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负载蛋白聚糖4的温度敏感性聚己内酯-聚乙二醇-聚己内酯可注射水凝胶对软骨修复的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨负载蛋白聚糖4(PRG4)的温度敏感性聚己内酯-聚乙二醇-聚己内酯共聚物(PCEC)可注射水凝胶材料表征及修复新西兰兔软骨缺损的效果。方法:2022年3月至2023年6月,利用PCEC温敏性水凝胶负载了PRG4效应因子(PRG4@PCEC),使用扫描电子显微镜观察冷冻干燥的PRG4@PCEC水凝胶的形貌,测量PCEC和PRG4@PCEC水凝胶的最低共溶温度;使用活/死细胞染色技术评估水凝胶的生物安全性;采用雄性新西兰大白兔18只,36个膝关节缺损样本,随机分为3组,其中12个缺损组用PRG4@PCEC水凝胶修复,12个缺损组用PCEC水凝胶修复,12个缺损组为空白对照组,观察水凝胶的软骨修复能力;通过微型计算机断层扫描(Micro-CT)分析软骨下骨再生,标本组织切片苏木精-伊红(HE)、马松(Masson)染色及荧光定量聚合酶链反应(PCR)评估水凝胶对软骨缺损的修复作用。组间比较采用 t检验。 结果:水凝胶具有明显的多孔微观结构,PCEC和PRG4@PCEC水凝胶分别在35 ℃和38 ℃表现出最低共溶温度;激光共聚焦观察活/死细胞染色结果证明PRG4@PCEC水凝胶对于兔软骨细胞具有良好的生物相容性;载有PRG4的水凝胶组在8周时,缺损已经完全被高含量的新生软骨组织填充,表明软骨缺损修复最佳;Micro-CT显示在8周时PCEC组[(37.33±0.39) mm 3]和PRG4@PCEC组[(25.33±0.21) mm 3]软骨下骨缺损体积均小于对照组[(51.57±0.49) mm 3, t=32.19、69.56, P<0.01];切片染色显示PRG4@PCEC水凝胶组软骨下骨有效形成;荧光定量PCR结果显示在4周和8周PCEC组(2.79±0.07、2.18±0.10)与PRG4@PCEC组白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平(1.54±0.07、0.80±0.10)均低于对照组(3.21±0.08、2.54±0.07, t=0.68、4.97、27.63、24.43, P<0.01),同时PCEC组(0.95±0.24、1.45±0.34)和PRG4@PCEC组Ⅱ型胶原蛋白(COL2)基因表达水平(1.19±0.45、1.53±0.26)高于对照组(0.64±0.07、1.01±0.14, t=7.47、0.08、10.70、3.12, P<0.05)。 结论:负载PRG4的温度敏感性PCEC可注射水凝胶具有良好的温度敏感性和生物安全性,对关节软骨缺损有明显修复作用。
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编辑人员丨5天前
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晚期非小细胞肺癌液基细胞学标本的分子检测评估和疗效评价
编辑人员丨5天前
目的:探讨液基细胞学标本基因检测在晚期非小细胞肺癌(NSCLC)分子分型及指导临床靶向治疗的应用价值。方法:收集2015年3月至2017年4月中国医学科学院肿瘤医院412例晚期NSCLC患者的液基细胞学标本和临床资料,其中32例患者有手术后组织病理切片或组织活检标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测表皮生长因子受体(EGFR)、鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)和鼠类肉瘤过滤性毒菌致癌同源体B(BRAF)基因突变,分析基因突变与临床病理学特征的关系,对液基细胞学标本与组织学标本基因检测结果进行一致性检验。对142例使用EGFR-酪氨酸激酶抑制剂(TKI)药物治疗的患者进行临床疗效评价,生存分析采用Kaplan-Meier法。结果:412例液基细胞学标本中,216例(52.4%)发生EGFR突变,36例(8.7%)发生KRAS基因突变,3例(0.7%)发生BRAF基因突变。EGFR突变与性别、病理类型、标本来源有关,其中女性患者EGFR突变率(63.0%)高于男性患者(40.8%, P<0.001),腺癌EGFR突变率(54.3%)高于非腺癌(0.0%, P<0.001)。KRAS突变与性别有关,男性突变率(12.2%)高于女性(5.6%, P=0.016)。3例多基因共突变均为Ⅳ期男性腺癌患者。32例同时有液基细胞学标本与组织学标本的患者中,30例患者的液基细胞学标本与组织学标本基因检测结果一致( Kappa=0.91)。12例组织学与液基细胞学标本均来自转移灶,基因检测结果完全一致( Kappa=1.00);19例组织学标本来自肺部原发灶、液基细胞学标本来自转移灶,18例基因检测结果一致( Kappa=0.92)。EGFR基因突变阳性患者临床应用EGFR-TKI治疗的疾病控制率(DCR)为89.0%(89/100),无进展生存时间(PFS)为13.8个月,均高于EGFR基因突变阴性患者[DCR为30.8%(4/13),中位PFS为1.4个月,均 P<0.01]。 结论:液基细胞学标本与组织学标本的基因检测结果有高度一致性,液基细胞学标本是晚期NSCLC基因检测的重要标本来源。根据液基细胞学标本的基因检测结果进行晚期NSCLC分子分型,并指导EGFR-TKI药物靶向治疗能获得很高的DCR和PFS,具有重要临床价值。
