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靶向抗TIGIT和PVRIG双特异抗体的制备及体外生物性活性的研究
编辑人员丨6天前
目的 制备靶向抗T细胞免疫球蛋白-ITIM结构域蛋白(T cell immune receptor with Ig and ITIM domains,TIGIT)和脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域蛋白(Poliovirus re-ceptor-related immunoglobin domain-containing protein,PVRIG)双特异抗体,探究其体外生物学活性.方法 用PVRIG人源化抗体hP1和TIGIT人源化抗体hT1构建KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV双特异性抗体,将纯化得到KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体进行SDS-PAGE凝胶电泳、热稳定性检测和稳定性分析;采用流式细胞术(Fluorescence activated cell sor-ting,FACS)检测双特异性抗体的结合活性;采用生物干涉膜技术(Bio-layer interferometry,BLI)检测双特异性抗体亲和力;用 Jurkat-NFAT-Luc2-PD1-TIGIT-PVRIG 细胞和 293T-OS8-PVRL2-PDL1细胞中检测双特异性抗体KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV对于TIGIT/PVRIG靶点的阻断作用;采用CMV recall assay法检测IFN-r在上清液中的浓度.结果 SDS-PAGE凝胶电泳结果显示KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV双特异性抗体纯度>95%;Tm结果为Tm1:66.34,Tm2:80.95.采用SEC-HPLC对双特异性抗体KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV进行稳定性分析,其纯度均>90%.KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体和PVRIG的人源化抗体hP1与293T-PVRIG cell line 的 EC50 分别为 0.168 70 μg/mL 和 0.038 65 μg/mL,与 293T-cyno-PVRIG cell line 的 EC50 分别为 0.037 14 μg/mL 和 0.031 98 μg/mL,与 Human PVRIG Protein,His Tag的亲和力为 1.74E-10M 和 1.69E-10M.KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV 抗体和 TIGIT 的人源化抗体 hT1 与 293T-PVRIG cell line 的 EC50 分别为 0.070 27 μg/mL 和 0.031 21 μg/mL;与293T-cyno-TIGIT cell line 的 EC50 分别为 0.020 28μg/mL 和 0.028 22 μg/mL;与 Human TIGIT Protein,His Tag 的亲和力为 8.50E-10M 和 8.47E-10M.KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV 抗体具有阻断 PD1/PDL1/TIGIT/PVRIG 相互作用活性,且 KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV 的 EC50为 0.007 μg/mL,优于单独人源化抗体 hT1(EC50为 0.013 μg/mL)和 hP1(EC50为 0.048 μg/mL)的作用.在含 pp65 peptide 条件下 KY-TIGIT-h1gG4M-PVRIG-SCFV 抗体分泌 IFN-r 为 349.72 pg/mL,明显高于其他抗体.结论 KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体具有高亲和力和良好的生物学活性,有望开发成为肿瘤免疫治疗的抗体药物.
