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热休克蛋白90在非小细胞肺癌中的研究进展
编辑人员丨1天前
肺癌是较为常见的癌症,也是致死率最高的癌症之一,其中非小细胞肺癌(NSCLC)发病率占总发病率80%以上,治疗效果不佳且存活率较低。热休克蛋白90 (HSP90)是在遗传上具有高度保守特点的热休克蛋白成员之一。HSP90作为一种分子伴侣,在其底物蛋白进行正确折叠再折叠中起到重要作用。HSP90在肿瘤的发生、发展和预后中发挥着重要的作用,近年来以HSP90为靶点来治疗NSCLC是目前治疗的重要方法之一,本文就热休克蛋白90在NSCLC的研究进展作一综述。
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编辑人员丨1天前
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Hsp90与SIRT1相互作用对肺癌细胞发生EMT的调控作用
编辑人员丨1天前
目的:探讨热休克蛋白90(Hsp90)与沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)的相互作用及其对肺癌A549细胞发生上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:采用5 μg/L转化生长因子-β1(TGF-β1)作用于肺癌A549细胞建立EMT模型,分为对照组和TGF-β1组;采用免疫共沉淀法检测肺癌A549细胞中Hsp90与SIRT1的相互作用;采用RNA干扰技术沉默Hsp90基因的表达,分为TGF-β1组、TGF-β1+siRNA-Hsp90-neg组、TGF-β1+siRNA-Hsp90组;采用Transwell侵袭实验研究Hsp90与SIRT1的相互作用对肺癌A549细胞侵袭能力的影响;采用蛋白质印迹法分别检测Hsp90、SIRT1、上皮钙黏素以及波形蛋白的表达情况,观察抑制Hsp90表达对SIRT1蛋白稳定性及肺癌A549细胞EMT的影响。结果:采用TGF-β1诱导48 h后,肺癌A549细胞呈现EMT变化,对照组和TGF-β1组Hsp90蛋白的相对表达量分别为0.45±0.05、1.31±0.06,SIRT1蛋白的相对表达量分别为0.29±0.04、0.95±0.08,差异有统计学意义( t=10.98, P=0.018; t=7.39, P=0.028)。免疫共沉淀结果显示,肺癌A549细胞中Hsp90和SIRT1蛋白之间存在相互作用;TGF-β1组、TGF-β1+siRNA-Hsp90-neg组、TGF-β1+siRNA-Hsp90组Hsp90蛋白的相对表达量分别为0.75±0.07、0.63±0.06、0.23±0.05,差异具有统计学意义( F=18.85, P=0.012),上述3组SIRT1蛋白的相对表达量分别为0.99±0.08、0.97±0.12、0.35±0.05,差异具有统计学意义( F=16.52, P=0.014),TGF-β1+siRNA-Hsp90组细胞中Hsp90和SIRT1表达水平均显著低于TGF-β1组( P=0.019, P=0.016)。上述3组通过Matrigel基质胶的细胞数量分别为378.13±27.70、323.52±19.82、142.51±22.54,差异具有统计学意义( F=27.35, P=0.022),TGF-β1+siRNA-Hsp90组通过Matrigel基质胶的细胞数量明显少于TGF-β1组( P=0.028)。上述3组上皮钙黏素蛋白相对表达量分别为0.31±0.02、0.34±0.04、0.63±0.05,差异具有统计学意义( F=19.39, P=0.031),波形蛋白相对表达量分别为0.33±0.02、0.27±0.05、0.09±0.03,组间差异具有统计学意义( F=12.58, P=0.012),TGF-β1+siRNA-Hsp90组细胞中上皮钙黏素表达水平显著高于TGF-β1组( P=0.017),而波形蛋白表达水平显著低于TGF-β1组( P=0.023)。 结论:Hsp90与SIRT1存在相互作用,抑制Hsp90表达可导致SIRT1蛋白水平降低,Hsp90可能发挥分子伴侣功能来维持SIRT1蛋白构象稳定,Hsp90与SIRT1的相互作用可能是肺癌A549细胞发生EMT并增强侵袭能力的分子机制之一。