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编辑人员丨5天前
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不同检测标志物在宫颈腺癌中的诊断和预后预测价值评估
编辑人员丨5天前
目的:研究不同检测标志物在宫颈腺癌组织学类型中的诊断价值,及其对患者预后的预测价值。方法:纳入2005—2010年中国医学科学院肿瘤医院宫颈腺癌患者54例,根据2018年国际宫颈腺癌分类标准将宫颈腺癌分为人乳头瘤病毒(HPV)相关性腺癌(HPVA)和非HPV相关性腺癌(NHPVA)。采用全组织切片聚合酶链反应(WTS-PCR)检测宫颈腺癌组织中的高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)DNA,E6/E7 mRNA原位杂交(ISH)技术检测HR-HPV E6/E7 mRNA。随机选取15例WTS-PCR检测阳性的组织样本进行激光显微切割聚合酶链反应(LCM-PCR),验证WTS-PCR和E6/E7 mRNA ISH两种检测方法的准确性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析标志物鉴别HPVA和NHPVA的效能。对宫颈腺癌患者预后影响因素进行单因素分析和多因素Cox比例风险模型回归分析。结果:54例宫颈腺癌患者中,30例为HPVA,24例为NHPVA。HPVA患者的HR-HPV DNA阳性率为96.7%(29/30),HR-HPV E6/E7 mRNA阳性率为63.3%(19/30);NHPVA患者的HR-HPV DNA阳性率为33.3%(8/24),HR-HPV E6/E7 mRNA阳性率为0(0/24),差异均有统计学意义(均 P<0.001)。LCM-PCR检测结果显示,5例患者腺上皮病变区域HR-HPV DNA阳性,余均阴性,与E6/E7 mRNA ISH检测结果一致性强( Kappa=0.842, P=0.001)。ROC曲线分析显示,HR-HPV DNA、HR-HPV E6/E7 mRNA和p16表达鉴别HPVA和NHPVA的AUC分别为0.817、0.817和0.692,灵敏度分别为96.7%、63.3%和80.0%,特异度分别为66.7%、100.0%和58.3%。HR-HPV DNA鉴别HPVA和NHPVA的AUC高于p16表达( P=0.044)。HR-HPV DNA(WTS-PCR检测)阳性与阴性患者的生存率差异无统计学意义( P=0.156),而HR-HPV E6/E7 mRNA阳性与阴性患者、p16表达阳性与阴性患者的生存率差异均有统计学意义(均 P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,国际妇产科联盟分期( HR=19.875,95% CI:1.526~258.833)和宫旁受累( HR=14.032,95% CI:1.281~153.761)是宫颈腺癌患者预后的独立影响因素。 结论:HPV E6/E7 mRNA更能反映宫颈腺癌组织中HPV的感染情况。HR-HPV E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA(WTS-PCR检测)鉴别HPVA和NHPVA的效能相近,HR-HPV DNA的灵敏度较高,而HR-HPV E6/E7 mRNA的特异性较高,HR-HPV DNA鉴别HPVA和NHPVA的效能优于p16表达。HR-HPV E6/E7 mRNA和p16表达阳性宫颈腺癌患者的生存率均优于阴性患者。
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编辑人员丨5天前
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毛蕊花糖苷对脑出血小鼠的脑保护作用及其与Toll样受体4介导信号通路的关系
编辑人员丨5天前
