目的:探讨Ras蛋白激活类似物3（RASAL3）在肝内胆管癌（iCCA）中的表达并深入研究其促进iCCA进展的作用机制。方法:收集185例iCCA患者肿瘤与癌旁组织标本，应用免疫组化、RT-qPCR和Western blot法检测RASAL3的表达，并同时检测人胆管癌细胞株和人胆管上皮细胞中RASAL3和FXYD6的mRNA和蛋白表达情况，CCK-8法检测细胞增殖及Na +-K +-ATP酶活性。 结果:RASAL3在胆管癌组织和细胞株中高表达；生存分析结果显示RASAL3高表达与胆管癌的不良预后相关（ P<0.05）。敲降RASAL3抑制胆管癌细胞的增殖；沉默RASAL3降低FXYD6表达水平，抑制Na +-K +-ATP酶活性。 结论:iCCA中RASAL3表达水平显著上调，RASAL3可通过激活FXYD6，上调Na +-K +-ATP酶活性促进iCCA的发展。

目的 研制抗人转运调节因子(FXYD)6功能区单克隆抗体库,筛选分泌胞内、胞外区单克隆抗体的杂交瘤细胞株并对鉴定胞外区单克隆抗体生物学作用.方法 原核表达并纯化去除跨膜区域FXYD6功能区重组蛋白,FXYD6重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,多次筛选及克隆化,建立稳定分泌抗人FXYD6胞外区或胞内区的单克隆抗体杂交瘤.分别应用间接酶联免疫吸附法(ELISA)、Western blot和免疫组织化学法鉴定抗体特异性及亚型,细胞流式技术筛选可识别天然构象的胞外区单克隆抗体,用腹水诱导法对胞外区单抗进行制备、纯化并检测亲和常数,高表达FXYD6的HepG2细胞系检测胞外区单抗的功能.结果 成功获得分泌抗人FXYD6胞外区或胞内区单克隆抗体的杂交瘤细胞库,制备出具有功能阻断性的胞外区单抗.结论 制备的抗人FXYD6胞外区单抗可抑制HepG2细胞的增殖.

背景:脊髓损伤后常伴随肌肉萎缩的发生,但是它的基本机制仍然不是十分清楚.目的:旨在探讨脊髓损伤后肌肉萎缩的分子生物学机制.方法:分析基因表达数据库中的脊髓损伤后肌肉萎缩的基因谱GSE45550.基因表达谱GSE45550包括对照组(脊髓损伤前)、实验组1(脊髓损伤后3 d)、实验组2(脊髓损伤后8 d)、实验组3(脊髓损伤后14 d).组织为SD大鼠的比目鱼肌,每组6例.随后对4组样本数据进行差异基因分析、GO分析、通路分析.结果与结论:确定了2513个差异表达基因,其中Wnt16、Obfc1、Ufd1l、LOC100361067、Hhatl、Fxyd1、Psmc4、Tasp1、Mettl21c、Ufd1l差异表达最显著.GO分析显示差异基因的主要生物学过程为biological_process、G蛋白偶联受体信号通路、对药物的反应、DNA依赖性转录、DNA依赖性转录的正调节、氧化还原过程、泛素依赖性蛋白分解代谢过程、凋亡过程、RNA聚合酶转录的正调控及脂肪酸 β-氧化.信号通路如MAPK信号、细胞凋亡、柠檬酸循环(TCA循环)可能起到重要的作用.研究比较完整地揭示了脊髓损伤后肌肉萎缩基因谱的差异表达基因和所涉及的生物学过程和信号通路,其中Wnt16可能是脊髓损伤后肌肉萎缩中的关键基因,为未来的治疗进展提供分子靶点.

目的 探讨脾虚湿阻证大鼠离子转运功能变化及薏苡仁健脾利湿作用机制.方法 通过游泳致劳联合特制饲料方法构建脾虚湿阻证动物模型,将模型大鼠随机分为6组,除模型组外其余各组分别采用薏苡仁水煎液(6.25 g/kg)及不同组分(薏苡仁油287.5 mg/kg、薏苡仁多糖911.3 mg/kg、薏苡仁蛋白281.3 mg/kg、薏苡仁淀粉1798.1 mg/kg)每日灌胃1次进行干预,另取10只正常大鼠为对照组.干预14 d后,采集小肠标本,以Agilent公司全基因组表达谱芯片检测大鼠肠道全基因表达,筛选模型组和对照组离子转运功能(ion transport)差异基因后,对各组差异基因进行主成分分析和聚类分析,并对主成分分析的载荷和得分进行Bi分析.结果 模型大鼠与对照大鼠离子转运功能差异基因为38条;对差异基因主成分分析的载荷和得分进行Bi分析,其二维投影显示模型组与对照组最远,与样本聚类结果一致,而采用薏苡仁不同组分治疗后,各治疗组均处于模型组和对照组之间;从其差异基因的作用权重来看,各差异基因作用效果不同,位居前10的是Atox1、Slc5a4、Slc40a1、Slc5a1、Slc11a2、Cftr、Fxyd5、Cacna1i、Kcnj13、Atp5d,而这些差异基因在聚类分析中也多处于同一类.结论 模型大鼠肠上皮细胞存在明显离子转运功能家族基因改变,薏苡仁的不同组分、尤其是油组分和蛋白组分在离子转运功能上作用效果较强,溶质载体Slc家族是其发挥健脾利湿作用的主要靶点,Atox1和Cftr也在健脾利湿中发挥了重要作用.

