目的:观察叉头框K1(FOXK1)-卷曲螺旋结构域蛋白43(CDC43)轴对大肠癌细胞迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:选取2017年9月到2019年9月南阳医学高等专科学校第一附属医院收治的103例大肠癌和对应的癌旁组织作为研究对象，采用免疫组织化学分析FOXK1蛋白表达水平；采用规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶9系统(CRISPR-Cas9)技术在SW480细胞中建立FOXK1敲除细胞系(FOXK1 KO组)和对照细胞系(对照组)，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测两组细胞增殖；采用Tanswell分析两组细胞迁移；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测两组细胞EMT。组间比较采用 t检验。 结果:与癌旁组织FOCK1表达水平(40.32±6.90)比较，大肠癌组织FOXK1蛋白表达水平显著增高(159.21±13.85)，差异有统计学意义( t＝4.918， P<0.05)。与对照组细胞FOXK1蛋白表达水平(1.09±0.21)比较，FOXK1 KO组细胞FOXK1蛋白表达水平显著下降，差异有统计学意义( t＝5.012， P<0.05)。与对照组细胞吸光度值(1.94±0.28)比较，FOXK1 KO组细胞吸光度值显著下调(1.07±0.19)，差异有统计学意义( t＝3.162， P<0.05)。Transwell结果显示，与对照组细胞迁移数量[(95.28±10.20)个]比较，FOXK1 KO组细胞迁移数量显著下降[(48.39±8.21)个]，差异有统计学意义( t＝3.091， P<0.05)。与对照组细胞上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平(0.26±0.08)比较，FOXK1 KO组细胞E-cadherin表达水平显著增高(1.05±0.11)，差异有统计学意义( t＝3.001， P<0.05)。与对照组细胞间质细胞标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)(0.78±0.13)和波形蛋白(Vimentin)(1.15±0.19)表达水平比较，FOXK1 KO组细胞N-cadherin(0.31±0.11)和Vimentin表达水平显著下调(0.39±0.14)，差异有统计学意义( t＝2.891、2.318， P<0.05)。与对照组细胞CCDC43表达水平(1.20±0.22)比较，FOXK1 KO组细胞CCDC43蛋白表达水平显著下调(0.57±0.18)，差异有统计学意义( t＝2.581， P<0.05)。 结论:FOXK1在大肠癌中高表达，通过调控CCDC43蛋白水平调节大肠癌细胞增殖、迁移和EMT。

目的:探讨miR-195调控FOXK1基因及PI3K/Akt通路对胃癌细胞增殖侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:采用公共数据库样本对胃腺癌中miR-195的表达差异和预后意义进行分析。研究分为MGC803和AGS两种细胞系中过表达miR-195-5p实验组和cel-miR-67-3p mimic和cel-miR-239b-5p mimic两组阴性对照组。通过阿尔玛蓝、细胞划痕和Transwell实验检测细胞增殖、侵袭和迁移能力的改变。通过starbase v3.0对miR-195潜在的靶基因及结合位点进行预测。采用Western blot检测过表达miR-195-5p后靶基因FOXK1和PI3K/Akt通路磷酸化位点的表达水平，并采用双荧光素酶报告验证miR-195-5p和FOXK1的关系。统计分析采用IBM SPSS 22软件和R 4.0.3软件。结果:miR-195在胃腺癌肿瘤标本中的表达水平相比于癌旁正常组织的表达显著降低（ P<0.001），并与患者生存显著相关（HR: 1.853, P=0.011）。多种表型实验证明miR-195表达水平的上调可明显抑制胃腺癌细胞的增殖和侵袭能力（MGC803侵袭： P<0.001，MGC803迁移： P<0.001；AGS侵袭： P<0.001，AGS迁移： P<0.001）（划痕：MGC803迁移： P<0.010，AGS迁移： P<0.010）。进一步研究证实FOXK1基因可能受到miR-195的调控，是miR-195的潜在靶点之一。而miR-195在调控FOXK1的同时能明显降低PI3K/Akt信号通路的激活程度，过表达miR-195之后，PI3K/Akt通路中的磷酸化Akt（S473位点）表达明显下降。 结论:本研究说明miR-195调控FOXK1抑制PI3K/Akt通路，从而抑制胃癌细胞增殖侵袭能力，进一步说明miR-195在胃癌的诊断和治疗中潜在的重要作用，对胃癌发生发展的分子机制及新靶点的发现具有重要的临床意义。