目的:探讨毛蕊花糖苷(VB)对脑出血(ICH)小鼠的脑保护作用及其是否与抑制Toll样受体4(TLR4)介导的急性炎性反应有关。方法:采用8周龄C57BL/6雄性小鼠进行研究,其中野生型40只,TLR4基因敲除(TLR4 -/-)20只。按照完全随机方法将野生型小鼠分为假手术组、ICH组,ICH后VB治疗组(ICH+VB 15 mg/kg或30 mg/kg),将TLR4 -/-组小鼠分为TLR4 -/-+ICH组和TLR4 -/-+ICH+VB(30 mg/kg)组,每组小鼠均为10只。采用右侧纹状体注射细菌胶原酶Ⅶ的方法构建ICH模型。模型建立成功(改良Garcia评分≤10分)后分别于小鼠腹腔注射VB(15 mg/kg或30 mg/kg)或等体积生理盐水,1次/d,连续3 d。采用改良Garcia评分评价脑功能损伤情况;取脑组织切片后计算脑血肿面积以评估出血量,采用干湿比法计算脑组织含水量;采用TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡率;采用免疫荧光染色(IF)法检测脑组织Iba-1的相对表达量;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验和蛋白质免疫印迹法(WB)检测TLR4及其下游炎症介质[核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1β及IL-6]的表达。比较野生型小鼠组间及TLR4 -/-小鼠组间上述指标的差异。取出生2 h内的TLR4 -/-乳鼠皮质组织培养原代神经元,采用Transwell小室将神经元与小鼠小胶质细胞株(BV2细胞)共培养,并分别用红细胞裂解物及红细胞裂解物+VB(50 μmol/L)处理24 h,采用IF法观察神经元NeuN蛋白的表达。 结果:与ICH组相比,VB治疗组(尤其是ICH+VB 30 mg/kg组)小鼠的致良Garcia评分均显著升高(均 P<0.05);假手术组、ICH组、ICH+VB 15 mg/kg组、ICH+VB 30 mg/kg组脑出血量分别为0 mm 3、(7.33±1.99)mm 3、(3.19±0.47)mm 3、(1.66±0.26)mm 3,脑组织含水量分别为(79.00±0.50)%、(85.00±0.75)%、(81.50±0.50)%、(80.25±0.25)%,神经元的凋亡率分别为(4.8±2.0)%、(38.7±6.8)%、(21.5±6.9)%、(9.8±4.2)%,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。IF结果显示,ICH组脑组织Iba-1的相对表达量明显高于VB治疗组(均 P<0.05)。qRT-PCR和WB结果显示,与ICH组比较,VB治疗组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA和蛋白的相对表达量均降低(均 P<0.05)。TLR4 -/-+ICH+VB组与TLR4 -/-+ICH组比较,改良Garcia评分、脑组织含水量、神经元凋亡率的差异均无统计学意义(均 P>0.05)。与BV2细胞共培养的TLR4 -/-乳鼠神经元加入红细胞裂解物与加入红细胞裂解物+VB处理后NeuN蛋白的表达差异无统计学意义( P=0.872)。 结论:VB可改善ICH后小鼠的神经功能缺损,减少ICH量、减轻脑水肿程度及抑制细胞凋亡,其机制可能与通过抑制TLR4信号通路,减少小胶质细胞的激活以及促炎细胞因子的释放有关。
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编辑人员丨5天前
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毛蕊花糖苷对脑出血小鼠的脑保护作用及其与Toll样受体4介导信号通路的关系
编辑人员丨2024/7/20
目的 探讨毛蕊花糖苷(VB)对脑出血(ICH)小鼠的脑保护作用及其是否与抑制Toll样受体4(TLR4)介导的急性炎性反应有关.方法 采用8周龄C57BL/6雄性小鼠进行研究,其中野生型40只,TLR4基因敲除(TLR4-/-)20只.按照完全随机方法将野生型小鼠分为假手术组、ICH组,ICH后VB治疗组(ICH+VB15mg/kg或30mg/kg),将TLR4-/-组小鼠分为TLR4-/-+ICH组和TLR4-/-+ICH+VB(30 mg/kg)组,每组小鼠均为10只.采用右侧纹状体注射细菌胶原酶Ⅶ的方法构建ICH模型.模型建立成功(改良Garcia评分≤10分)后分别于小鼠腹腔注射VB(15 mg/kg或30 mg/kg)或等体积生理盐水,1次/d,连续3 d.采用改良Garcia评分评价脑功能损伤情况;取脑组织切片后计算脑血肿面积以评估出血量,采用干湿比法计算脑组织含水量;采用TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡率;采用免疫荧光染色(IF)法检测脑组织Iba-1的相对表达量;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验和蛋白质免疫印迹法(WB)检测TLR4及其下游炎症介质[核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子a(TNF-α)、白细胞介素(IL)1β及IL-6]的表达.