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编辑人员丨6天前
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儿童过敏性肺炎的诊治及研究进展
编辑人员丨6天前
过敏性肺炎(HP)是一种免疫介导的间质性肺疾病,临床表现、严重程度及疾病转归具有高度异质性,与个体敏感性、接触抗原的性质、剂量、持续时间及接触频率均有关。2020年新制定的成人HP指南对其进行了重新分类,并详细描述了其影像学特征。HP常发生在成人,但也可影响儿科人群,且是常见的儿童间质性肺疾病之一。在儿童中,引起HP的最常见因素为家庭环境中的禽类和真菌抗原。HP的诊断主要基于明确的暴露抗原、典型的症状、特征性放射学表现,血清特异性抗体IgG、支气管肺泡灌洗液及肺功能检查可帮助明确诊断HP,对于诊断仍不明的患儿需行肺组织病理检查。早期诊断并充分避免抗原暴露是治疗及预后的关键。
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编辑人员丨6天前
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三种胃癌初筛方法在健康体检人群早期胃癌筛查中的对比研究
编辑人员丨6天前
目的:比较血清幽门螺杆菌( HP)抗体联合胃蛋白酶原(PG)(即ABC法)、血清PG联合胃泌素-17(G-17)(即新ABC法)和新型胃癌筛查评分法,这3种胃癌初筛方法在健康体检人群早期胃癌筛查中的作用和效能。 方法:对2019年1月—2021年12月在上海市松江区中心医院体检中心进行健康体检并行胃镜检查者行上述3种胃癌初筛,每种方法均分为低危人群、中危人群和高危人群,以胃镜和活检病理为金标准,计算3种筛查方法各危险分层的比例和胃癌的检出率,评价各筛查方法的优缺点。结果:完成健康体检和胃镜检查纳入研究者共3 199例。胃镜检出食管癌10例(0.31%),均为早期食管癌;胃癌37例(1.16%),其中早期胃癌者占86.49%(32/37)。采用3种胃癌初筛方法评估受检者胃癌风险,ABC法评为低危人群1 853例(7.92%)、中危人群1 339例(41.86%)、高危人群7例(0.22%),胃癌检出率分别为0.97%(18/1 853)、1.42%(19/1 339)、0.00%;新ABC法评为低危人群2 362例(73.84%)、中危人群804例(25.13%)、高危人群33例(1.03%),胃癌检出率分别1.14%(27/2 362)、1.24%(10/804)、0.00%;新型胃癌筛查评分法评为低危人群1 448例(45.26%)、中危人群1 213例(37.92%)、高危人群538例(16.82%),胃癌检出率分别为0.28%(4/1 448)、1.32%(16/1 213)、3.16%(17/538)。中、高危人群合计的胃癌检出率明显大于低危人群,差异有统计学意义( χ 2=17.935, P<0.001)。观察受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC),ABC法为0.546、新ABC法为0.503、新型胃癌筛查评分法为0.760,新型胃癌筛查评分法的AUC明显大于ABC法和新ABC法,差异均有统计学意义( P<0.001)。 结论:新型胃癌筛查评分法中、高危人群的胃癌检出率高于低危人群,胃癌漏诊率低于ABC法和新ABC法,在健康体检人群的早期胃癌筛查中具有较高的价值。
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编辑人员丨6天前
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幽门螺杆菌鞭毛蛋白FliD免疫学特征的初步研究
编辑人员丨6天前
目的:初步研究幽门螺杆菌( Helicobacter pylori ,HP)鞭毛蛋白FliD的部分免疫学特征。 方法:原核表达重组FliD蛋白;制备rFliD兔多克隆抗体,同时酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测rFliD特异性免疫球蛋白G(immunoglobulin G, IgG)与免疫球蛋白M(immunoglobulin M, IgM)水平;酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot, ELISPOT)检测rFliD刺激Hp患者外周血单核细胞(peripheral blood monocytes, PBMC)后的γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)及白细胞介素4(interleukin4, IL-4)表达水平;流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测rFliD蛋白刺激胃粘膜上皮细胞(Gastric epithelial cells, GES-1)细胞后的凋亡比例。