目的:探讨叉头盒K1（forkhead box K1，FOXK1）在急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）中的作用及机制，以期为AKI的防治提供新的思路和靶点。方法:构建3种AKI模型：按随机数字表法将30只雄性8～10周龄22~24 g 无特定病原体野生型C57BL/6小鼠随机分为生理盐水组（0.9%氯化钠水溶液0.1 ml/10 g，腹腔注射）、脂多糖组（脂多糖溶液10 mg/kg，腹腔注射）、顺铂组（顺铂溶液20 mg/kg，腹腔注射）、缺血再灌注（ischemia reperfusion，IR）组及假手术组，每组6只，各组小鼠均于造模24 h后处死取材。肾功能情况通过检测血肌酐、血尿素氮水平；HE染色法观察各组肾组织病理学改变；Western印迹法检测肾组织FOXK1、肾损伤分子1（kidney injury molecule 1，KIM-1）以及自噬标志物p62、Beclin1和LC3蛋白表达水平，实时荧光定量PCR法检测 Foxk1 mRNA表达水平。予以人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）缺氧24 h、复氧6 h构建缺氧复氧（hypoxia reoxygenation，HR）诱导AKI体外模型，检测HK-2细胞上述指标表达水平。同时，在体内外构建 Foxk1基因缺失的肾小管上皮细胞小鼠或HK-2细胞，并诱导建立AKI模型，观察上述各指标表达变化。 结果:与生理盐水组相比，脂多糖组及顺铂组肾组织血肌酐、血尿素氮均较高，KIM-1蛋白表达较高（均 P<0.05），FOXK1蛋白和mRNA表达无明显改变（均 P>0.05）；与假手术组相比，IR组肾组织血肌酐、血尿素氮均较高，KIM-1蛋白表达较高，FOXK1蛋白和mRNA表达均较低（均 P<0.05）。与对照组比较，体外HR诱导的AKI细胞模型中FOXK1蛋白和mRNA表达均较低（均 P<0.05）。体内实验中，与假手术组相比，IR组肾小管损伤较重，血肌酐、血尿素氮均较高，p62蛋白表达较低，KIM-1、Beclin1和LC3蛋白表达均较高（均 P<0.05），且与 Foxk1 flox/flox IR组相比， Foxk1 cKO IR组肾小管损伤明显较轻，血肌酐、血尿素氮均较低，KIM-1、p62蛋白表达均较低，Beclin1和LC3蛋白表达均较高（均 P<0.05）。体外实验中，与shCtrl HR组比较，shFoxk1 HR组KIM-1、p62蛋白表达均较低，Beclin1、LC3蛋白均较高（均 P<0.05）。 结论:FOXK1在缺血性AKI模型中表达降低。 Foxk1基因缺失通过介导自噬激活，减轻肾小管上皮细胞损伤，保护缺血性AKI。

Rheumatoid arthritis(RA)is an autoimmune disease.Early studies hold an opinion that gut microbiota is environmentally acquired and associated with RA susceptibility.However,accumulating evidence demonstrates that genetics also shape the gut microbiota.It is known that some strains of inbred laboratory mice are highly susceptible to collagen-induced arthritis(CIA),while the others are resistant to CIA.Here,we show that transplantation of fecal microbiota of CIA-resistant C57BL/6J mice to CIA-susceptible DBA/1J mice confer CIA resistance in DBA/1J mice.C57BL/6J mice and healthy human individuals have enriched B.fragilis than DBA/1J mice and RA patients.Transplantation of B.fragilis prevents CIA in DBA/1J mice.We identify that B.fragilis mainly produces propionate and C57BL/6J mice and healthy human individuals have higher level of propionate.Fibroblast-like synoviocytes(FLSs)in RA are activated to undergo tumor-like transformation.Propionate disrupts HDAC3-FOXK1 interaction to increase acetylation of FOXK1,resulting in reduced FOXK1 stability,blocked interferon signaling and deactivation of RA-FLSs.We treat CIA mice with propionate and show that propionate attenuates CIA.Moreover,a combination of propionate with anti-TNF etanercept synergistically relieves CIA.These results suggest that B.fragilis or propionate could be an alternative or complementary approach to the current therapies.

