Background::Head and neck cancers (HNCs) are a heterogeneous group of tumors that progress owing to varied enviromental and genetic risk factors. Viral infections are threatening and adept at altering the expression of cellular transcription factors such as nuclear factor kappa B (NF-κB) and deregulation of other cellular proteins like NF kappa B inhibitor alpha (IκBα). The present study was conducted to detect high-risk genotypes of human papillomavirus (HPV) and protein expression of NF-κB signaling pathway in HNC patients with HPV infection.Methods::For HPV detection, genomic DNA from 152 HNC tumors was extracted formalin-fixed paraffin-embedded tissue DNA kit. For genotyping, polymerase chain reaction (PCR) using a general primer, HPV type-specific primers and agarose gel electrophoresis were performed. Immunohistochemistry (IHC) was also performed on 4-μm thick tissue sections using HPV E6 monoclonal antibody. Protein expression analysis of NF-κB signaling pathway including p50, p65, and IκBα was performed using IHC.Results::PCR analysis showed that 24.3% (37/152) of HNC cases were HPV positive. Among HPV positive, 86.5% (32/37) were tobacco users, while among HPV negative, 66.9% (77/115) were tobacco users. A significant association of HPV positivity and tobacco user was observed by univariate analysis [ P < 0.01; odds ratio (OR): 0.310, 95% confidence interval (CI): 0.110 to 0.870]. More HPV positive patients were with poor oral hygiene (78.3%) when compared with patients with good oral hygiene (21.6%) [ P < 0.03, OR: 2.440, 95% CI: 1.650 to 3.600]. The results of the logistic regression analysis showed that age, tobacco use and oral hygiene are significant predictors ( P < 0.02). PCR and IHC staining results confirmed that HPV16 was predominant among HNC cases (64.8%) when compared with HPV18 (35.2%). Expression of NF-κB proteins (p50, p65, and IκBα inhibitor) were also observed in HPV and non-HPV infected HNC tissues. IHC expression of p50, and p65 showed nuclear staining, while IκBα inhibitor showed cytoplasmic staining. Protein expression in HPV cases was higher as compared to HPV naive cases ( P < 0.05). Conclusions::From the study, it can be established that the use of tobacco, oral hygiene, and HPV infection may be synergistically involved in modulating the expression of NF-κB signaling pathway for the development and progression of HNC in the Pakistani population.

目的:评价高危型人乳头状瘤病毒E6和E7(HR-HPV E6/E7)mRNA对意义不明的不典型鳞状细胞(ASCUS)人群的分流效果。方法:选取2017年河南省信阳市罗山县312例宫颈癌筛查队列中液基细胞学检测结果为ASCUS的人群，所有ASCUS人群均行阴道镜活检和病理学检查，行HPV16或18(HPV16/18)、HR-HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测，以病理学诊断为金标准，分别计算HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA、HPV16/18检测的灵敏度、特异度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、转诊率及其95% CI。 结果:312例ASCUS人群的年龄为(52.6±7.3)岁。病理学诊断为正常的290例人群中，HPV E6/E7 mRNA检测出阳性例数为64例(22.1%)，HR-HPV DNA检测出阳性例数为86(29.7%)，HPV16/18检测阳性例数为19(6.6%)；病理诊断为CIN 2(3例)和CIN 3级(6例)患者中，HPV E6/E7 mRNA和HR-HPV DNA检测的阳性例数均为3和6例。以CIN2+作为疾病终点指标时，HPV E6/E7 mRNA分流ASCUS人群的灵敏度、特异度、PPV、NPV、转诊率分别为100% (95% CI: 72.3~100.0)、77.8% (95% CI: 72.8~82.1)、13.0%(95% CI: 7.2~22.3)、100%(95% CI: 98.4~100.0)、24.7%。与HPV E6/E7 mRNA相比，HR-HPV DNA分流效果的灵敏度与HPV E6/E7 mRNA一致，但特异度低[70.2%(95% CI: 64.8~75.1)]，转诊率较高(32.1%)，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。HPV16/18检测的特异度较高(93.4%，95% CI: 90.0~95.7)，但灵敏度低(30.0%，95% CI：10.8~60.3)。HPV E6/E7 mRNA检测在≥45岁年龄组和<45岁年龄组中分流的灵敏度均为100%，在≥45岁年龄组中分流的特异度为79.0%(95% CI: 73.7~83.5)，比<45岁年龄组的特异度(68.3%，95% CI: 53.0~80.4)高，差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:HPV E6/E7 mRNA检测对ASCUS人群的分流效果优于HR-HPV DNA和HPV16/18，其用于ASCUS人群的分流管理可以避免不必要的阴道镜转诊，同时降低宫颈病变的漏诊。