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编辑人员丨1天前
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负压微环境对人脐静脉血管内皮细胞新生的影响及其机制
编辑人员丨1天前
目的:探究负压微环境对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)新生的影响及其机制。方法:采用实验研究方法。取第3~5代对数生长期HUVEC进行后续实验。取3批细胞,各批次细胞均分为常规培养24 h的正常对照组和单纯负压处理组以及加入17-丙烯胺基-17-去甲氨基格尔德霉素(17-AAG)培养24 h的单纯17-AAG组与17-AAG+负压处理组,另采用自行设计研发的全自动三维细胞梯度负压加载装置对2个负压处理组细胞行持续8 h的间歇负压吸引(负压值为-5.33 kPa,吸引30 s、暂停10 s),第1个批次细胞处理完成后于培养0(即刻)、24、48、72 h,采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖水平,样本数为6;第2个批次细胞处理完成后进行划痕试验,于划痕后12 h,在倒置相差显微镜下观察细胞迁移情况后计算细胞迁移率,样本数为3;第3个批次细胞处理完成后进行小管形成实验,于培养6 h,在倒置相差显微镜下观察成管情况后计算细胞成管总长度与分支节点数,样本数为3。取细胞,分为正常对照组、单纯负压处理组、17-AAG+负压处理组,同前相应组别进行处理,处理完成后,采用蛋白质印迹法检测细胞中热休克蛋白90(HSP90)、窖蛋白1、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、eNOS磷酸化位点1177蛋白表达并计算eNOS磷酸化位点1177/eNOS比值(样本数为3),采用免疫共沉淀(共沉淀HSP90与窖蛋白1、窖蛋白1与eNOS)与蛋白质印迹法检测各组细胞中窖蛋白1、eNOS的蛋白表达(样本数为3),采用免疫荧光双重染色法评估细胞中HSP90与窖蛋白1、窖蛋白1与eNOS的蛋白共定位情况。通过HADDOCK 2.4蛋白质-蛋白质对接程序对窖蛋白1和eNOS进行分子对接预测。数据分析采用析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD法。结果:与正常对照组相比,单纯17-AAG组细胞增殖水平于处理完成后培养24、48、72 h均明显降低( P<0.01),单纯负压处理组细胞增殖水平于处理完成后培养24、48、72 h均明显升高( P<0.01);与单纯17-AAG组相比,17-AAG+负压处理组细胞增殖水平于处理完成后培养48、72 h均明显升高( P<0.05或 P<0.01);与单纯负压处理组相比,17-AAG+负压处理组细胞增殖水平于处理完成后培养24、48、72 h均明显降低( P<0.01)。划痕后12 h,与正常对照组的(39.9±2.7)%相比,单纯17-AAG组细胞迁移率明显降低[(10.7±2.7)%, P<0.01],单纯负压处理组细胞迁移率明显升高[(61.9±2.4)%, P<0.01];与单纯17-AAG组相比,17-AAG+负压处理组细胞迁移率明显升高[(37.7±3.7)%, P<0.01];与单纯负压处理组相比,17-AAG+负压处理组细胞迁移率明显降低( P<0.01)。处理完成后培养6 h,与正常对照组相比,单纯17-AAG组细胞成管总长度明显缩短( P<0.05)且分支节点数明显减少( P<0.05),单纯负压处理组细胞成管总长度明显延长( P<0.01)且分支节点数明显增加( P<0.01);与单纯17-AAG组相比,17-AAG+负压处理组细胞成管分支节点数明显增加( P<0.05);与单纯负压处理组相比,17-AAG+负压处理组细胞成管总长度明显缩短( P<0.01)且分支节点数明显减少( P<0.01)。蛋白质印迹法检测显示,处理完成后,3组细胞中eNOS、窖蛋白1蛋白表达总体比较,差异均无统计学意义( P>0.05);单纯负压处理组细胞中HSP90蛋白表达与eNOS磷酸化位点1177/eNOS比值均明显高于正常对照组( P<0.01),17-AAG+负压处理组细胞中HSP90蛋白表达与eNOS磷酸化位点1177/eNOS比值均明显低于单纯负压处理组( P<0.01)。