人类免疫缺陷病毒(HIV)感染可引起严重的全身免疫系统损害最终导致患者死亡。尽管抗HIV逆转录病毒疗法(ART)取得了成功，能够有效抑制病毒复制，但目前尚无彻底治愈艾滋病的方法，而且治疗是终身的。由于病毒潜伏库存在，HIV在ART治疗期间持续存在。激活并清除是目前公认的清除HIV潜伏库的策略之一，主要是通过使用潜伏感染激活剂(LRAs)激活病毒转录，触发细胞溶解或免疫介导的清除，以杀伤激活后的潜伏库细胞，实现功能性治愈。本文对现有的LRAs及其作用机制作一综述。

目的:建立可直观检测NF-κB p65亚基核易位的方法.方法:构建NF-κB p65的真核表达重组质粒pEG-FP-p65,转染HeLa细胞,加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)后采用活细胞成像技术观察绿色荧光蛋白在HeLa细胞内的变化.结果:TNF-α处理后0～2 h,EGFP-p65融合蛋白主要聚集在胞浆处;TNF-α处理后4～12 h,随处理时间的延长,细胞核处的绿色荧光蛋白逐渐增强,但细胞内总荧光值基本保持稳定.结论:TNF-α可以促进EGFP-p65入核.活细胞成像技术具有操作简单、实时动态、直观、定量等优点,可用于探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)潜伏感染再激活剂的作用机制.

目的 改进和提高HIV体外扩增检测的灵敏度,缩短检测时间.方法 1)用Broad Institute gRNA设计工具选取HIV的长末端重复序列(LTR)段设计20条gRNA(引导RNA).2)用含荧光素酶报告的基因HIV(HIV-Luc)感染具有dCas9基因激活系统的Jurkat6465细胞系构建Jurkat6465-Luc细胞系,并将20条gRNA置于Jurkat6465-Luc细胞系中筛选出激活能力筛选,选取效率最高的gRNA-L,gRNA-L与dCas9基因激活系统包装成慢病毒感染Jurkat细胞系,建立可对HIV序列高效扩增的工作细胞系Jurkat6465-L.3)用HIV-Luc感染Jurkat细胞系构建HIV潜伏测试细胞系,设定其潜伏频率为1∶500,并与工作细胞Jurkat6465-L置于细胞培养箱中共同培养7和14d观察工作细胞对HIV潜伏细胞系的激活能力.4)使用HIV激活剂SAHA和dCas9基因激活系统分别作用于设定潜伏频率为1∶500的潜伏细胞,分别比较对潜伏HIV的激活能力.结果 首先,测定荧光素酶活性筛选出的2条具有高效HIV扩增能力的gRNA-L和gRNA-O,二者及对照组促进Jurkat6465-Luc的扩增效力(荧光素酶活性强度)(n=3,pg/mL),6d分别为:85 530±979.2 vs 96 925±2 759 vs 9 876±437(P＜0.01);选取gRNA-L与dCas9基因激活系统构建的Jurkat6465L细胞系作为工作细胞,测试设定潜伏频率为1/500的HIV潜伏测试细胞,在培养7、14d激活HIV潜伏测试细胞的频率测定分别1/864和1/755,比培养14 d用SAHA激活HIV潜伏模型细胞频率1/1 180更接近设定潜伏频率值1/500;用HIV潜伏细胞测试dCas9基因激活系统激活HIV潜伏细胞频率1/615与对照SAHA激活剂激活HIV潜伏细胞频率1/749相比,更接近于设定频数1/500.结论 dCas9基因激活系统改进HIV体外扩增,可以提高HIV体外扩增检测的效率和灵敏度.

目的 探讨人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)储存库激活剂的体外激活效应,为临床应用提供参考.方法 分离得到健康供血者外周血中的CD4+T细胞,构建HIV-1潜伏感染的原代细胞模型.用不同浓度(0.5、1、2μmol/L)的帕比司他(Panobinostat)、伏立诺他(SAHA)(Vorinostat)、BIX-01294、JQ-1、Bryostatin-1、GS-9620、地西他滨(Decitabine)、戒酒硫(Disulfiram)、Sirolimus分别处理细胞,在不同作用时间(1、3、5 d)后利用流式细胞分析仪检测每种药物对HIV-1储存库细胞的绿色荧光蛋白(GFP)表达效率及细胞存活率,并确定每种激活剂的最佳激活浓度和作用时间.结果 通过对由HIV-1启动子驱动的GFP表达效率及细胞存活率的统计分析,明确了在该细胞模型中这9种HIV-1储存库激活剂的最佳作用浓度和作用时间:Panobinostat的最佳激活浓度为1μmol/L,最佳作用时间为3 d;SAHA的最佳激活浓度为2μmol/L,最佳作用时间为1 d;JQ-1、Bryostatin-1和GS-9620在该模型中的最佳激活浓度均为1μmol/L且最佳作用时间均为1 d;BIX-01294、Decitabine、Disulfiram、Sirolimus在该模型中的最佳激活浓度均为0.5μmol/L且最佳作用时间均为1 d.横向对比发现,浓度为1μmol/L,作用时间为3 d的Panobinostat与浓度为0.5μmol/L,作用时间为1 d的Sirolimus在这9种药物中的激活效率最高,且对细胞存活无明显影响.结论 系统比较确认了9种病毒储存库激活药物在体外细胞模型中的激活效率,及最佳作用浓度和时间,为后续这些药物的临床实验研究提供重要参考.

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)潜伏是艾滋病无法治愈的主要障碍.针对HIV潜伏的治疗策略之一"shock and kill",是通过潜伏感染激活剂激活潜伏的HIV使之发生转录,然后与高效抗逆转录病毒疗法(highly active antiretroviral therapy,HAART)联合使用,并结合细胞的自身免疫监视系统,从而实现清除HIV-1病毒潜伏库的目的.这种策略的核心是安全高效、作用机制新颖HIV潜伏激活剂的发现.从结构分类、来源和作用机制对天然产物HIV-1潜伏激活剂的研究进展进行综述.

HIV病毒潜伏库是指在免疫反应和抗病毒治疗压力下HIV潜藏的细胞或组织,其存在是艾滋病无法治愈的关键原因.因此,清除HIV病毒潜伏库是治愈艾滋病的关键.HIV潜伏感染激活剂可以将潜伏感染的细胞激活,释放出HIV,然后联合自身免疫和抗病毒药物将病毒杀死,最终达到清除HIV病毒潜伏库的目的 .本文介绍了HIV病毒潜伏库的概念、形成过程以及HIV病毒潜伏库的激活策略和相关激活剂,为中学开设以艾滋病为主题的课程提供一定的理论基础.