目的:探讨circ_DCAF6对结直肠癌顺铂(DDP)耐药细胞增殖、迁移和凋亡的影响及可能机制.方法:体外培养SW480及DDP耐药细胞SW480/DDP,RT-qPCR法检测细胞中circ_DCAF6和miR-485-3p表达,蛋白质印迹法检测FOXK1蛋白表达.分别转染si-NC、si-circ_DCAF6、miR-NC、miR-485-3p 及 si-circ_DCAF6 与 anti-miR-485-3p 至 SW480/DDP 细胞,CCK-8 法检测不同浓度(0、0.156、0.625、2.5、10、40、160 μg/mL)DDP作用转染后的细胞24 h的存活率,并计算半数抑制浓度(IC50值);检测细胞迁移、凋亡并验证circ_DCAF6、miR-485-3p和FOXK1调控关系.结果:与SW480细胞相比,SW480/DDP细胞中circ_DCAF6和FOXK1蛋白表达升高,miR-485-3p表达降低(P＜0.05).沉默circ_DCAF6或过表达miR-485-3p可抑制SW480/DDP细胞增殖、迁移和FOXK1蛋白表达,升高SW480/DDP细胞对DDP的敏感性,并促进细胞凋亡(P＜0.05);敲低miR-485-3p可减弱沉默circ_DCAF6对SW480/DDP细胞恶性表型的影响.circ_DCAF6可靶向结合miR-485-3p;FOXK1是miR-485-3p的靶基因.结论:沉默circ_DCAF6可抑制SW480/DDP细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与靶向调控miR-485-3p/FOXK1轴有关.

目的 应用ATIRE建立预后模型预测LUAD患者的总生存期(OS),并根据ATIRE风险评分和临床病理特征构建预测LUAD患者OS的列线图.方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载LUAD患者的RNA编辑数据、转录组数据及相应的临床资料,探讨与生存相关的ATIRE.患者随机分为建模组(n=287)与验证组(n=192),通过单因素COX风险回归、套索算法(Lasso)回归以及多元逐步COX风险回归分析,识别与生存相关的ATIRE位点并建立ATIRE风险评分.构建列线图预测LUAD患者的OS.分析RNA编辑与基因表达的相关性以及ATIRE对转录组表达的影响.结果 确定了4个位点作为最优预后位点,ADAM19|chr5:156904952、CWF19L1|chr10:101992267、FOXK1|chr7:4809281、CPT1A|chr11:68523468.建立风险评分,高风险组的OS在建模组、验证组和所有患者组均明显降低.列线图在预测LUAD的OS方面表现良好.结论 基于AITRE模型可作为预测LUAD生存率的新工具.

目的:探讨大黄素通过miR-96-5p靶向叉头蛋白K2(FOXK2)减轻狼疮性肾炎肾小球系膜细胞(MCs)损伤.方法:检测MRL/faslpr小鼠(狼疮性肾炎肾组)和MRL/MPJ小鼠(对照组)24 h尿蛋白以及血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)含量.MCs分离纯化后分为:MCs组(未做任何处理的MCs);L-EMO组(10 μmol/L 大黄素处理 MCs)、M-EMO组(25 μmol/L大黄素处理 MCs)、H-EMO组(50 μmol/L 大黄素处理 MCs)、H-EMO+miR-96-5p-NC 组(50μmol/L 大黄素处理 MCs后转染 miR-96-5p-NC)、H-EMO+miR-96-5p-minic 组(50 μmol/L 大黄素处理MCs后转染miR-96-5p-minic).双荧光素酶报告基因实验验证miR-96-5p和FOXK2的靶向关系;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-96-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测FOXK2以及凋亡相关蛋白表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测MCs炎性因子水平;细胞计数试剂盒 8(CCK-8)测定 MCs 活力;Annexin-V FITC/PI 双染法检测MCs凋亡情况.结果:与对照组相比,狼疮性肾炎组24 h尿蛋白含量、血清BUN和Scr水平显著升高(P＜0.05);与MCs组相比,L-EMO组、M-EMO组、H-EMO组miR-96-5p的表达量、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、A450值、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白水平依次显著下降(P＜0.05),FOXK2水平、细胞凋亡率、Bcl-2相关的X基因(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)蛋白水平依次显著升高(P＜0.05),大黄素作用效果呈现剂量依赖性;与H-EMO 组、H-EMO+miR-96-5p-NC组相比,H-EMO+miR-96-5p-minic组显著升高miR-96-5p的表达量、炎性因子水平、A450值以及Bcl-2蛋白水平(P＜0.05),显著降低FOXK2水平以及细胞凋亡率(P＜0.05).结论:大黄素通过下调miR-96-5p进而上调FOXK2,从而减轻狼疮性肾炎MCs损伤.