结果:rFliD原核表达纯化成功;成功制备高效价rFliD兔多克隆抗体,并发现rFliD可诱导家兔产生高水平IgG与IgM,与免疫前血清比差异具有统计学意义( t值分别为5.42、8.18, P值均<0.05)),效价可达1:102 400;与健康对照组(healthy control, HC)相比,HP组rFliD特异性IFN-γ与IL-4均显著增高( t值分别为21.91, 13.57, P值均<0.05),但产生IFN-γ的水平显著高于IL-4( t=7.55, P< 0.05);与磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)对照组相比,rFliD刺激GES-1细胞后24或72 h均可发生显著性凋亡且差异具有统计学意义( t值分别为10.12、10.90, P值均<0.05)。 结论:幽门螺杆菌鞭毛FliD蛋白具有强免疫原性,可诱导产生较强的体液及细胞免疫应答,且细胞免疫应答以IFN-γ高表达的Th2型为主;同时发现其对GES-1细胞存在一定程度的凋亡效应。
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编辑人员丨6天前
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无锡市大规模社区自然人群的胃癌筛查方法及结果分析
编辑人员丨6天前
目的:探讨无锡市大规模社区自然人群的合理化胃癌筛查方案。方法:2016年12月—2019年12月,采用随机数字表法随机选取无锡市新吴区的6个街道19个社区(村)的自然人群(105 865人)进行研究,对年龄在40~69岁的目标人群(50 063人)进行入户流行病学问卷调查,然后根据血清学幽门螺杆菌( Helicobacter pylori, HP)抗体和胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)检测结果将受调查者分为4类:Ⅰ类, HP(-)、PG(-);Ⅱ类, HP(+)、PG(-);Ⅲ类, HP(+)、PG(+);Ⅳ类, HP(-)、PG(+)。Ⅲ类和Ⅳ类人群全部入选并分别纳入C组和D组,再按样本量A组∶D组=3∶1、B组∶C组=3∶1的原则,采用计算机随机生成数字的方法分别从Ⅰ类、Ⅱ类人群中随机抽取受试者分别纳入A组和B组,同时Ⅰ类和Ⅱ类人群中未被抽到的胃癌家族史一级亲属也均分别纳入A组和B组。对以上入组受试者进行内镜精查及病理检测,重点观察高级别上皮内瘤变(high grade intraepithelialneoplasia,HGIN)、早期胃癌和胃癌的检出情况。 结果:50 063人目标人群中,最终有31 508人接受了问卷调查,目标人群参与率为62.9%。共有19 745人进行了血清学检测,目标人群参与率为39.4%(19 745/50 063),血清学结果显示:Ⅰ类11 152人(56.48%),Ⅱ类8 170人(41.38%),Ⅲ类124人(0.63%),Ⅳ类299人(1.51%)。根据排除标准和自愿原则,拟对3 400人进行胃镜检查,实际到院接受胃镜检查者2 389人,其中A组1 263人、B组814人、C组86人、D组226人,拟行胃镜人群参与率为70.3%(2 389/3 400),目标人群参与率为4.8%(2 389/50 063),总体人群参与率为2.3%(2 389/105 865)。胃镜及活检病理发现HGIN+胃癌32人(检出率为1.34%),其中40~49岁1人(占3.125%)、50~59岁9人(占28.125%)、60~69岁22人(占68.750%),有25人(占78.13%)经内镜黏膜下剥离术或外科手术后病理证实为HGIN或早期胃癌。剔除A组、B组中的非胃癌家族史胃癌一级亲属810人(其中胃癌3人),同时将胃镜检查年龄提高到50岁(即再剔除40~49岁214人,其中胃癌1人),则接受胃镜检查的人数可从2 389人减少到1 365人,从中仍可检出HGIN+胃癌28人,其中HGIN+早期胃癌22人。结论:通过流行病学、血清学检测并结合年龄、胃癌家族史一级亲属的筛查方法,在自然人群中相对准确地筛选出"胃癌筛查高危目标人群"进行胃镜检查是适用于无锡地区的胃癌筛查模式;结合我国国情,从成本-效益角度出发,推荐在无锡地区采用50岁以上、血清学PG(+)及胃癌家族史胃癌一级亲属的社区胃癌筛查新方案。
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编辑人员丨6天前
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淮北地区基于高危因素及不同血清学危险分层方法比较的早期胃癌筛查研究
编辑人员丨6天前
