目的:研究生长激素释放肽Ghrelin和Sirt1在肠缺血再灌注(IIR)损伤中的作用.方法:SPF级健康成年雄性C57BL/6J小鼠24只,采用随机数字表法分为4组:假手术组(S组,n=6)、肠缺血再灌注组(IIR组,n=6)、肠缺血再灌注+Ghrelin组(IIR+G组,n=6)、肠缺血再灌注+Ghrelin+Sirt1抑制剂EX527组(IIR+G+E组,n=6).采用夹闭肠系膜上动脉根部45 min,恢复血流2 h的方法制备小鼠IIR模型.再灌注结束后处死小鼠取小肠组织,HE染色观察组织病理学变化,透射电镜观察肠组织亚细胞结构,检测小肠组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平、ATP含量,Western Blot和qRT-PCR检测GHSR-1α、Sirt1及自噬关键分子的表达,免疫荧光检测Sirt1和LC3B的共表达情况.结果:与S组相比,IIR组Chiu's评分升高,线粒体明显肿胀且空泡化改变显著,嵴结构破坏严重,肠组织MDA生成增加,SOD活力及ATP含量降低,肠组织自噬体增多,Sqstm1 mRNA、p62蛋白表达下调,Becn1 mRNA、Beclin1蛋白表达上调,Map1lc3b mRNA、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达比值升高,Ghsr-1α mRNA、GHSR-1α蛋白及Sirt1 mRNA、Sirt1蛋白表达下调(P<0.05);与IIR组相比,IIR+G组Chiu's评分降低,线粒体超微结构破坏部分逆转,能量代谢改善,ATP含量显著增加,MDA生成减少,SOD活性增加,肠组织自噬体增多,Sqstm1 mRNA、p62蛋白表达下调,Becn1 mRNA、Beclin1蛋白表达上调,Map1lc3b mRNA、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,Ghsr-1α mRNA、GHSR-1α蛋白及Sirt1 mRNA、Sirt1蛋白表达上调(P<0.05);与IIR+G组比,IIR+G+E组Chiu's评分升高,线粒体减少且结构破坏加重,肠组织MDA生成增加,SOD活力及ATP含量降低,自噬体减少,Sqstm1 mRNA、p62蛋白表达上调,Becn1 mRNA、Beclin1蛋白表达下调,Map1lc3b mRNA、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达比值降低,Sirt1 mRNA、Sirt1蛋白表达下调(P<0.05),Ghsr-1α mRNA、GHSR-1α蛋白表达与IIR+G组差异无统计学意义.结论:Ghrelin可能通过促进Sirt1表达激活自噬减轻IIR损伤.

目的 研究枳术颗粒对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠的药效及作用机制.方法 复合因素造模法诱导大鼠FD模型,造模成功后给予枳术颗粒治疗2周,观察枳术颗粒对FD大鼠胃残留率、小肠推进率、血清中胃泌素(gastrin,GAS)、胃饥饿素(growth hormone releasing peptide,Ghrelin)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)及生长抑素(somatostatin,SS)含量的影响;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察胃窦组织、十二指肠组织病理变化;利用qRT-PCR检测下丘脑及胃组织中GAS、Ghrelin、CGRP、SSmRNA表达和胃及十二指肠组织中肾上腺素能受体 β1(β1-adrenergic receptor,ADRB1)、生长抑素受体(somatostatin receptor,SSTR)、胃饥饿素-O-乙酰转移酶(ghrelin-O-acyltransferase,GOAT)、胃饥饿素受体(growth hormone secreting hormone receptor,GHSR)、酪氨酸激酶受体(c-kit protooncogene protein,C-kit)、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、钙激活氯离子通道蛋白 Anoctamin-1(ANO1)、肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)mRNA表达;利用Western blotting检测胃及十二指肠组织中C-kit、SCF蛋白表达.结果 枳术颗粒可以显著降低FD大鼠胃残留率(P＜0.05),提高小肠推进率(P＜0.01);升高血清中Ghrelin、GAS含量(P＜0.01),降低CGRP、SS含量(P＜0.05、0.01);升高下丘脑及胃窦组织中Ghrelin、GAS mRNA表达水平(P＜0.05、0.01),降低下丘脑及胃窦组织中CGRP、SSmRNA表达水平(P＜0.01);显著升高胃及十二指肠组织SCF、C-kit蛋白表达水平(P＜0.05、0.01),升高胃及十二指肠组织 ADRB1、GOAT、GHSR、SCF、C-kit、ANO1、MLCK mRNA 表达水平(P＜0.05、0.01),降低SSTR mRNA表达水平(P＜0.05、0.01).结论 枳术颗粒可以改善FD大鼠的胃动力异常,其作用机制可能与调节脑肠肽水平、激活SCF/C-kit通路有关.