比较野生型小鼠组间及TLR4-/-小鼠组间上述指标的差异.取出生2 h内的TLR4-/-乳鼠皮质组织培养原代神经元,采用Transwell小室将神经元与小鼠小胶质细胞株(BV2细胞)共培养,并分别用红细胞裂解物及红细胞裂解物+VB(50 μmol/L)处理24 h,采用IF法观察神经元NeuN蛋白的表达.结果 与ICH组相比,VB治疗组(尤其是ICH+VB30 mg/kg组)小鼠的致良Garcia评分均显著升高(均P<0.05);假手术组、ICH组、ICH+VB 15 mg/kg组、ICH+VB 30 mg/kg 组脑出血量分别为0 mm3、(7.33±1.99)mm3、(3.19±0.47)mm3、(1.66±0.26)mm3,脑组织含水量分别为(79.00±0.50)%、(85.00±0.75)%、(81.50±0.50)%、(80.25±0.25)%,神经元的凋亡率分别为(4.8±2.0)%、(38.7±6.8)%、(21.5±6.9)%、(9.8±4.2)%,差异均有统计学意义(均P<0.05). IF结果显示,ICH组脑组织Iba-1的相对表达量明显高于VB治疗组(均P<0.05).qRT-PCR和WB结果显示,与ICH组比较,VB治疗组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6 的mRNA和蛋白的相对表达量均降低(均P<0.05). TLR4-/-+ICH+VB组与TLR4-/-+ICH组比较,改良Garcia评分、脑组织含水量、神经元凋亡率的差异均无统计学意义(均P>0.05).与BV2细胞共培养的TLR4-/-乳鼠神经元加入红细胞裂解物与加入红细胞裂解物+VB处理后NeuN蛋白的表达差异无统计学意义(P=0.872).结论 VB可改善ICH后小鼠的神经功能缺损,减少ICH量、减轻脑水肿程度及抑制细胞凋亡,其机制可能与通过抑制TLR4信号通路,减少小胶质细胞的激活以及促炎细胞因子的释放有关.
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编辑人员丨2024/7/20
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Apelin-13对缺血再灌注损伤大鼠视网膜血管新生的作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究Apelin-13是否具有促进大鼠视网膜血管新生的作用.方法 采用腹腔注射戊巴比妥钠全身麻醉于左眼和右眼均建立大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型.利用玻璃体注射技术,大鼠右眼视网膜玻璃体注射250pmol/μl的Apelin-13多肽作为实验组,左眼注射磷酸盐缓冲溶液(PBS)作为对照组.采用免疫荧光染色法,利用荧光共聚焦显微镜的分层扫描功能分别对视网膜表层和深层血管进行拍照,分析视网膜血管新生情况;大鼠玻璃体注射Apelin-13多肽2周后处死大鼠,收取视网膜组织.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Apelin-13(Apln)及其受体(Aplnr)的mRNA水平;免疫印迹检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.对视网膜石蜡标本纵切片进行过碘酸雪夫苏木精(PASH)染色,在400倍的放大倍数下,同一个视网膜上分别在外周和中央各取两个视野拍照,计算视网膜节细胞层(GCL)中的细胞核总数和视野中视网膜的长度.结果 玻璃体注射250 pmol/μlApelin-13可引起视网膜深层血管新生,表现为视网膜深层血管分支数的增加,并可引起视网膜星形胶质细胞的激活,GFAP蛋白水平的上升以及神经节细胞的缺失.结论 Apelin-13多肽能引起视网膜深层血管一定程度的血管增生,这种促进血管生长的作用在视网膜表层血管未见明显表现.
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编辑人员丨2023/8/6
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肘关节假体周围感染诊治进展
编辑人员丨2023/8/6
肘关节假体周围感染(PJI)是全肘关节置换术后最严重的并发症之一.新型诊断技术如关节滑液聚合酶链反应(PCR)和蛋白分析、超声波法或涡旋法取样行微生物培养等对肘关节PJI有较好的敏感性和特异性,术中冰冻组织切片法是非常可靠的诊断手段.而脱氧葡萄糖-正电子发射断层扫描(FDG-PET)等影像学检查不推荐应用于肘关节PJI的诊断.肘关节PJI治疗主要为抗感染治疗和手术治疗,二期假体置换术是最佳术式,保留假体清创术适用于假体功能良好的急性非表皮葡萄球菌肘关节PJI,一期假体置换术在肘关节PJI治疗中效果不佳,骨重建可应用于肘关节PJI合并关节周围严重骨丢失.该文就肘关节PJI诊治进展作一综述.