目的:研究不同检测标志物在宫颈腺癌组织学类型中的诊断价值，及其对患者预后的预测价值。方法:纳入2005—2010年中国医学科学院肿瘤医院宫颈腺癌患者54例，根据2018年国际宫颈腺癌分类标准将宫颈腺癌分为人乳头瘤病毒(HPV)相关性腺癌(HPVA)和非HPV相关性腺癌(NHPVA)。采用全组织切片聚合酶链反应(WTS－PCR)检测宫颈腺癌组织中的高危型人乳头瘤病毒(HR－HPV)DNA，E6/E7 mRNA原位杂交(ISH)技术检测HR－HPV E6/E7 mRNA。随机选取15例WTS－PCR检测阳性的组织样本进行激光显微切割聚合酶链反应(LCM－PCR)，验证WTS－PCR和E6/E7 mRNA ISH两种检测方法的准确性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析标志物鉴别HPVA和NHPVA的效能。对宫颈腺癌患者预后影响因素进行单因素分析和多因素Cox比例风险模型回归分析。结果:54例宫颈腺癌患者中，30例为HPVA，24例为NHPVA。HPVA患者的HR－HPV DNA阳性率为96.7%(29/30)，HR－HPV E6/E7 mRNA阳性率为63.3%(19/30)；NHPVA患者的HR－HPV DNA阳性率为33.3%(8/24)，HR－HPV E6/E7 mRNA阳性率为0(0/24)，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。LCM－PCR检测结果显示，5例患者腺上皮病变区域HR－HPV DNA阳性，余均阴性，与E6/E7 mRNA ISH检测结果一致性强( Kappa＝0.842， P＝0.001)。ROC曲线分析显示，HR－HPV DNA、HR－HPV E6/E7 mRNA和p16表达鉴别HPVA和NHPVA的AUC分别为0.817、0.817和0.692，灵敏度分别为96.7%、63.3%和80.0%，特异度分别为66.7%、100.0%和58.3%。HR－HPV DNA鉴别HPVA和NHPVA的AUC高于p16表达( P＝0.044)。HR－HPV DNA(WTS－PCR检测)阳性与阴性患者的生存率差异无统计学意义( P＝0.156)，而HR－HPV E6/E7 mRNA阳性与阴性患者、p16表达阳性与阴性患者的生存率差异均有统计学意义(均 P<0.05)。多因素Cox回归分析显示，国际妇产科联盟分期( HR＝19.875，95% CI：1.526~258.833)和宫旁受累( HR＝14.032，95% CI：1.281~153.761)是宫颈腺癌患者预后的独立影响因素。 结论:HPV E6/E7 mRNA更能反映宫颈腺癌组织中HPV的感染情况。HR－HPV E6/E7 mRNA与HR－HPV DNA(WTS－PCR检测)鉴别HPVA和NHPVA的效能相近，HR－HPV DNA的灵敏度较高，而HR－HPV E6/E7 mRNA的特异性较高，HR－HPV DNA鉴别HPVA和NHPVA的效能优于p16表达。HR－HPV E6/E7 mRNA和p16表达阳性宫颈腺癌患者的生存率均优于阴性患者。