目的:探究不同血清学危险分层方法及高危因素分析在淮北地区早期胃癌筛查的效能。方法:2018年11月—2020年6月,对淮北市3家医院(淮北市人民医院、淮北矿工总医院、安徽省濉溪县医院)因上消化道症状就诊的人群进行早期胃癌筛查,所有受试者行幽门螺杆菌( Helicobacter pylori, HP)抗体、胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)Ⅰ、PGⅡ、胃泌素-17(gastrin-17,G-17)血清学检查,计算胃蛋白酶原比值(pepsinogen ratio,PGR,即PGⅠ/PGⅡ),并行内镜及病理学检查,以病理学诊断为胃癌诊断的金标准。采用 χ2检验和Kappa一致性检验比较ABC法( HP抗体联合PGR)、新ABC法(血清PGR联合G-17)和新胃癌筛查评分系统(结合年龄、性别、 HP抗体、PGR和G-17)3种方法的胃癌筛查效能。使用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)计算PGⅠ、PGⅡ、G-17、PGR诊断胃癌的最佳临界值。单因素、多因素Logistic回归分析筛选胃癌发生的高危因素。 结果:共纳入1 093例受试者,其中1 021例胃、十二指肠部疾病患者为研究对象。内镜和病理学检查检出胃癌(包括高级别上皮内瘤变)28例(2.74%),其中早期胃癌17例(60.71%)。新胃癌筛查评分系统的高危组胃癌检出率(16.98%,18/106)高于低危组(0.49%,3/614)和中危组(2.33%,7/301),差异均有统计学意义( P均<0.001)。新胃癌筛查评分系统较新ABC法和ABC法有较高的胃癌检出率(Kappa=0.220,Kappa=0.185; P=0.007, P=0.049)。ROC曲线分析显示,PGⅠ、G-17和PGR诊断胃癌的曲线下面积分别为0.651、0.629和0.729,PGR曲线下面积最大。PGR最佳临界值为<2.96,诊断胃癌敏感度0.714,特异度0.768,阳性似然比3.084,阴性似然比0.374。多因素Logistic回归分析显示,肿瘤家族史( OR=7.003,95% CI:2.119~23.146, P=0.001)、 HP感染( OR=3.556,95% CI:1.478~8.557, P=0.005)、高龄( OR=1.203,95% CI:1.138~1.272, P<0.001)、吸烟( OR=1.878,95% CI:1.316~2.679, P=0.001)为胃癌高危因素。 结论:新胃癌筛查评分系统在早期胃癌筛查中有较高的价值,肿瘤家族史、 HP感染、高龄、吸烟因素为胃癌发生的高危因素,二者结合可用于淮北地区的早期胃癌筛查工作。
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编辑人员丨6天前
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幽门螺杆菌菌株类型与儿童胃、十二指肠疾病的关系
编辑人员丨6天前
目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)菌株类型与儿童胃、十二指肠疾病的关系,了解不同疾病类型患儿腹痛持续时间的差异。方法:83例 13C-尿素呼气试验( 13C-UBT)阳性患儿,根据胃镜检查结果分为胃、十二指肠溃疡及结节性胃炎组与慢性浅表性胃炎两组,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测患儿的血清细胞毒素相关蛋白A(CagA)与空泡毒素A(VacA)抗体,分析两组患儿CagA、VacA抗体检出情况及腹痛持续时间的差异。 结果:胃、十二指肠溃疡及结节性胃炎患儿与慢性浅表性胃炎患儿CagA、VacA抗体检出情况比较差异有统计学意义( P<0.01),两组患儿腹痛持续时间比较差异有统计学意义( P<0.01)。 结论:Hp菌株类型与儿童胃、十二指肠疾病发病类型有关,不同的疾病类型腹痛时间不同,胃黏膜病变严重者腹痛时间更长。
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编辑人员丨6天前
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血清胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ及比值联合Hp抗体检测对早期胃癌的诊断价值
编辑人员丨6天前
本研究旨在探讨血清PGⅠ、PGⅡ及两者比值(PGR)联合HP抗体检测对早期胃癌的诊断价值,以期为临床早期胃癌提供有效的无创检测手段,现将结果报道如下。
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编辑人员丨6天前
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血清PGⅠ、PGⅡ、PGR、G-17水平与Hp-IgG联合检测对胃癌早期诊断的临床价值分析
编辑人员丨6天前
