糖尿病肾病(DKD)是终末期肾脏病的主要原因.沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白在糖尿病肾病的发生发展过程中发挥关键作用.中药干预DKD表现出独特优势.本文围绕SIRT1信号通路及主要分子调节机制,梳理中药调控SIRT1在足细胞、氧化应激和炎症反应中作用,发现中药单体及中药复方可通过靶向SIRT1调控PGC-1α信号通路、Nrf2/ARE信号通路、AMPK信号通路、NF-κB p65信号通路及PI3K/AKT/FoxO1信号通路,发挥抑制细胞凋亡、改善线粒体自噬、抑制炎症反应等药理作用,从而干预DKD,可为相关研究提供参考.

目的:探讨樱桃李多酚提取物(PCE)对胰岛素抵抗HepG2(IR-HepG2)细胞糖代谢的影响.方法:利用高糖高胰岛素诱导建立IR-HepG2细胞模型;设立对照组、胰岛素抵抗(IR)模型组、不同浓度的樱桃李多酚提取物处理组和二甲双胍组.分别以50、100、200、400 mg/L的PCE处理细胞24 h,检测其对细胞葡萄糖消耗的影响,同时利用MTT比色法评价细胞活力;采用real-time PCR和Western blot检测糖代谢相关因子mRNA及蛋白的表达.结果:樱桃李多酚提取物能够显著提高IR-HepG2细胞葡萄糖消耗,随其浓度的增加细胞活力呈先上升后下降的趋势;在mRNA及蛋白水平,除显著上调IR-HepG2细胞磷酸化AMP活化蛋白激酶(p-AMPK)蛋白表达外,糖原合成和糖异生途径中糖原合成激酶3β(GSK3β)、叉头蛋白O1(FoxO1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)及磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的表达均显著下调(P＜0.05).结论:樱桃李多酚提取物能够激活IR-HepG2细胞AMPK信号通路,进一步抑制糖异生、糖原合成途径,从而改善HepG2细胞的胰岛素抵抗状态.

目的 探讨丙泊酚(Propofol)对脑缺血再灌注(IR)大鼠神经元损伤的影响及其机制.方法 采用改良线栓法制备IR大鼠模型,将大鼠分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、Propofol组(50 mg/kg Propofol)、联合组[Propofol组基础上用沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂EX527 10 μg/只],对所有大鼠进行神经功能缺损评分,检测脑梗死体积,观察脑组织缺血半暗带病理变化、尼氏体变化、神经元凋亡及Caspase-3 蛋白阳性表达细胞数,检测大鼠脑组织缺血半暗带SIRT1、叉头转录因子 1(FOXO1)、过氧化物酶增殖激活受体γ协同激活因子 1α(PGC-1α)蛋白表达.结果 与Sham组比较,Model组大鼠神经功能损伤严重,脑组织缺血半暗带细胞排列紊乱,神经元数量减少,细胞核固缩,细胞间隙疏松,尼氏体数目减少,神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经元凋亡率、Caspase-3蛋白阳性表达细胞数目显著升高(均P＜0.05),SIRT1 蛋白表达水平显著降低,FOXO1 与PGC-1α表达水平显著升高(均P＜0.05);与Model组比较,Propofol组神经元损伤明显减轻,脑组织缺血半暗带细胞形态较为正常,尼氏体数目增加,神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经元凋亡率、Caspase-3 蛋白阳性表达细胞数目显著降低(均P＜0.05),SIRT1蛋白表达水平显著升高,FOXO1 与PGC-1α表达水平显著降低(均P＜0.05);与Propofol组比较,联合组正常形态细胞明显减少,细胞排列疏松,细胞核固缩深染,尼氏体数目减少,神经功能缺损评分及脑梗死体积、神经元凋亡率、Caspase-3 蛋白阳性表达细胞数目显著增加(均P＜0.05),SIRT1 蛋白表达水平显著降低,FOXO1、PGC-1α表达水平显著升高(P＜0.05).结论 Propofol可通过激活SIRT1 下调FOXO1、PGC-1α乙酰化水平,保护IR大鼠脑损伤及抑制神经元凋亡.

