一步研究高血压伴牙周炎的分子调控机制提供了实验基础.

目的:探讨重复性离心运动对大鼠骨骼肌线粒体结构、功能及自噬的影响,分析FK506结合蛋白8(FKBP8)介导的线粒体自噬在运动致骨骼肌线粒体损伤中的作用.方法:32只成年雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为2周安静对照组(2C组,n=8)、4周安静对照组(4C组,n=8)、2周运动组(2E组,n=8)和4周运动组(4E组,n=8).2E组和4E组大鼠分别运动2周和4周,均采取持续性下坡跑,跑台坡度为-16°,速度为16 m/min,每天运动90 min,每周5天.在末次离心运动训练结束后休息24 h,对所有大鼠施加一次性力竭运动,分别在力竭运动之前及之后通过尾静脉测定其血乳酸值,并记录完成力竭运动的距离.采用透射电子显微镜观察比目鱼肌线粒体超微结构的变化;应用Western blot方法检测大鼠比目鱼肌线粒体琥珀酸脱氢酶亚基B(SDHB)、细胞色素C氧化酶亚基1(MTCO1)、FKBP8和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的蛋白表达;使用免疫荧光双标技术检测比目鱼肌FKBP8与LC3、LC3与线粒体膜蛋白细胞色素C氧化酶亚基COXⅣ(COXⅣ)、COXⅣ与溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)共定位的量.结果:(1)2E组大鼠完成一次力竭运动的距离和运动之前、之后血乳酸值均明显高于2C组与4E组(P<0.05或P<0.01),4E组力竭运动距离亦显著高于4C组(P<0.01),但4E组大鼠力竭运动之前、之后血乳酸值与4C组相比差异不具有显著性(P>0.05).(2)2E组与4E组大鼠比目鱼肌线粒体均出现明显肿胀、肌膜下积聚等超微结构异常变化,有自噬体和自噬溶酶体形成,同时线粒体数量明显减少(P<0.05),且4E组比目鱼肌线粒体损伤程度较2E组更为严重.(3)2E组与4E组大鼠比目鱼肌线粒体SDHB和MTCO1蛋白表达均明显低于同期2C组与4C组,且4E组显著低于2E组(P<0.05或P<0.01).(4)2E组与4E组大鼠比目鱼肌线粒体FKBP8和LC3蛋白表达,以及FKBP8与LC3、LC3与COXⅣ、COXⅣ与LAMP2共定位的量均明显高于同期2C组与4C组,且4E组显著高于2E组(P<0.05或P<0.01).结论:重复性离心运动后骨骼肌线粒体结构、数量和功能受损,同时FKBP8信号激活介导线粒体自噬发生,但仍可能不足以降解清除受损的线粒体,从而导致大鼠骨骼肌损伤及其运动能力先升高后下降.

目的 通过对GEO数据库中糖尿病心肌病(DCM)的基因芯片进行分析,筛选出DCM的关键基因并探索潜在的靶向药物.方法 从GEO数据库中下载基因表达数据集GSE161052和GSE161931.选取基因集进行差异基因分析,构建加权基因共表达网络.使用String软件进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析.使用Cibersort工具评估免疫细胞在样本中的浸润比例.使用DGIdb数据库搜索靶向生物标志物的潜在药物.结果 FKBP5、CYP2B6和RET是DCM的关键基因.NTN1与SLIT3、CYP1B1与CYP2B2具有较强的相互作用.RET与NK细胞呈正相关(P＜0.05);FKBP5与CD8+T细胞、T细胞共抑制细胞、Th1呈负相关(P＜0.05);CYP2B6与B细胞、Ⅱ型INF呈负相关(P＜0.05).蒿甲醚、氯氮平和AST-487的活性成分分别与CYP2B6、FKBP5和RET基因靶点结合时显示出最强的结合活性.结论 FKBP5、CYP2B6和RET通过不同分子途径在DCM的发生发展中起着关键作用.蒿甲醚、氯氮平和AST-487可能是治疗DCM的潜在靶向药物.

