Analyzing polysorbate 20(PS20)composition and the impact of each component on stability and safety is crucial due to formulation variations and individual tolerance.The similar structures and polarities of PS20 components make accurate separation,identification,and quantification challenging.In this work,a high-resolution quantitative method was developed using single-dimensional high-performance liquid chromatography(HPLC)with charged aerosol detection(CAD)to separate 18 key components with multiple esters.The separated components were characterized by ultra-high-performance liquid chro-matography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry(UHPLC-Q-TOF-MS)with an identical gradient as the HPLC-CAD analysis.The polysorbate compound database and library were expanded over 7-time compared to the commercial database.The method investigated differences in PS20 samples from various origins and grades for different dosage forms to evaluate the composition-process relationship.UHPLC-Q-TOF-MS identified 1329 to 1511 compounds in 4 batches of PS20 from different sources.The method observed the impact of 4 degradation conditions on peak components,identifying stable components and their tendencies to change.HPLC-CAD and UHPLC-Q-TOF-MS results provided insights into fingerprint differences,distinguishing quasi products.

目的:建立高效液相色谱法联合电喷雾式检测器(HPLC-CAD)同时测定4,4'-亚甲双[四氢-2H-1,2,4-噻二嗪]1,1,1',1'-四氧化物(简称牛磺罗定)中两种工艺杂质[2-氨基乙烷磺酰胺(简称牛磺酰胺)和2-氨基乙磺酸(简称牛磺酸)].方法:采用Sielc Primesep 500(4.6mm × 150mm,5 μm)为色谱柱,以10mmol·L-1甲酸铵(用甲酸调节pH值至3.4)(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱;流速1.0mL·min-1,柱温20℃,CAD雾化器温度为35℃,进样量10 μL.结果:牛磺酰胺和牛磺酸的线性范围分别为0.2254～3.016 0 μg·mL-1(r=0.9991)和0.221 2～2.9578 μg·mL-1(r=0.999 3);平均加样回收率(n=9)分别为102.8％和101.8％,RSD分别为3.4％和2.2％.4批样品均未检出牛磺酰胺和牛磺酸.结论:根据ICH指南对所开发的方法进行了验证,结果表明,该方法具有良好的专属性、准确性和灵敏度,可用于牛磺罗定的质量控制.

目的:研究高效液相色谱-电雾式检测法(HPLC-CAD)测定蓖麻油中三蓖麻油酸甘油酯含量,并与美国药典(USP)的蒸发光散射检测法(ELSD)进行对比,探讨不同检测方法的合理性.方法:RP-HPLC-ELSD法色谱柱C18柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:A甲醇,B异丙醇;梯度洗脱:0～20 min,A 100％～50％;20～23 min,A 50％～0％;23～25 min,A 0％～100％;25～35 min,A 100％,流速 1.0 mL·min-1,柱温35℃;检测器温度40℃,氮气流速1.5 L·min-1;采用标准曲线法或面积归一化法进行定量.RP-HPLC-CAD法色谱柱C18柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:A甲醇,B异丙醇;梯度洗脱:0～20 min,A 100％～50％;20～22 min,A 50％～30％;22～30 min,A 30％;30～32 min,A 30％～100％;32～40 min,A 100％;柱温35℃;采集频率:10 Hz,滤波常数:3.6 s,蒸发温度:50℃;采用标准曲线法或面积归一化法进行定量.结果:分别对ELSD与CAD检测器采用面积归一化法对蓖麻油中三蓖麻油酸甘油酯含量检测的结果和方法合理性进行了比较与探讨,并在此基础上讨论了以三油酸甘油酯和三蓖麻油酸甘油酯为对照品,采用标准曲线法进行含量测定的可行性.结论:在蓖麻油中三蓖麻油酸甘油酯含量的检测中,CAD检测器的响应一致性高于ELSD检测器,采用CAD检测器进行峰面积归一化法或标准曲线法的检测结果与质谱的检测结果基本一致.