目的:探讨血清胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)、胃蛋白酶原比值(PGR)、胃泌素-17(G-17)及幽门螺杆菌IgG抗体(Hp-IgG)联合检测对胃癌早期诊断的临床价值。方法:选取2018年1月至2019年6月四川省广元市第四人民医院收治的120例胃癌患者(早期胃癌组)、60例萎缩性胃炎患者(萎缩性胃炎组)、同期体检的120例健康志愿者(对照组)为研究对象。比较3组受试者血清PGⅠ、PGⅡ、PGR、G-17和Hp-IgG的水平,通过ROC曲线分析各指标及联合诊断的价值。结果:早期胃癌组、萎缩性胃炎组及对照组受试者血清PGⅠ分别为(59.85±8.59)ng/ml、(72.19±9.89)ng/ml、(96.83±8.66)ng/ml,差异具有统计学意义( F=530.504, P<0.001);3组受试者PGⅡ分别为(23.19±2.45)ng/ml、(20.60±4.19)ng/ml、(16.52±3.34)ng/ml,差异具有统计学意义( F=130.085, P<0.001);3组受试者PGR分别为2.78±0.69、4.33±0.95、6.21±1.46,差异具有统计学意义( F=288.801, P<0.001);3组受试者G-17分别为(77.04±10.09)ng/ml、(64.69±7.22)ng/ml、(55.91±8.32)ng/ml,差异具有统计学意义( F=170.770, P<0.001);3组受试者Hp-IgG分别为(70.23±8.11)IU、(58.30±9.37)IU、(33.00±5.24)IU,差异具有统计学意义( F=778.431, P<0.001)。早期胃癌组和萎缩性胃炎组患者的血清PGⅠ和PGR水平明显低于对照组患者(均 P<0.05),且早期胃癌组血清PGⅠ和PGR水平显著低于萎缩性胃炎组患者(均 P<0.05);早期胃癌组和萎缩性胃炎组患者的PGⅡ、G-17和Hp-IgG水平明显高于对照组(均 P<0.05),且早期胃癌组患者PGⅡ、G-17和Hp-IgG水平显著高于萎缩性胃炎组(均 P<0.05)。ROC曲线显示,血清PGⅠ诊断胃癌的临界值为73.11 ng/ml,敏感性为63.33%,特异性为83.33%,曲线下面积(AUC)为0.801;血清PGⅡ诊断的临界值为19.55 ng/ml,敏感性为75.83%,特异性为72.22%,AUC为0.760;血清PGR诊断的临界值为4.60,敏感性为82.50%,特异性为77.22%,AUC为0.816;血清G-17诊断的临界值为64.33 ng/ml,敏感性为64.17%,特异性为65.56%,AUC为0.631;血清Hp-IgG诊断的临界值为53.80 IU,敏感性为59.17%,特异性为75.00%,AUC为0.708;在最佳临界切点时,PGⅠ+Hp-IgG二者联合检测敏感性为69.17%,特异性为76.67%,AUC为0.754;PGR+Hp-IgG二者联合检测敏感性为88.33%,特异性为74.44%,AUC为0.798;G-17+Hp-IgG敏感性为71.67%,特异性为65.56%,AUC为0.718;五者联合检测的敏感性为92.50%,特异性为72.22%,AUC为0.869。五者联合检测敏感性显著高于各指标单独检测(均 P<0.05),且五者联合诊断的AUC显著高于各项指标单独检测( Z=1.848, P=0.032; Z=3.145, P=0.001; Z=1.688, P=0.046; Z=7.726, P<0.001; Z=4.931, P<0.001; Z=3.188, P=0.001; Z=1.783, P=0.037; Z=4.534, P<0.001)。 结论:血清PGⅠ、PGⅡ、PGR、G-17和IgG anti-Hp联合检测可提高胃癌诊断的敏感性,对于胃癌早期诊断有重要的意义和价值。
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编辑人员丨6天前
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幽门螺杆菌的感染诊断及环介导等温扩增技术在该领域的研究进展
编辑人员丨6天前
幽门螺杆菌( Helicobacter pylori, Hp)与很多胃肠道疾病甚至是胃肠外疾病密切相关。目前幽门螺杆菌的常规检测技术包括快速尿素酶试验、病理组织学检查、血清抗体检测、粪便抗原检测、尿素呼气试验等,随着在临床应用中发现这些技术均存在不同程度的缺陷,因此需要探索新技术来弥补。恒温核酸扩增技术中的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术近年发展迅速,具有快速、特异、敏感、简便等特点,使该技术在核酸检测领域得到了广泛的应用。文章就Hp感染诊断及LAMP技术在诊断、毒力分型领域内的研究进展进行综述,期望为后续研究者们提供更多信息。
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编辑人员丨6天前