目的 利用蛋白质组学方法,对比经姜黄素处理和未经姜黄素处理的人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR之间差异表达的蛋白,分析与姜黄素逆转结肠癌耐药相关的蛋白.方法 取结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR,分为观察组和对照组,观察组加入终浓度为25μmol/L的姜黄素作用于人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR 24 h,对照组加入等体积生理盐水.以固相pH梯度等电聚焦为第一向,垂直平板十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向(2-DE),分离两组细胞总蛋白;通过凝胶银染显色,扫描仪GS-800采集凝胶图像,图像分析软件PDQuest8.0分析电泳图谱,寻找有意义的差异蛋白点,运用MALDI-TOF-MS系统对选取的蛋白点筛选出差异蛋白并进行质谱鉴定.结果 获得了背景清晰、分辨率高、重复性好的HCT-8/VCR细胞2-DE图谱.鉴定出可能与结肠癌多药耐药密切相关的10种蛋白,其中在对照组高表达的有7种,分别是谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)、重组人FK506结合蛋白4(FKBP4)、X线修复交叉互补基因5(XRCC5)、肿瘤蛋白翻译调节因子1(TPT1)、热休克蛋白8(HSPA8)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、前列腺特异性膜抗原剪接变体(PSMA5);在观察组中高表达的有3种,分别是肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIB)、鸟氨酸转氨酶(OAT)、核内不均一核糖核蛋白H1(HNRNPH1).结论 姜黄素干预HCT-8/VCR后出现10种差异性表达的蛋白,蛋白功能涉及信号传导、肿瘤细胞的分裂、多药耐药以及抗氧化、凋亡和糖酵解等,可能与姜黄素逆转HCT-8/VCR细胞对化疗药物的耐药性有关.

Mechanistic target of rapamycin (mTOR) complex 2 (mTORC2) plays an essential role in regulating cell proliferation through phosphorylating AGC protein kinase family members, including AKT, PKC and SGK1. The functional core complex consists of mTOR, mLST8, and two mTORC2-specific components, Rictor and mSinl. Here we investigated the intermolecular interactions within mTORC2 complex and determined its cryo-electron microscopy structure at 4.9 A resolution. The structure reveals a hollow rhombohedral fold with a 2-fold symmetry. The dimerized mTOR serves as a scaffold for the complex assembly. The N-terminal half of Rictor is composed of helical repeat clusters and binds to mTOR through multiple contacts. mSinl is located close to the FRB domain and catalytic cavity of mTOR. Rictor and mSinl together generate steric hindrance to inhibit binding of FKBP12-rapamycin to mTOR, revealing the mechanism for rapamycin insensitivity of mTORC2. The mTOR dimer in mTORC2 shows more compact conformation than that of mTORC1 (rapamycin sensitive), which might result from the interaction between mTOR and Rictor-mSinl. Structural comparison shows that binding of Rictor and Raptor (mTORC1-specific component) to mTOR is mutually exclusive. Our study provides a basis for understanding the assembly of mTORC2 and a framework to further characterize the regulatory mechanism of mTORC2 pathway.

目的 明确抑郁大鼠海马及前额叶皮质细胞因子和糖皮质激素系统的变化,探讨丹参多酚酸的干预作用及其机制.方法 38只雄性大鼠随机分为空白对照组(n=8)、应激对照组(n=7)、应激氟西汀组(n=8)、应激丹酚酸组(n=7)和应激联合组(n=8)等5组.除空白对照组外,其余4组采用慢性温和应激方法造模,持续6周,第4周起按照分组进行药物治疗,持续3周.第6周末时取大鼠前额叶皮质和海马,采用多因子检测方法检测细胞因子白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素2(interleukin-2,IL-2)、干扰素 γ(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及皮质酮水平,采用RT-PCR和western blot方法检测糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)基因核受体亚家族3C组成员1(nuclear receptor subfamily 3,group C,member 1,Nr3c1)和FK506结合蛋白(FK506 binding protein,Fkbp5)mRNA及其蛋白表达水平.结果 应激对照组前额叶皮质IL-1β 和TNF-α、海马IFN-γ 和TNF-α 及前额叶皮质和海马皮质酮水平高于空白对照组、应激氟西汀组、应激丹酚酸组和应激联合组(P<0.05).所有大鼠前额叶皮质IL-1β 与皮质酮水平呈正相关(r=0.34,P=0.04),海马TNF-α 与皮质酮水平呈正相关(r=0.39,P=0.02).应激对照组前额叶皮质Fkbp5 mRNA表达量较其他4组均升高(P<0.01),海马Fkbp5 mRNA、前额叶皮质和海马FKBP5蛋白、前额叶皮质和海马Nr3c1 mRNA及GR蛋白表达水平的组间差异均无统计学意义(P>0.05).结论 慢性应激大鼠前额叶皮质和海马促炎细胞因子和皮质酮水平、前额叶皮质Nr3c1和Fkbp5 mRNA表达水平增加,细胞因子与皮质酮水平呈正相关.丹参多酚酸和抗抑郁药物氟西汀可逆转这一变化.