目的 探讨叉头框转录因子1(FOXK1)对肝癌高转移细胞Huh7侵袭和迁移能力的影响.方法 采用实时定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测40例肝癌组织及其癌旁正常组织FOXK1 mRNA的表达,qRT-PCR和Western blot检测正常肝细胞HL7702、肝癌细胞BEL7402和肝癌高转移细胞Huh7中FOXK1 mRNA和蛋白的表达.小RNA干扰技术下调FOXK1表达后,qRT-PCR和Western blot检测肝癌高转移细胞Huh7 FOXK1 mRNA和蛋白的表达,Transwell实验检测其侵袭和迁移能力.结果 qRT-PCR检测结果显示,肝癌组织中FOXK1 mRNA的表达高于癌旁正常组织(2.87±-0.21 vs 1.35±0.11,P=0.004);qRT-PCR和Western blot检测结果显示,相比正常肝细胞HL7702,肝癌细胞BEL7402和肝癌高转移细胞Huh7中FOXK1 mRNA和蛋白表达升高(P＜0.001).下调FOXK1表达后,肝癌高转移细胞Huh7中FOXK1 mRNA和蛋白表达显著下调(P＜0.01),侵袭和迁移细胞数目明显减少(P＜0.01).结论 下调FOXK1表达能抑制肝癌高转移细胞Huh7侵袭和迁移能力.

目的 探讨叉头框蛋白K1(FOXK1)在胶质瘤组织的表达及临床意义.方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测FOXK1在胶质瘤mRNA和蛋白表达水平;乘积极限法(Kaplan-Meier)分析FOXK1与患者临床病理参数关系;RNA干扰胶质母细胞瘤FOXK1的表达,Transwell迁移实验测定LN18细胞迁移能力,细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞计数测定T98G细胞增殖.结果 RT-qPCR检测和Westem blot结果表明FOXK1在胶质母细胞瘤(GBM)组织中mRNA和蛋白高表达.FOXK1的表达与胶质瘤患者性别无明显相关(P＞0.05)、与年龄无明显相关(P＞0.05),而FOXK1表达与WHO分级明显相关(P＜0.01).Kaplan-Meier分析显示高表达FOXK1的患者预后较差(P＜0.05).Transwell迁移实验结果表明FOXK1促进癌细胞转移,CCK-8细胞计数结果表明FOXK1促进胶质瘤细胞增殖.结论 FOXK1在胶质瘤患者中高表达,与胶质瘤发生和发展、转移相关.

目的:检测乳腺癌组织中吞噬和运动蛋白3(engulfment and cell mobility 3,ELMO3)、叉头框转录因子1(forkhead box kl,FOXK1)的表达情况,并探讨两者在乳腺癌组织中表达的相关性及与乳腺癌患者临床病理参数、预后的关系.方法:收集2013年1月至2018年1月惠州市第三人民医院乳腺癌患者手术标本80例,应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫组织化学检测乳腺癌组织及癌旁组织中ELMO3与FOXK1的表达情况;并分析乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1表达的相关性,及其的表达与乳腺癌患者临床病理参数、预后的关系.结果:qRT-PCR检测ELMO3mRNA,FOXK1 mRNA在乳腺癌组织中表达分别为1.16±0.48,1.34±0.60,在癌旁组织中表达分别为0.81±0.36,0.95±0.49;乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1表达水平均高于癌旁组织(均P＜0.05),且乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1的表达呈正相关(r=0.423,P=0.037).免疫组织化学检测ELMO3与FOXK1在乳腺癌组织中阳性表达分别为58例(72.52％),62例(77.509％),在癌旁组织中阳性表达分别为28例(35.00％),29例(36.25％),乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1阳性表达率均高于癌旁组织(均P＜0.05).ELMO3与肿瘤TNM分期、淋巴结转移显著相关,FOXK1与肿瘤组织TNM分期、淋巴结转移和组织分级显著相关(均P＜0.05).Kaplan-Meier生存曲线分析显示乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1高表达患者生存期较短.结论:乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1呈高表达,并与肿瘤发生发展及预后有关.ELMO3与FOXK1在乳腺癌组织中表达呈正相关,可能协同参与了乳腺癌的发生发展.ELMO3与FOXK1具有作为乳腺癌新的标志物、治疗靶标及评估预后的潜在价值.