分别建立了 HPLC-电雾式检测器(CAD)法分析二芥酰磷脂酰胆碱(DEPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)和二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)中的有关物质,监测这3种合成磷脂的降解杂质.采用LC-MS法、专一性磷脂酶A1酶解试验结合ACD/Labs软件(Version 2021)辅助,鉴定3种合成磷脂主要的降解杂质结构,发现上述3种磷脂降解产生了Sn-1-溶血磷脂和Sn-2-溶血磷脂及脂肪酸等共性杂质,并确定了 Sn-1-溶血磷脂为优势降解物,为合成磷脂类药用辅料的质量控制和制剂工艺研究提供了参考.

目的 建立重组抗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein convertase subtilisin/Kexin 9,PCSK9)单克隆抗体关键质量属性的质控方法.方法 根据《中国药典》三部(2020版)及人用药品注册技术要求国际协调会(International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use,ICH)相关要求,采用还原胰蛋白酶肱指纹图谱法对PCSK9单克隆抗体进行一致性鉴别;ELISA法检测抗体特异性;成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,icIEF)测定电荷变异体;还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)检测变异体纯度;分子排阻高效液相色谱(size-exclusion chromatography high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)检测单体、高分子量和低分子量物质含量;切糖后对N-糖进行2AB标记,采用带有荧光检测器的Waters ACQUITY UPLC系统进行糖型分析;通过HepG2细胞系和含荧光标记的低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)测定生物学活性;采用液相检测系统(CAD检测器)检测聚山梨酯20含量.结果 PCSK9单克隆抗体样品存在特征肽段,肽指纹图谱与参比品图谱一致,且含有特异性抗体;样品主峰区、酸性峰区、碱性峰区的相对百分含量分别为(49.27±0.38)％、(46.44±0.35)％、(4.28±0.04)％;"重链+轻链"峰、非糖基重链峰和低分子量物质峰相对百分含量分别为(94.16±0.82)％、(4.11±0.76)％、(0.85±0.20)％,主峰、非糖基化主峰和低分子量物质峰相对百分含量分别为(94.27±0.22)％、(2.85±0.08)％、(2.88±0.15)％;单体、高分子量物质和低分子量物质相对百分含量分别为(98.30±0.03)％、(0.75+0.01)％、(0.96±0.02)％;G0F、G1F、G2F、非岩藻糖基化糖型(G0+G1+G2+Man5)相对百分含量分别为(39.31±0.54)％、(34.69+0.41)％、(9.09±0.14)％、(12.61±0.50)％;相对生物学活性为参比品的(101.64±3.61)％;聚山梨酯20含量为(0.012±0.000 3)％.结论 本研究建立了 PCSK9单克隆抗体关键质量属性的质控方法,可确保该产品的安全、有效和质量可控.

建立了 HPLC-CAD法测定舒更葡糖钠(1)原料药中的7种有关物质(2～8).色谱柱采用Poroshell 120 SB-C8柱(4.6 mm×150mm,2.7μm),流动相A为0.5％甲酸溶液,B为甲醇,线性梯度洗脱,流速为0.5 mL/min,柱温为35℃.电雾式检测器(CAD)雾化器温度为35 ℃,过滤常数为3.6 s,数据采集速率为5 Hz.结果表明,3在5～300 μg/mL内线性关系良好,1及其他有关物质均在2～40 μg/mL内线性关系良好.1原料药及各杂质(2～8)的定量限为0.985～1.145 μg/mL,检测限为 0.493～0.573 μg/mL;2～8 的平均回收率(n=9)为 95.6％～99.4％,RSD 为 1.21％～3.32％.该方法准确、重现性好、精密度高,可检测1原料药中的有关物质,为1的质量控制提供了可靠的检测方法.

目的:建立高效液相色谱(HPLC)-电喷雾检测器(CAD)法测定两性霉素B脂质体(L-AMB)中氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC)和磷脂二硬酯酰磷脂酰甘油(DSPG)含量的方法.方法:采用Venusil XBPC 8(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,柱温:30℃;以甲醇-水作为流动相;喷雾压力:56.4psi,喷雾温度:55℃;梯度洗脱,流速1.0mL·min-1.结果:L-AMB各磷脂在5～60 mg·mL-1内与峰面积呈良好的线性关系.HSPC平均回收率为100.06％,平均RSD为0.42;DSPG平均回收率100.03％,平均RSD为0.55.按HPLC-CAD色谱条件测定L-AMB中HSPC、DSPG含量分别为1497.66 mg·L-1、4710.93 mg·L-1,且无溶血磷脂检出.采用HPLC-ELSD法验证,HSPC、DSPG含量分别为1495.28 mg·L-1、4712.71 mg·L-1,两种方法测定HSPC、DSPG含量基本一致.结论:HPLC-CAD测定L-AMB中HSPC、DSPG含量操作简单、准确,可准确测定L-AMB中脂质体的质量.