目的:通过突变整合于宿主细胞中的人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型的 E6、 E7致癌基因，探索预防和治疗宫颈癌的新方法。 方法:以SiHa细胞系为研究对象，设计靶向其内整合的HPV16 E6和 E7基因的小引导RNA(small guide RNA，sgRNA)，将其克隆入CRISPR/Cas9质粒，并应用其将 E6、 E7基因敲除，随后应用错位酶切法和克隆测序检测突变效果，并用细胞迁移与侵袭实验检测细胞的侵袭力。 结果:设计的sgRNA被克隆入CRISPR/Cas9质粒，经测序克隆正确。该质粒转染SiHa细胞后，可以引发靶点DNA的突变，致使 E6和 E7基因密码子改变，无法正确表达。 E6、 E7突变后SiHa细胞侵袭及增殖能力下降( t检验，pCas9组与psgE6-1-1-Cas9组相比， P＝0.0006; pCas9组与psgE7-1-2-Cas9组相比， P＝0.0007)，促进肿瘤抑制因子P53的表达恢复，细胞的恶性度降低。

目的 通过调查吉林省人乳头瘤病毒16型(HPV16)的E6、E7基因变异,评估HPV16基因变异与吉林省地区宫颈癌前病变及宫颈癌发生的相关风险.方法 收集129例HPV16感染的宫颈癌及癌前病变患者的宫颈脱落细胞,提取细胞DNA,以特异性引物用聚合酶链反应法(PCR)扩增E6-E7基因序列,再将E6-E7基因序列与标准的HPV16型基因序列比对,寻找E6-E7基因的突变位点.结果 共发现8个E6突变位点,其中错义突变6个,无义突变位点2个,突变发生率较高的突变位点为:T178G(59/129,45.74％),A131C(10/129,7.75％),T350G(6/129,4.65％),T178A(6/129,4.65％).共发现11个E7基因突变位点,其中错义突变位点6个,无义突变位点5个,突变率较高的位点为A647G(57/129,44.19％),T846C(55/129,42.64％),G666A(34/129,26.36％),T843C(20/129,15.50％).E6、E7 常见的突变位点在宫颈癌组和癌前病变组分布均差异无统计学意义.本研究中仅发现了亚洲变异型和欧洲变异型.经统计学分析发现,吉林省HPV16原型、As、Eur在宫颈癌和癌前病变中的分布差异有统计学意义(P=0.02),其中以亚洲变异型为主.结论 本研究中吉林省仅发现HPV16的As、Eur 2种变异型,且以As变异型为主;在吉林省HPV16 E6、E7常见的变异位点与宫颈病变的进展无关.

目的 探究宫颈病变患者高危人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染筛查方法及应用.方法 选择2018年6月-2020年12月解放军总医院第一医学中心妇产科诊治的1 405例宫颈病变患者为研究对象,分析不同程度宫颈病变患者的HR-HPV感染分布情况,单一型、混合型HR-HPV感染、DNA拷贝量情况,探讨各种筛查策略的有效性.结果 宫颈癌病变患者中炎症613例、低度鳞状上皮内病变(LSIL)461例、高度鳞状上皮内病变(HSIL)311例、宫颈癌(CC)20例.最易导致宫颈病变的HR-HPV感染分型为:82、31、16、68、39、33、35、18;宫颈癌与癌前病变患者易感的HR-HPV分型略有不同:CC组为HPV16、18,癌前病变组为HPV16、58、52、51、31、58、66.在单一型HR-HPV感染中,HPV31、16、52、58、56、18与宫颈病变发生的相关性更高;当DNA拷贝量≥10E4时宫颈病变发生风险升高.在混合HR-HPV感染中,含16、18任两种亚型混合感染组的HSIL及以上占比高于任两种亚型混合感染不含16、18组(P＜0.05).单独采用HR-HPV感染筛查的病理阳性率和病理HSIL+占比与单独采用TCT相当,二者联合筛查并未增加病理阳性检出的敏感度,而联合DNA拷贝量将增加筛查敏感度.结论 以HR-HPV分型感染联合DNA拷贝量检测为主的宫颈病变筛查策略是有效的,应注意将不同型别HR-HPV感染与病变的关系纳入临床建议参考.