目的:探究低氧和运动干预改善肥胖小鼠心肌损伤程度和对胃饥饿素-生长激素促分泌激素受体(Ghrelin-GHSR)通路及相关蛋白的影响.方法:50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为普通对照组(N组,n=8,饲喂普通饲料)和高脂膳食组(H组,n=42,饲喂高脂饲料8周以建立肥胖模型).将建模成功后的肥胖小鼠随机分为肥胖对照组(HN组,n=7)、肥胖常氧运动组(HE组,n=7)、肥胖低氧暴露组(HHN组,n=8)和肥胖低氧运动组(HHE组,n=7).HE和HHE组进行1h/次/天、速度12 m/min的跑台训练;HHN和HHE组进行11.2%O2暴露,8 h/次/天,6次/周.4周后,测试血糖血脂水平;HE染色观察心肌组织形态,免疫组化染色观察Ghrelin蛋白水平和分布;RT-PCR和Western blotting法分别检测心肌组织中Ghrelin、GHSR-1a、Ghrelin O-酰基转移酶(GOAT)、心肌肌钙蛋白I3基因(TNNI3)、神经肽Y1R(NPY1R)、血管内皮生长因子A(VEGFA)mRNA和蛋白的表达.结果:(1)HE和HHN组体重较HN组显著降低(P<0.05);HN组血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著高于N组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著低于N组(P<0.05);HE和HHN组GLU水平显著低于HN组,HHN组TC水平显著低于HN组(P<0.05);HHE组GLU和TC水平显著低于HE组,LDL-C水平显著低于HN组(P<0.05);HE、HHN和HHE三组FFA水平显著低于HN组,HDL-C水平显著高于HN组(P<0.05).(2)HN组较N组出现心肌细胞肥大和心肌纤维形态改变及强嗜酸性染色,损伤评分显著升高(P<0.05);HHE组心肌形态明显改善,且损伤评分显著低于HN组和HE组(P<0.05);HHN组损伤评分高于HE组(P<0.05);HHE组Ghrelin在心肌组织中表达量显著高于HN组(P<0.05).(3)HN组心肌Ghrelin和GHSR-1a mRNA表达水平较N组显著降低(P<0.05);HE组Ghrelin、GHSR-1a、GOAT和VEGFA mRNA水平显著高于HN组(P<0.05);HE组TNNI3 mRNA表达水平显著低于HN组(P<0.05);HHE组Ghrelin、GHSR-1a和VEGFA mRNA表达水平分别显著高于HHN和HE组,TNNI3和NPY1R mRNA水平分别显著低于HHN组和HE组(P<0.05).(4)HN组心肌Ghrelin和VEGFA蛋白表达量显著低于N组,NPY1R和TNNI3显著高于N组(P<0.05);HE组Ghrelin、GHSR-1a和VEGFA蛋白水平显著高于HN组(P<0.05);HE组和HE组TNNI3表达量显著低于HN组(P<0.05);HE组Ghrelin、GOAT和VEGFA蛋白表达量分别显著高于HHN组和HE组,NPY1R蛋白表达量显著低于HE组(P<0.05).(5)肥胖小鼠心肌Ghrelin和VEGFA蛋白水平分别受运动和运动×低氧影响,GHSR-1蛋白水平受运动影响,GOAT和NPY1R蛋白水平受运动×低氧的影响,TNNI3蛋白水平分别受运动和低氧影响(P<0.05).结论:低氧和运动干预可改善肥胖小鼠的心肌形态及减轻其心肌损伤程度,可能机制之一是低氧和运动干预上调心肌组织Ghrelin-GHSR信号通路相关基因和蛋白的表达.