处理完成后免疫共沉淀与蛋白质印迹法检测显示,与正常对照组相比,单纯负压处理组细胞中窖蛋白1蛋白表达明显升高( P<0.01),eNOS蛋白表达明显降低( P<0.05);与单纯负压处理组相比,17-AAG+负压处理组处理完成后细胞中窖蛋白1蛋白表达明显降低( P<0.01),eNOS蛋白表达明显升高( P<0.01)。处理完成后,与正常对照组相比,单纯负压处理组细胞中HSP90与窖蛋白1的蛋白共定位明显增多,窖蛋白1与eNOS的蛋白共定位明显减少;与单纯负压处理组比,17-AAG+负压处理组细胞中HSP90与窖蛋白1的蛋白共定位明显减少,窖蛋白1与eNOS的蛋白共定位明显增多。分子对接预测提示,窖蛋白1与eNOS相互作用较强,抑制eNOS 1177位点的磷酸化。 结论:负压微环境可能通过促进HUVEC中HSP90结合窖蛋白1进而抑制窖蛋白1结合eNOS,以解除窖蛋白1对eNOS 1177位点磷酸化的抑制,从而促进HUVEC增殖、迁移和成管,最终促进HUVEC新生。
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编辑人员丨1天前
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热休克蛋白90在乳腺癌中的临床研究进展
编辑人员丨1天前
乳腺癌已成为全球最常见的恶性肿瘤。热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)是一类分子伴侣,可促进蛋白质折叠,并维持蛋白的稳定性。HSP90包括HSP90α、HSP90β、GRP94和TRAP1等4种亚型。研究发现,HSP90表达水平在乳腺癌等恶性肿瘤中明显升高,且与肿瘤的发生发展密切相关,同时针对HSP90这一靶点的抑制剂研究也备受关注。本文综述了4种HSP90亚型在乳腺癌中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系,讨论HSP90各亚型特异性抑制剂在乳腺癌中的相关研究进展,分析HSP90作为乳腺癌预后监测生物标志物和治疗靶点的应用前景。
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编辑人员丨1天前
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基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS和网络药理学研究银甲片治疗盆腔炎的有效成分及作用机制
编辑人员丨1个月前
目的:研究银甲片治疗盆腔炎的有效成分及作用机制.方法:利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS),结合文献与对照品比对鉴定银甲片的化学成分.将化学成分和盆腔炎疾病的交集靶点导入String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;通过DAVID数据库进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;采用Cytoscape 3.9.1 软件构建药材-成分-靶点-通路可视化图;利用Maestro 11.9 软件进行分子对接.结果:从银甲片中共鉴定 58 个化学成分,包含黄酮类、有机酸类、萜类、生物碱类.PPI分析得到类固醇受体辅激活因子(SRC)、热休克蛋白 90α家族A类成员 1(HSP90AA1)、磷脂酰肌醇 3-激酶调节亚基 1(PIK3R1)、信号转导和转录激活因子 3(STAT3)、丝裂原活化蛋白激酶 3(MAPK3)5 个核心靶点;KEGG 结果显示银甲片主要通过磷脂酰肌醇 3-激酶-蛋白激酶 B(PI3K-Akt)、MAPK 等通路发挥作用.分子对接结果表明,木犀草苷、山柰酚、木犀草素、香叶木素等成分与 SRC、HSP90AA1、PIK3R1 等 5 个核心靶点的对接构象稳定.结论:银甲片可能通过木犀草苷、山柰酚、木犀草素、香叶木素、芹菜素等活性成分调控PI3K-Akt、MAPK等通路发挥治疗盆腔炎作用.