目的 探讨前列腺癌中核纤层蛋白A/C(lamin A/C,LMNA)基因第七外显子点突变与LMNA表达差异的相关性.方法 采用高通测序分析了永生化正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)、低侵袭力前列腺癌上皮细胞(PC-3M-2B4)及高侵袭力前列腺癌上皮细胞(PC-3M-1E8)LMNA基因的12个外显子,识别出在RWPE-1与PC-3M-1E8细胞系中C.1159C＞ CA(p.L387LI)点突变,定位在1号染色体156106006.为了验证点突变在前列腺癌患者中的分布情况,PubMed GEO数据库下载了3组数据,分别是100例前列腺癌患者石蜡包埋标本的总RNA测序数据、20例前列腺癌和10例配对正常组织的转录组数据及21种前列腺正常及癌细胞株的测序数据.在1号染色体上选取156105950到156106055范围,设置比对序列CTACGCCTG或者NTACGCCTGTCCCCCAGCCC,每次分析比对长度为50 nt.同时,利用GEO数据库分析了突变点周围序列的特点与功能.最后,转染突变质粒,蛋白质电泳分析LMNA点突变对LMNA蛋白质表达的影响.结果 在所有分析的样品中,1号染色体LMNA外显子7从156106006到156106011的区域内,存在2种错义突变形式:C/CA(p.L387LI)、C/CG (p.L387LV)和4种同义突变形式:C/CT (p.L387L)、C/CA(p.R388R)、C/CT(p.R388R)、C/CG(p.R388R).前列腺癌按格里森(Gleason score,GS)评分系统分组,错义突变的总发生率分别占40％(正常)、11％(GS5-6)、2％ (GS 7)和6％ (GS 8-10).在16种前列腺癌细胞系和5种前列腺良性细胞系中,错义突变的总发生率分别占31％和60％.此外,还发现1号染色体上从156106008到156106066是转录因子结合位点,常见转录因子为PAX5、HEN1(NHLH1)、HTF、P53、MIF1、COMP1和NGFIC (NGF4).通过功能聚类分析,这些转录因子的功能主要集中在染色质重组及调控、RNA代谢过程的正向调节、组蛋白修饰的调控以及程序性细胞死亡的负调节等方面.高表达突变LMNA的细胞系LMNA及磷酸化LMNA蛋白质表达下调.结论 156106006位点突变多发生在前列腺正常组织和前列腺良性细胞株,与LMNA蛋白质表达密切相关,可能是lamin蛋白质异源性表达的机制之一.

目的 对重组人干扰素α2b(rhIFN-α2b)联合洁悠神治疗宫颈持续HPV感染的临床效果及其对端粒酶与HPV16/18 E6蛋白表达的影响进行研究.方法 随机选取2015年1月-2016年1月于常州市第一人民医院进行治疗的宫颈持续人乳头瘤病毒(HPV)感染的108例患者,按照数字随机表法分为观察组和对照组各54例,对照组使用rhIFN-α 2b治疗,观察组在对照组的基础上使用洁悠神治疗.分别对两组患者的疗效、临床指标进行统计,并检测端粒酶与HPV16/18 E6蛋白的表达水平.结果 观察组治疗有效率与对照组比较,差异有统计学意义(x2=5.240,P=0.022);观察组患者治愈时间周、阴道排液时间以及出血时间与对照组比较,差异有统计学意义(t=3.485、4.765、4.365,P=0.001、0.000和0.000),观察组均短于对照组;治疗后观察组的HPVDNA负荷量低于对照组,并且转阴率与对照组比较,差异有统计学意义(x2=6.546,P=0.000);治疗后两组患者的端粒酶阳性率和HPV16/18 E6蛋白阳性率均降低,差异有统计学意义(x2=4.746、4.964,均P=0.000),其中观察组患者端粒酶阳性率和HPV16/18 E6蛋白阳性率均低于对照组.结论 联合使用rhIFN-α 2b和洁悠神治疗宫颈持续HPV感染具有良好的治疗效果,可有效降低端粒酶和HPV16/18 E6蛋白阳性率,并可降低患有宫颈癌的风险.