目的 探讨香砂六君子汤对脾胃虚弱型功能性消化不良(FD)模型大鼠胃排空的影响及可能作用机制.方法 60只SD大鼠的乳鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组和香砂六君子汤低、中、高剂量组,每组10只.除空白组外,其余各组大鼠采用碘乙酰胺联合蔗糖溶液灌胃+隔日给食+游泳力竭复制脾胃虚弱型FD大鼠模型.造模成功后香砂六君子汤高、中、低剂量组分别给予香砂六君子汤12、6、3g/(kg·d)灌胃;莫沙必利组给予枸橼酸莫沙必利片1.35 mg/(kg-d)灌胃;空白组和模型组大鼠给予生理盐水10ml/(kg-d)灌胃.连续干预2周后,测定各组大鼠体质量、胃排空率和肠推进率,HE染色观察各组大鼠胃组织病理学改变,检测大鼠胃窦组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、胃生长激素释放激素(ghrelin)、生长激素促分泌素受体1a(GHSR-1a)、c-kit蛋白表达和血浆酰基化胃生长激素释放激素(Acly-ghrelin)水平.结果 与空白组比较,模型组大鼠体质量、胃排空率、肠推进率降低,胃窦组织中ghrelin、GHSR-1a、c-kit蛋白表达和血浆Acly-ghrelin水平均降低,mTOR蛋白表达升高(P＜0.05).与模型组比较,香砂六君子汤中、高剂量组和莫沙必利组大鼠体质量、胃排空率、肠推进率升高,胃窦组织中ghrelin、GHSR-1a、c-kit蛋白表达及血浆Acly-ghrelin水平均升高,mTOR蛋白表达降低(P＜0.05).与莫沙必利组比较,香砂六君子汤高剂量组大鼠胃窦组织中ghrelin蛋白表达升高,mTOR蛋白表达降低(P＜0.05).HE染色结果显示,各组大鼠胃组织病理形态学正常,腺体无萎缩,无炎性细胞浸润.结论 香砂六君子汤中、高剂量能够显著促进脾胃虚弱型FD大鼠胃排空,其作用机制可能与香砂六君子汤可正向调控mTOR/ghrelin/GHSR-1a信号通路相关.

肝表达抗菌肽-2(LEAP-2)最近被发现是生长激素促分泌素受体 1α(GHSR1α)的内源性配体,可拮抗胃促生长素(Ghrelin)的激活作用,后续发现还可以反向激动GHSR1α,降低GHSR1α的基础活性.这种拮抗关系,不仅在调节生长激素分泌方面发挥关键作用,还在调节食物摄入、肥胖、葡萄糖稳态等复杂功能方面发挥重要作用,并有望成为糖尿病、肥胖症、恶病质等代谢相关疾病诊断及治疗的新靶点.该文将结合Ghrelin来分析LEAP-2的作用,阐述其基本生物学功能和在相关疾病发生发展中的作用以及作为治疗靶点的潜力.

目的 应用靶向捕获二代测序技术检测原因不明矮小症致病基因,并分析其与临床表型的相关性.方法 收集2007年至2015年在上海交通大学医学院附属瑞金医院儿内科就诊的临床诊断为原因不明矮小症77例患儿的临床资料.制备包括与生长相关的187个基因编码区序列的基因panel,对77例患儿进行二代测序,根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南评判变异位点,筛选出致病基因,并通过Sanger测序验证,分析患儿基因型和临床表型相关性.结果 检测到5例存在致病性变异;1例存在可能致病性变异;1例变异意义不明确.这7种变异均为杂合.1例ACAN基因存在致病性变异p.D2407fs,表现为矮小及骨龄偏大;3例发现PTPN11基因存在已知致病性变异,分别为p.A72G、p.I282V和p.P491S,确诊为Noonan综合征;1例COL2A1基因存在已知致病性变异p.R904C,确诊为Stickler综合征;l例COMP基因存在可能致病性变异p.D401N,可造成多发性骨骺发育不良;1例为家族性矮小患儿,发现GHSR基因新发杂合变异p.S289Y,其骨龄发育落后,基因型与临床表型一致,目前评判意义不明确.结论 发现ACAN基因杂合缺陷与骨龄发育超前的特发性矮小相关.COMP基因p.D401N变异,可能与多发性骨骺发育不良有关.GHSR基因新发杂合变异p.S289Y,可能导致矮小,须进一步功能实验验证.

目的 建立靶向生长激素促泌素受体1a(GHSR1a)基因短发夹干扰RNA(shRNA)慢病毒表达载体,感染至人直肠癌细胞株SW480,观察沉默GHSR1a基因对体外SW480细胞生长和凋亡的影响.方法 Western blot检测GHSR1a在人直肠癌Caco-2和SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;构建特异性靶向GHSR1a基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体;通过慢病毒感染建立稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞(KD)、阴性对照细胞(NC)及空白对照细胞(BC),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GHSR1a mRNA在细胞中的表达;通过Western blot技术检测细胞中GHSR1a蛋白的表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定感染GHSR1a shRNA后对SW480细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡.结果 在体外实验中,GHSR1a蛋白在Caco-2和SW480细胞中的表达水平分别为89.24±12.95和124.82±17.67,明显高出NCM460细胞中的表达水平(23.51±4.28);通过荧光表达及流式细胞学结果表明成功建立稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞;SW480细胞感染GHSR1a shRNA后,GHSR1a蛋白在BC、NC和KD组中的表达分别为73.27±8.69、69.82±7.14和11.73±1.94,GHSR1a mRNA在BC、NC和KD组中的相对表达量分别为124.31±14.78、136.62±17.20和38.94±4.13,KD组细胞中GHSR1a蛋白及mRNA的表达明显低于BC组或NC组(P=0.000);沉默GHSR1a基因72 h后,KD组细胞增殖较BC组下降(32.24±3.67)％,差异有统计学意义(P=0.002);感染GHSR1a shRNA 72 h后,BC、NC和KD组细胞早期凋亡率分别为(2.3±0.5)％、(3.4±0.6)％和(12.4±3.5)％,KD组细胞早期凋亡率明显高于BC组或NC组(P=0.000).结论 慢病毒介导的GHSR1a shRNA对体外人直肠癌细胞生长有明显抑制作用,并促进细胞凋亡,表明GHSR1a基因有可能具有影响直肠癌发生发展的作用.