目的:探讨柴胡皂苷D对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及叉头框蛋白O1(FoxO1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)通路的影响.方法:以高脂饮食联合小剂量链脲佐霉素腹腔注射诱导建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、柴胡皂苷D低剂量、中剂量、高剂量(50、100、150 mg/kg)组、二甲双胍(24.2 mg/kg)组,每组12只,另取12只SD大鼠以基础饲料喂养,并腹腔注射等剂量生理盐水,设为对照组.大鼠经药物分组处理后,测定大鼠空腹胰岛素(FINS)水平、空腹血糖(FBG)水平,计算胰岛素抵抗指数(IRI)、胰岛素敏感指数(ISI);行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),计算血糖曲线下面积(AUC);检测大鼠肝糖原及肝脏脂肪合成情况;ELISA检测大鼠血清致炎因子水平;Western blot检测大鼠肝组织FoxO1/PGC-1α通路蛋白表达.结果:与对照组比较,模型组大鼠肝糖原显著减少,脂肪合成显著增多,FINS、FBG、IRI、AUC、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平、肝组织FoxO1/PGC-1α通路p-FoxO1/FoxO1、PGC-1α蛋白表达水平显著升高,ISI水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,柴胡皂苷D各剂量组与二甲双胍组大鼠肝糖原增多,脂肪合成减少,FINS、FBG、IRI、AUC、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平、肝组织FoxO1/PGC-1α通路p-FoxO1/FoxO1、PGC-1α蛋白表达水平降低,ISI升高,且柴胡皂苷D各剂量组间呈剂量依赖性(P<0.05);柴胡皂苷D高剂量组与二甲双胍组比较,大鼠各指标无明显差异(P>0.05).结论:柴胡皂苷D可能通过抑制FoxO1/PGC-1α信号通路激活从而降低血糖,抑制炎症,降低2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗.

目的 观察肌肉衰减综合征小鼠腓肠肌Sirt1和mTOR活性的变化.方法 将雄性C57BL/6J老年(26月龄)和中年(6月龄)小鼠各16只分别随机分为2组,每组8只(n=8):即中年对照(MC)组、中年后肢悬提(MS)组、老年对照(AC)组及老年后肢悬提(AS)组.老年小鼠后肢悬提( HLS) 2周以建立肌肉衰减综合征小鼠模型,分别用不同的试剂盒和蛋白免疫印迹测定Sirt1和mTOR信号传导通路相关因子及蛋白的表达.结果 1) NAD+含量和NAD+/NADH比率:AC组明显低于MC组(P＜0.01,P＜0.05),HLS组显著少于对照组( P＜0.01,P＜0.05). 2) Sirt1表达:AC组明显高于MC组(P＜0.05),HLS组显著高于对照组(P＜0.05). 3)Sirt1下游底物表达( PGC-1α、FOXO1和P53)、与衰老相关的NAMPT蛋白表达和Sirt1活性:AC组明显低于MC组(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.01),HLS组显著少于对照组(均P＜0.05). 4)磷酸化的mTOR、p70S6K和4E-BP1:AC组明显高于MC组( P＜0.05),HLS组显著少于对照组(P＜0.05).结论 Sirt1和mTOR参与了肌肉衰减综合征小鼠的发病.

目的:研究芪苈参萸益心方对大鼠充血性心力衰竭(Congestive heart failure,CHF)的保护作用及可能的作用机制.方法:实验大鼠在成功进行冠脉结扎手术后,随机分为假手术组、模型组、芪苈参萸益心方28.8g/kg、57.6g/kg组、地高辛0.09mg/kg组;给药10周后,进行血流动力学测定,取血进行ROS、T-$OC、SOD、GSH-Px、CAT和MDA含量分析;心脏经TTC染色、HE和Masson染色,计算心肌梗死面积、心室扩张程度和心肌组织形态学观察,实时定量PCR和Western blot检测Sirt1/FoxO1/Pgc-1α和Nrf2/抗氧化通路相关基因表达.结果:芪苈参萸益心方28.8g/kg和57.6g/kg可显著改善CHF大鼠心功能,降低血液中ROS含量和MDA水平,增加T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT酶的活性;减轻ROS所致心肌氧化应激损伤,降低心肌梗死面积、心室扩张程度和改善心脏组织形态学;上调心肌组织中Sirt1、胞核中Nrf2、Bcl-2蛋白表达和MnSOD、HO-1、NQO1、GCLC mRNA表达,下调Ac-FoxO1、Ac-Pgc-1α、Bax、cleaved-caspase-9、cleaved-caspas-3蛋白表达,升高Bcl-2/Bax比率.结论:芪苈参萸益心方对CHF具有较好的保护作用,激活Sirt1/FoxO1/Pgc-1α和Nrf2/抗氧化通路可能是其作用机制之一.

目的 探讨石参提取物对胰岛素抵抗(IR)的HepG2细胞糖代谢的改善作用及其可能的机制.方法 用CCK-8法检测棕榈酸及石参提取物对HepG2细胞活力的影响;建立稳定的胰岛素抵抗模型后,用试剂盒检测细胞上清中葡萄糖含量和细胞内己糖激酶及葡萄糖-6-磷酸酶活性;用RT-PCR法检测GLUT-2、PDK-1、PEPCK-1以及PGC-1α的转录量;用Western Blot法检测IRS-1、AKT、p-AKT、FOXO1、p-FOX01蛋白表达量.结果 石参提取物能显著减少IR的HepG2细胞上清中葡萄糖含量,并可在增强己糖激酶活性的同时抑制葡萄糖-6-磷酸酶活性,该作用可能与药物能显著增强Akt及Fox01的磷酸化,进而增强PBK通路作用有关.结论 石参提取物能有效改善IR的HepG2细胞的糖代谢,其机制可能与药物改善PI3K/Akt通路活性有关.