目的:探讨HPV-16长调控区(LCR)4个E2蛋白结合位点(E2BSs)甲基化水平与宫颈病变的关系.方法:选取单一型HPV-16感染者的宫颈脱落细胞标本59例,分为3组.焦磷酸测序技术定量检测4个E2 BSs序列包含的7个CpG位点的甲基化水平.bDNA技术检测对应标本内E6/E7 mRNA表达水平.分析E2 BSs位点甲基化水平与E6/E7 mRNA水平及宫颈病变程度的相关性.结果:HPV-16 E2 BSs甲基化水平与宫颈病变均呈正相关(rs=0.614,0.599,0.289,0.502,P均<0.05),其中E2BS3与宫颈病变间相关性较弱(rs=0.289,P=0.027).除E2BS3位点(P=0.070),E2BS 1、2及4位点甲基化水平分别在HPV-16无症状感染组、LSIL组和HSIL+组组间的差异均有统计学意义(P均<0.05).LSIL组中,4个E2BSs位点间的甲基化水平差异有统计学意义(χ2=17.672,P=0.001),且E2 BS1位点甲基化水平高于E2 BS 2、3及4位点甲基化水平(P均<0.05).HSIL+组内,4个E2 BSs位点间的甲基化水平比较,差异有统计学意义(χ2=18.387,P=0.000),E2BS1位点甲基化水平高于E2BS3和E2BS4位点(P均<0.05),E2BS3位点甲基化水平最低(P均<0.05).E6/E7 mRNA水平随E2 BS1和2位点甲基化水平升高而升高(rs=0.480,0.467,P均<0.05).E2BS1和E2BS2位点甲基化水平诊断HSIL和SCC病变的ROC曲线下面积(AUC)较大,AUC分别为0.791(95％CI=0.668～0.914)和0.806(95％CI=0.680～0.931),诊断敏感性均为73.9％,特异性分别为72.2％和80.6％.结论:HPV-16 E2 BSs基因甲基化状态与宫颈病变程度存在相关性,E2 BSs甲基化状态有望作为临床上预测宫颈癌前病变及宫颈癌的早期分子指标.

目的:探究HPV 16-E6-DNA对宫颈癌预后预测价值.方法:回顾性分析本院2014年1月至2017年3月收治的72例宫颈癌患者临床资料,抽血化验,采用荧光定量(PCR)技术测定HPV16-E6-DNA病毒载量,按照其检测结果将患者分成两组,即低载量组与高载量组,采用荧光定量(RT-PCR)测定宫颈癌患者组织中的HPV16-E6-DNA病毒载量,利用Kaplan-Meier计算方式计算两组生存率,选用Cox回归分析法分析影响患者5年生存率的因素.结果:HPV16-E6-DNA病毒载量在宫颈癌患者组织表达水平与患者年龄、FIGO分期、淋巴结转移有关(P＜0.05);低载量组患者1、3、5年生存率分别为95.66％、89.31％、74.30％;高载量患者1、3、5年生存率分别是89.10％、62.61％、51.36％,低载量患者的生存率显著高于高载量组(P＜0.05);Cox回归分析结果显示,HPV16-E6-DNA病毒载量以及淋巴结转移均是影响宫颈癌患者预后的重要因素(P＜0.05),有统计学意义.结论:HPV16-E6-DNA病毒对宫颈癌患者预后具有重要预测价值,是宫颈癌根治术后预后监测的重要因子,作为宫颈癌根治术后影响生存率的危险独立因素.