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编辑人员丨2023/8/6
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大鼠心肌重构中心肌转化生长因子-β1的表达和血清B型尿钠肽水平及卡维地洛的干预效果
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究异丙基肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心肌重构中心肌转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达和血清 B 型尿钠肽(BNP)水平及卡维地洛的干预效果。方法30只健康雄性 SD 大鼠,采用随机数字表法分为3组:(1)对照组10只,背部皮下注射9 g/L 盐水5 mL/(kg·d),10 d 后予9 g/L 盐水10 mL/(kg·d)灌胃4周;(2)模型组10只,背部皮下注射 ISO 5 mg/(kg·d),10 d 后予9 g/L 盐水10 mL/(kg·d))灌胃4周;(3)治疗组10只,背部皮下注射 ISO 5 mg/(kg·d),10 d 后予卡维地洛10 mg/(kg·d)连续灌胃4周。处死全部大鼠,计算每只大鼠的心重指数(CWI);制作病理切片、HE 染色、Masson 染色观察心肌组织病理改变;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织中 TGF-β1 mRNA 表达;免疫组织化学染色和 Western blot 检测心肌组织中TGF-β1蛋白表达;酶联免疫吸附试验检测血清 BNP 水平。结果1.光镜下病理改变:对照组心肌未见明显病理改变,模型组心肌细胞变性、肥大、水肿、坏死及胶原纤维增生程度重于治疗组。2.CWI:模型组[(3.31±0.07)mg/g]较治疗组[(3.03±0.04)mg/g]明显增高,治疗组较对照组[(2.98±0.10)mg/g]明显增高,3组间差异有统计学意义(F =54.383,P =0.000);两两比较,差异亦均有统计学意义(P 均<0.01)。3.心肌组织 TGF-β1:模型组较治疗组明显增高,治疗组较对照组明显增高,3组间差异有统计学意义(F =13.620,P =0.000);两两比较,差异亦均有统计学意义(P 均<0.01)。4.血清 BNP:模型组[(61.13±2.00) ng/L]较治疗组[(57.08±1.52)ng/L]明显增高,治疗组较对照组[(51.56±1.80)ng/L]明显增高,3组间差异有统计学意义(F =72.810,P =0.000);两两比较,差异亦均有显著性意义(P 均<0.01)。结论ISO 诱导的大鼠心肌重构中,心肌 TGF-β1表达上调,血清 BNP 水平升高;卡维地洛干预能使心肌 TGF-β1表达下调、血清BNP 水平下降,从而抑制心肌重构、改善心功能。
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编辑人员丨2023/8/6
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褪黑素对肝内胆汁淤积大鼠肝组织NO、MDA、GSH及NADPH的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究褪黑素对肝内胆汁淤积大鼠的干预作用及氧化应激干扰的相关机制.方法:腹腔注射α-萘异硫氰酸酯建立肝内胆汁淤积大鼠模型,给予褪黑素灌胃进行干预治疗.检测肝功能生化指标,进行肝组织病理学观察以评价模型及药效;TBA法、微板法检测肝组织匀浆中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量,全自动定量易Western检测(WES)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)蛋白/核酸在肝组织中的表达水平.结果:血清肝功能生化检测结果及肝脏病理组织切片观察结果显示α-萘异硫氰酸酯较为成功地复制了肝内胆汁淤积大鼠模型,褪黑素对该模型有较好的干预作用.与正常组相比,模型组大鼠肝组织GSH显著降低(P<0.05),NO、MDA显著升高(P<0.01);经褪黑素干预后,与模型组相比,褪黑素组大鼠肝组织GSH显著升高(P<0.05),NO、MDA显著降低(P<0.01);各组大鼠肝组织NADPH蛋白/核酸表达无统计学差异(P>0.05).结论:褪黑素对肝内胆汁淤积大鼠干预作用显著,可有效改善肝内胆汁淤积大鼠的氧化应激状态;抗氧化应激机制为褪黑素干预肝内胆汁淤积大鼠模型的重要机制之一,具有进一步深入研究的意义.
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编辑人员丨2023/8/6
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直接原位聚合酶链反应检测尖锐湿疣中的人乳头瘤病毒
编辑人员丨2023/8/6
评价用直接原位聚合酶链反应(PCR)技术辅助诊断尖锐湿疣(CA)的价值及观察人乳头瘤病毒(HPV)在CA中的组织学分布模式。25例CA中,10例具典型组织学特征的CA均有HPV分布,主要位于表皮浅层,另11例缺乏典型空泡细胞的CA在颗粒层或棘细胞全层测得HPV.直接原位PCR通过标记生物素的寡核苷酸在扩增时直接掺入结合,再用免疫组织化学测定,能在石蜡切片上将病毒检测结果与组织学变化直接相比,有助于病理学家对可疑损害作HPV感染的分析。
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编辑人员丨2023/8/6