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编辑人员丨1个月前
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基于网络药理学和实验验证探究左归丸抑制头颈部鳞状细胞癌的作用机制
编辑人员丨2024/7/13
目的 基于网络药理学和体外实验探究左归丸作用于头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的靶点并分析潜在机制.方法 自2022年11月至2023年3月分别通过TCMSP、BATMAN-TCM、GeneCards、CTD、OMIM数据库筛选左归丸的活性成分并筛选左归丸作用于HNSCC的潜在靶点;使用String数据库构建潜在靶点互作网络,并进行多步拓扑分析筛选出核心靶点;使用DAVID和Metascape数据库对潜在靶点进行富集分析;最后运用Auto Dock Vina进行核心成分与靶点的分子对接并通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、蛋白质印迹法验证左归丸对HNSCC的治疗作用及机制.结果 左归丸的8种活性成分具有487个药物靶点,其中440个为HNSCC相关基因;两步拓扑结构分析得到表皮生长因子(EGFR)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、热休克蛋白90α家族A类成员1(HSP90AA1)、核因子kappa B激酶亚基β抑制剂(IKBKB)和螺旋环螺旋结构域扩散激酶(CHUK)5个核心靶点;富集结果提示左归丸通过影响多种生物学功能和信号通路在HNSCC中发挥作用;分子对接结果显示,左归丸与核心靶点之间结合稳定.体外实验显示,与对照组相比,左归丸处理组显著抑制了WSU-HN6和CAL-27细胞增殖能力(P<0.001)并且可以降低CCND1,IKBKB和CHUK(P<0.05)的蛋白表达水平.结论 左归丸能够靶向多条促癌信号通路从而对HNSCC起到抑制作用.
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编辑人员丨2024/7/13
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基于网络药理学和分子对接技术探讨药桑总黄酮治疗肝癌的作用机制
编辑人员丨2024/3/16
目的 基于网络药理学和分子对接技术探讨药桑总黄酮治疗肝癌的作用机制.方法 通过中国知网、万方数据知识服务平台、维普中文期刊服务平台、PubMed以及SwissADME等数据库预测并筛选药桑总黄酮活性成分及靶点信息.通过在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)和GeneCards数据库获取肝癌疾病靶点及药桑有效黄酮类成分与肝癌的交集基因,将交集基因导入STRING数据库后构建蛋白质相互作用(PPI)网络,通过Cytoscape 3.9.1软件预测核心蛋白并构建"药物-药效成分-靶点"网络图.通过Metascape数据库和微生信对作用靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.运用AutoDock-Tools软件将核心成分与关键靶点进行分子对接.结果 药桑有效黄酮类成分共21种,基于主要活性成分筛选获得293个靶点,肝癌疾病靶点8949个,取交集获得270个靶点,其中关键靶点为非受体酪氨酸激酶SRC、磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1(PIK3R1)、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、热休克蛋白90α家族A类成员1(HSP90AA1)、蛋白激酶B(AKT)、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)、表皮生长因子受体(EGFR)、Janus激酶2(JAK2)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、蛋白酪氨酸激酶2(PTK2).飞燕草色素、木犀草素、山奈酚可能是药桑总黄酮治疗肝癌的关键成分.GO功能富集分析显示,交集基因主要参与蛋白质磷酸化、细胞对各物质的反应、酶活性、酶结合、蛋白质结合等.KEGG通路富集分析显示,磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/AKT、Ras、erb-b2受体酪氨酸激酶(ERBB)、细胞衰老等信号通路可能是药桑总黄酮治疗肝癌的重要信号通路.结论 药桑总黄酮治疗肝癌的核心靶点是SRC、PIK3R1、PIK3CA、HSP90AA1、AKT等,药桑总黄酮可能通过多靶点、多成分、多途径治疗肝癌.