目的 检测FXYD6蛋白在肝细胞癌组织及其癌旁组织中的表达,并分析其临床病理学意义.方法 回顾性收集沧州市中心医院2012年3月至2018年1月期间的根治性切除的肝细胞癌蜡块80例及其癌旁组织40例,采用免疫组织化学链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合法(SABC)检测FXYD6蛋白的表达情况,并分析FXYD6蛋白表达与肝细胞癌患者的临床病理学特征、术后早期复发及生存时间的关系.结果 FXYD6蛋白在肝细胞癌组织中的表达阳性率高于癌旁组织[77.5％(62/80)比40.0％(16/40),P＜0.001].FXYD6蛋白在肝细胞癌组织中的表达与性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤最大径、肿瘤数目、术前AFP水平和HBV或HCV感染均无关(P＞0.05),而与肿瘤包膜完整性、微血管侵犯和TNM分期均相关(P＜0.05).FXYD6蛋白表达阳性组的早期复发率高于阴性表达组[53.2％(33/62)比16.7％(3/18),P=0.006],然而多因素分析结果显示,FXYD6蛋白表达不是早期复发的独立危险因素(P=0.422).FXYD6蛋白表达阳性组的术后生存情况差于阴性表达组(P=0.043),然而多因素分析结果显示,FXYD6蛋白表达不是总体生存的独立危险因素(P=0.754).结论 FXYD6蛋白在肝细胞癌组织中高表达,可能参与肝细胞的癌变及其进展,可能是肝细胞癌患者的一个不良预后因素.

目的 观察FXYD离子转运调节因子6(FXYD6)过表达对肝细胞癌SMMC7721细胞5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗敏感性的影响.方法 将肝细胞癌SMMC7721细胞分为过表达组和对照组,分别转染pcDNA3.1/FXYD6和pcD-NA3.1/Vector真核质粒,培养48 h筛选SMMC7721抗性克隆.取两组转染后的抗性克隆细胞,分别加入终浓度为0、12.5、25、50、100μg/mL的5-Fu作用24、36、48 h,采用MTT法检测细胞增殖抑制率.取两组转染后的细胞,加入终浓度为25μg/L的5-Fu作用48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 随着5-Fu浓度增加和作用时间延长,两组细胞增殖抑制率均呈升高趋势.5-Fu浓度为12.5μg/mL时,两组作用24、36、48 h的细胞增殖抑制率比较均无明显差异(P均>0.05);5-Fu浓度为25、50、100μg/mL时,过表达组作用24、36、48 h的细胞增殖抑制率均明显低于对照组同时间点(P均<0.01).观察组细胞凋亡率为35.62％±3.98％,对照组为46.19％±6.60％,两组比较P<0.01.结论 FXYD6蛋白过表达可降低肝细胞癌SMMC7721细胞对5-Fu的化疗敏感性.

目的 筛选并分析孕中期羊水游离RNA(AfcfRNA)中的泌尿系统发育关键基因.方法 从GEO数据库获取胎儿AfcfRNA的芯片检测数据.对56例AfcfRNA的芯片检测结果进行基因共表达网络(WGCNA)分析,建立共表达网络模块.从Human Protein Atlas数据库中筛选在泌尿组织中表达量高于平均表达量10倍的基因为泌尿组织特异基因.以泌尿组织特异基因和共表达模块为基础,建立泌尿系统特异基因共表达模块.对泌尿组织特异共表达模块中的基因进行GO分析,阐述其生物学功能.利用STRING数据库进行基因编码蛋白的蛋白—蛋白相互作用网络分析,设定combine_score为150、degree为20,并删除表达量偏低(

目的 探讨SPH3127的降压效果和保护血管内皮的机制.方法 雄性SD大鼠80只分为假手术组、模型组、SPH3127高剂量组(20 mg/kg)、SPH3127低剂量组(10 mg/kg).测量收缩压(SBP),检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、炎症损伤情况.人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为对照组,AngⅡ(1μmol/mL)组,SPH3127(10 nmol/mL)组,检测增殖迁移能力,eNOS和FXYD1的mRNA表达水平.结果 SPH3127干预组血压降低,血管内膜完整性升高,IL-6、TNF-α表达降低、eNOS升高,高剂量组较明显(P<0.05);HUVECs的增殖迁移能力上升,FXYD1、eNOS mRNA表达水平升高(P<0.05).结论 SPH3127降低大鼠血压;通过抑制炎症,促进FXYD1表达,对血管内皮起到一定的保护作用.

目的 探讨含离子转运调控因子1的FXYD结构域(FXYD1)在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义.方法 应用GEPIA、TIMER和UALCAN数据库分析FXYD1在HCC中的表达水平,应用Kaplan-Meier Plotter数据库分析FXYD1 mRNA表达水平与HCC患者预后的关系,通过cBioPortal数据库分析FXYD1在HCC患者中的突变情况及与患者预后的关系,应用String数据库构建FXYD1的蛋白质相互作用网络,应用Metascape数据库进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果 FXYD1在大多数肿瘤(包括HCC)中低表达.FXYD1 mRNA高表达组HCC患者的中位总生存期(OS)和中位无病生存期(DFS)均长于FXYD1 mRNA低表达组患者.约6％的HCC患者发生FXYD1基因突变,FXYD1突变组患者的中位OS和中位DFS均短于FXYD1未突变组患者.应用String数据库共获得了10个与FXYD1相互作用的蛋白质,这些蛋白质主要富集在细胞钾离子稳态、钠钾交换ATP酶复合物、激酶结合和环磷酸腺苷(cAMP)信号通路等.FXYD1的表达水平与多种免疫细胞(B细胞、中性粒细胞和树突状细胞)的浸润呈负相关.结论 FXYD1在HCC中低表达,且与HCC患者的预后有关,有望成为HCC诊断和治疗的生物标志物.