目的:应用高效液相色谱联用电喷雾检测器(HPLC-CAD)分析不同植物中棉子糖系列寡糖(RFOs).方法:采用微波辅助提取法制备RFOs提取物,再应用HPLC-CAD进行定性、定量分析.色谱条件:采用氨基色谱柱(4.6 mm×250 mm,3.5 μm),流动相为水(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～20 min,75％B→45％B,20-22 min,45％B→75％B),流速为1 mL· min-1,柱温为30℃.外标一点法定量.结果:供试品溶液在48 h内稳定性较好,RSD小于2.8％;低、中、高浓度供试品溶液的重复性RSD分别小于3.6％、3.8％和3.1％.RFOs在豆科植物种子中分布广泛,其在水苏(总量426.19 mg· g-1)和生地黄(总量373.40 mg·g-1)中含量较高,而在车前草(总量1.08 mg·g-1)中含量极低.结论:水苏和地黄有潜力成为开发RFOs新资源.

目的:探讨糖类成分用于鉴别蜂蜜真伪的可行性.方法:通过对14批天然采集蜂蜜和14批市售蜂蜜中糖类成分比较,了解天然蜂蜜糖类特征.首先利用薄层色谱法(TLC法)对蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖等糖类成分进行快速鉴别,采用薄层硅胶板G60,展开剂为正丁醇-异丙醇-醋酸-水(7∶5∶1∶2),显色剂为苯胺-二苯胺-磷酸溶液;再利用高效液相色谱联用电喷雾检测器法(HPLC-CAD法)对果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖进行定量分析,采用氨基分析柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱,流速1 mL· min-1,柱温30℃,进样量5L,N2压力241.325 kPa.结果:天然采集蜂蜜在TLC中具有特征条带且相似,主要为果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖;而3批市售蜂蜜样品中含不同于天然蜂蜜的寡糖条带,可能有外源性糖类掺杂.采用HPLC-CAD定量分析,果糖、葡萄糖、蔗糖及麦芽糖线性范围分别为16.4～493.0、17.4～521.0、0.72～62.3和0.68～64.0 μg· mL-1,线性关系良好(r＞0.998 1),平均回收率在87.0％～112.8％之间,RSD为0.7％～6.1％.14批天然蜂蜜和14批市售蜂蜜中果糖含量分别为43.5％～53.5％和45.4％～54.3％,葡萄糖含量分别为41.3％～50.3％和41.0％～50.2％,均无统计学差异(p＞0.05).此外,蜂蜜中还存在有少量蔗糖(0.41％～6.6％)和麦芽糖(0.64％～1.8％).结论:天然蜂蜜主要合果糖、葡萄糖以及少量蔗糖和麦芽糖,可利用寡糖的存在与否,判断蜂蜜是否有外源性糖类掺入,以评价市售蜂蜜质量.

目的 建立测定硫酸卡那霉素原料及其注射液中有关物质与卡那霉素含量的高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLC-CAD)方法.方法 采用Waters HSS T3色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以0.2 mol/L三氟乙酸水溶液为流动相,流速0.3mL/min,柱温30℃,电喷雾检测器的喷雾器温度为35℃.结果 新建方法对卡那霉素与硫酸盐、有关物质分离良好,精密度、重复性、回收率均满足分析要求.卡那霉素浓度与峰面积线性关系良好(R2＞0.99),检出限可达到6.1ng.采用该方法对单硫酸卡那霉素、硫酸卡那霉素以及硫酸卡那霉素注射液进行了测定,检出的有关物质个数及含量均高于现行标准的结果.结论 新建方法灵敏度更高、分离度更好,能检出更多杂质,可以满足硫酸卡那霉素原料及注射液有关物质及含量测定分析要求.