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编辑人员丨2024/3/16
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基于网络药理学预测水蛭素干预血瘀证治疗IgA肾病的通路和靶点
编辑人员丨2024/1/20
目的 基于网络药理学方法探讨水蛭素通过干预血瘀证治疗IgA肾病(IgAN)的通路及靶点.方法 通过SuperPred与PALM-IST数据库获取水蛭素潜在靶点,使用Genecards和OMIM获取血瘀证与IgAN的相关靶点.将水蛭素和血瘀证的交集靶点导入String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络并进行拓扑学分析,以度值排序前10节点为血瘀证相关的水蛭素核心靶点.在Nephroseq数据库中分析水蛭素核心靶点与IgAN患者临床特征的相关性.结果 水蛭素的204个靶点中有41个靶点与血瘀证(1 047个靶点)相关,其中核心靶点为血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管性血友病因子、丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子、前列腺素内过氧化物合酶、凝血因子Ⅲ、凝血因子Ⅱ(F2)、热休克蛋白90α家族A类成员1(HSP90AA1)、低氧诱导因子1(HIF1A)、基质金属蛋白酶2(MMP2)和雌激素受体1(ESR1).相关性分析结果表明,IgAN患者肾小球中VEGFA、ESR1 mRNA表达与肾小球滤过滤(GFR)呈正相关,HIF1A mRNA表达与GFR呈负相关(均P<0.05);肾小管间质中VEGFA mRNA表达与血肌酐呈负相关,HIF1A mRNA表达与血肌酐呈正相关(均P<0.05);血液中HSP90AA1 mRNA表达与血肌酐呈负相关(P=0.006);肾小管中MMP2 mRNA表达与血肌酐呈正相关(P=0.002);血液中F2 mRNA表达与24 h尿蛋白量呈负相关,肾小管间质中ESR1 mRNA表达与24 h尿蛋白量呈负相关(均P<0.05).结论 VEGFA、F2、HIF1A、HSP9OAA1、MMP2和ESR1是水蛭素干预血瘀证治疗IgAN的关键基因且与临床特征密切相关.
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编辑人员丨2024/1/20
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热休克蛋白90在HBV复制中的作用
编辑人员丨2023/11/25
HBV传播范围广,慢性感染状态多,治愈率低,提高HBV治愈率有助于改善患者的长期预后状况.热休克蛋白90(Hsp90)是广泛存在于生物体内的一种分子伴侣蛋白.近年来越来越多的研究表明,Hsp90与HBV感染有关,在HBV的复制过程中起重要作用,可与病毒的特定蛋白相互作用促进病毒复制,也可与宿主自身蛋白相互作用来发挥功能.本文就近年来Hsp90在HBV复制中的作用相关研究进展作一综述,以期为以Hsp90为靶点的抗HBV药物研发与HBV防治提供新的理论指导和方向.
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编辑人员丨2023/11/25
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金丝桃苷通过抑制HSP90AA1抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭
编辑人员丨2023/11/25
目的 基于网络药理学方法探讨金丝桃苷治疗乳腺癌的靶点及作用机制,并通过体外和体内实验进行验证.方法 通过SwissTarget和TargetNet数据库获取金丝桃苷作用靶点,通过GeneCards数据库获取乳腺癌疾病相关靶点;利用STRING平台构建蛋白质相互作用(PPI)网络;基于肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析交集靶点基因与乳腺癌临床表型的关系.采用CCK-8实验及异种移植实验观察金丝桃苷对乳腺癌细胞体外和体内增殖的影响;采用Transwell实验和划痕实验观察金丝桃苷对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响;构建热休克蛋白(HSP)90α家族A类成员(HSP90AA)1 过表达质粒并转染人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231,观察上调HSP90AA1 表达对乳腺癌增殖、侵袭及迁移的影响.结果 基于网络药理学的分析显示,金丝桃苷作用于乳腺癌的靶点共有包括HSP90AA1 在内的25 个靶点;TCGA数据库的临床数据表明,HSP90AA1 在乳腺癌癌组织中的表达较正常乳腺组织表达明显上调(P<0.05),且其高表达与临床分期晚及预后差密切相关(P<0.05).功能实验中,金丝桃苷显著抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),并能明显抑制裸鼠乳腺癌癌移植瘤的生长(P<0.05).金丝桃苷呈剂量依赖性抑制HSP90AA1 蛋白表达(P<0.05),使用HSP90AA1 过表达质粒上调HSP90AA1 表达则明显逆转金丝桃苷的以上抑癌作用(P<0.05).结论 HSP90AA1 在乳腺癌表达上调,并与乳腺癌的不良预后密切相关;金丝桃苷可通过抑制HSP90AA1 抑制乳腺癌增殖、迁移和侵袭.
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编辑人员丨2023/11/25