目的:研究分析涤痰止晕方通过沉默信息调节因子1(SIRT1)信号通路对缺血性眩晕大鼠脑组织的影响.方法:选SPF级健康雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组10只和造模组50只.造模组采用右颈总动脉和右锁骨下动脉结扎法建立缺血性眩晕模型,假手术组大鼠接受假手术.将造模成功的大鼠随机分为模型组、盐酸地芬尼多组及涤痰止晕方低、中、高浓度组,各10只.模型组、假手术组分别给予生理盐水5 mL/kg,每日1次,灌胃给药;盐酸地芬尼多组给予3 mg/mL盐酸地芬尼多溶液5 mL/kg,每日1次,灌胃给药;涤痰止晕方低、中、高浓度组分别给予生药浓度为0.2、0.4、0.8 g/mL的涤痰止晕方5 mL/kg,每日1次,灌胃给药.各组大鼠均给药1周.检测比较各组逃避电击潜伏期、脑组织能量代谢及氧化应激指标水平,以及脑组织SIRT1、过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、磷酸化叉头框蛋白O3α(p-FOXO3α)表达水平.结果:与模型组比较,各组大鼠逃避电击潜伏期较短,脑组织乳酸(Lac)、乳酸脱氢酶(LDH)水平较低,脑组织丙二醛(MDA)水平较低,且涤痰止晕方低浓度组>涤痰止晕方中浓度组>涤痰止晕方高浓度组和盐酸地芬尼多组,差异均有显著性(均P<0.05).与模型组比较,各组大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)水平较高,脑组织SIRT1、PGC-1α、p-FOXO3α表达水平较高,且涤痰止晕方低浓度组<涤痰止晕方中浓度组<涤痰止晕方高浓度组和盐酸地芬尼多组,差异有显著性(P<0.05).结论:涤痰止晕方能剂量依赖性的缩短缺血性眩晕大鼠逃避电击潜伏期,改善脑组织能量代谢,抑制氧化应激反应,其作用可能与上调SIRT1信号通路活性有关.

目的 通过观察玉米须多糖对糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢的作用,基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)蛋白信号通路探讨玉米须多糖抑制糖异生作用机制.方法 2型糖尿病肥胖大鼠(Zucker diabetic fatty rats,ZDF)12只,随机分成模型组、玉米须多糖组(500 mg/kg),每组6只,另设同周龄的ZL大鼠6只为正常组.治疗5周后,观察各组大鼠的空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、口服葡萄糖耐量实验(oral glucose tolerance,OGTT)、体质量(body weight,BW)、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;肝脏苏木-伊红染色(HE)及糖原过碘酸雪夫染色(PAS)观察肝脏形态及糖原分布情况,蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测PGC-1α、叉头转录因子(forehead box-containing protein of the O subfamily 1,FoxO1)及其磷酸化水平、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)、葡萄糖6磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase)的表达.结果 与模型组相比,玉米须多糖组BW、TG、TC有下降趋势,HDL-C有上升趋势,但无明显差异(P>0.05),但FBG、LDL-C表现出显著差异(P<0.05),OGTT实验提示给药组血糖显著降低(P<0.05),大鼠肝脏形态较规则,脂滴较少,糖原分布较多,PGC-1α、PEPCK、G6Pase蛋白表达量降低(P<0.05),FoxO1蛋白表达量有减少趋势(P>0.05),pFoxO1/FoxO1比值显著升高(P<0.05).结论 玉米须多糖可有效发挥降糖作用,减少肝细胞脂肪样变性,增加肝糖原含量,其作用机制可能为促进FoxO1蛋白的磷酸化,阻止FoxO1与PGC-1α 结合,减少PEPCK及G6Pase的表达,从而抑制大鼠的肝脏糖异生过程,进而降低血糖.

目的 探讨毛蕊异黄酮苷(CG)通过调控沉默信息调节因子1(SIRT1)信号通路对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)海马神经元细胞损伤的保护作用.方法 将海马神经元细胞在无糖培养基中缺氧8h后,在完全培养基中复氧6h建立OGD/R模型.将细胞分为4组:正常对照组、氧糖剥夺再灌注组(OGD/R组,模型组)、SIRT1特异性抑制剂组(EX527组)、EX527+毛蕊异黄酮苷组(EX527+CG组).细胞处理结束后,采用CCK-8法测定细胞存活率;分光光度法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量;荧光法检测细胞中活性氧(ROS)含量、细胞凋亡率;Western Blot及ELISA法检测SIRT1信号通路中相关蛋白的表达水平.结果 与OGD/R组比较,EX527组的细胞活力、SOD含量及SIRT1、叉头转录因子1(FOXO1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05),LDH及MDA含量、细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平明显升高(P＜0.05).与EX527组比较,EX527+CG组的细胞活力及FOXO1、Bcl-2和PGC-1α蛋白表达水平均有升高,SOD含量及SIRT1蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);MDA含量有降低,LDH含量、细胞凋亡率及Bax蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).结论 毛蕊异黄酮苷缓解海马神经元OGD/R损伤的机制与调控SIRT1信号通路有关.