目的 观察运脾开胃方含药血清对人胃窦平滑肌细胞(HGSMCs)内 Ca2+、MLC、p-MLC的干预作用以及与 Ghrelin受体(GHSR)的关系,研究运脾开胃方治疗厌食症的机制.方法 培养 HGSMCs,制备低、中、高浓度的运脾开胃方含药血清;采用激光共聚焦、Western blot法检测运脾开胃方含药血清对 HGSMCs 内 Ca2+、MLC、p-MLC 的影响;阻断 HGSMCs 表面GHSR并干扰细胞内外Ca2+的正常调控,研究运脾开胃方含药血清对 HGSMCs 内 p-MLC的干预机制.结果 低、中、高剂量组运脾开胃方含药血清能在一定时间范围内上调 HGSMCs 内 Ca2+的相对荧光强度(P<0.05~0.01);低、中、高剂量组运脾开胃方含药血清能在10 min时显著上调 HGSMCs内 p-MLC水平(P<0.05~0.01);(D-Lys3)-GHRP-6、Thapsigargin、D-HBSS液能显著抑制高剂量运脾开胃方含药血清在10 min时对 p-MLC的上调作用(P<0.01).结论 运脾开胃方含药血清可能通过激活 GHSR提高细胞内Ca2+水平来促进 MLC磷酸化.

目的:探讨Ghrelin对糖尿病大鼠下丘脑弓状核胃扩张敏感神经元和胃运动的影响.方法:逆行追踪结合免疫组化观察ARC中GHSR-1的表达,细胞外放电记录,观察ghrelin对GD神经元放电活动的影响及电刺激ARC对GD神经元放电活动和胃运动的影响.结果:电生理实验结果表明,在ARC Ghrelin能够能激发GD兴奋性神经元(GD-E)和GD抑制性神经元(GD-Ⅰ).然而,ghrelin可以兴奋更少的GD-E神经元,在正常大鼠中ghrelin对于GD-E的兴奋作用比在DM大鼠中的作用弱.在体胃运动研究表明,在ARC中微量注射ghrelin可以明显的增强胃运动,并且呈现剂量依赖关系.Ghrelin在糖尿病大鼠促胃动力作用低于正常大鼠.Ghrelin诱导的效应可被生长激素促分泌素受体(GHSR)拮抗剂阻断[d-lys-3]-GHRP-6或bim28163.放射免疫法和实时荧光定量PCR数据表明胃血浆ghrelin水平,在ARC ghrelinmRNA的表达水平先上升后下降,糖尿病大鼠(DM)中,在ARC中GHSR-1a mRNA表达保持在一个比较低的水平.结论:ghrelm可以调节GD敏感神经元以及胃运动,通过ARC中ghrelin受体.在糖尿病大鼠中,Ghrelin促进胃运动作用减弱可能与ARC中ghrelin受体表达减少有关.

目的:探讨生长激素释放肽(Ghrelin)促进乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的分子机制.方法:乳腺癌细胞MDA-MB-231经Ghrelin、Ghrelin受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)抑制剂[D-Lys3]-GHRP-6或哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of Rapamycin,mTOR)抑制剂雷帕霉素(Rapa-mycin)处理后,MTT或BrdU实验检测MDA-MB-231细胞的增殖能力;Western blot检测MDA-MB-231细胞GHSR表达及mTOR、p70S6K和S6磷酸化水平.结果:增殖实验结果表明Ghrelin增强MDA-MB-231细胞增殖能力;Western blot检测发现 Ghrelin激活 MDA-MB-231细胞 mTOR、p70S6K和 S6磷酸化,[D-Lys3]-GHRP-6或Rapamycin消除Ghrelin促进MDA-MB-231细胞增殖效应,同时抑制Ghrelin诱导的mTOR、p70S6K和S6磷酸化.结论:Ghrelin通过与GHSR结合激活MDA-MB-231细胞mTOR/p70S6K/S6信号途径促进MDA-MB-231细胞增殖.