目的:探究负压微环境对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）新生的影响及其机制。方法:采用实验研究方法。取第3~5代对数生长期HUVEC进行后续实验。取3批细胞，各批次细胞均分为常规培养24 h的正常对照组和单纯负压处理组以及加入17-丙烯胺基-17-去甲氨基格尔德霉素（17-AAG）培养24 h的单纯17-AAG组与17-AAG+负压处理组，另采用自行设计研发的全自动三维细胞梯度负压加载装置对2个负压处理组细胞行持续8 h的间歇负压吸引（负压值为-5.33 kPa，吸引30 s、暂停10 s），第1个批次细胞处理完成后于培养0（即刻）、24、48、72 h，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖水平，样本数为6；第2个批次细胞处理完成后进行划痕试验，于划痕后12 h，在倒置相差显微镜下观察细胞迁移情况后计算细胞迁移率，样本数为3；第3个批次细胞处理完成后进行小管形成实验，于培养6 h，在倒置相差显微镜下观察成管情况后计算细胞成管总长度与分支节点数，样本数为3。取细胞，分为正常对照组、单纯负压处理组、17-AAG+负压处理组，同前相应组别进行处理，处理完成后，采用蛋白质印迹法检测细胞中热休克蛋白90（HSP90）、窖蛋白1、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、eNOS磷酸化位点1177蛋白表达并计算eNOS磷酸化位点1177/eNOS比值（样本数为3），采用免疫共沉淀（共沉淀HSP90与窖蛋白1、窖蛋白1与eNOS）与蛋白质印迹法检测各组细胞中窖蛋白1、eNOS的蛋白表达（样本数为3），采用免疫荧光双重染色法评估细胞中HSP90与窖蛋白1、窖蛋白1与eNOS的蛋白共定位情况。通过HADDOCK 2.4蛋白质-蛋白质对接程序对窖蛋白1和eNOS进行分子对接预测。数据分析采用析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD法。结果:与正常对照组相比，单纯17-AAG组细胞增殖水平于处理完成后培养24、48、72 h均明显降低（ P<0.01），单纯负压处理组细胞增殖水平于处理完成后培养24、48、72 h均明显升高（ P<0.01）；与单纯17-AAG组相比，17-AAG+负压处理组细胞增殖水平于处理完成后培养48、72 h均明显升高（ P<0.05或 P<0.01）；与单纯负压处理组相比，17-AAG+负压处理组细胞增殖水平于处理完成后培养24、48、72 h均明显降低（ P<0.01）。划痕后12 h，与正常对照组的（39.9±2.7）%相比，单纯17-AAG组细胞迁移率明显降低［（10.7±2.7）%， P<0.01］，单纯负压处理组细胞迁移率明显升高［（61.9±2.4）%， P<0.01］；与单纯17-AAG组相比，17-AAG+负压处理组细胞迁移率明显升高［（37.7±3.7）%， P<0.01］；与单纯负压处理组相比，17-AAG+负压处理组细胞迁移率明显降低（ P<0.01）。处理完成后培养6 h，与正常对照组相比，单纯17-AAG组细胞成管总长度明显缩短（ P<0.05）且分支节点数明显减少（ P<0.05），单纯负压处理组细胞成管总长度明显延长（ P<0.01）且分支节点数明显增加（ P<0.01）；与单纯17-AAG组相比，17-AAG+负压处理组细胞成管分支节点数明显增加（ P<0.05）；与单纯负压处理组相比，17-AAG+负压处理组细胞成管总长度明显缩短（ P<0.01）且分支节点数明显减少（ P<0.01）。蛋白质印迹法检测显示，处理完成后，3组细胞中eNOS、窖蛋白1蛋白表达总体比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）；单纯负压处理组细胞中HSP90蛋白表达与eNOS磷酸化位点1177/eNOS比值均明显高于正常对照组（ P<0.01），17-AAG+负压处理组细胞中HSP90蛋白表达与eNOS磷酸化位点1177/eNOS比值均明显低于单纯负压处理组（ P<0.01）。处理完成后免疫共沉淀与蛋白质印迹法检测显示，与正常对照组相比，单纯负压处理组细胞中窖蛋白1蛋白表达明显升高（ P<0.01），eNOS蛋白表达明显降低（ P<0.05）；与单纯负压处理组相比，17-AAG+负压处理组处理完成后细胞中窖蛋白1蛋白表达明显降低（ P<0.01），eNOS蛋白表达明显升高（ P<0.01）。处理完成后，与正常对照组相比，单纯负压处理组细胞中HSP90与窖蛋白1的蛋白共定位明显增多，窖蛋白1与eNOS的蛋白共定位明显减少；与单纯负压处理组比，17-AAG+负压处理组细胞中HSP90与窖蛋白1的蛋白共定位明显减少，窖蛋白1与eNOS的蛋白共定位明显增多。分子对接预测提示，窖蛋白1与eNOS相互作用较强，抑制eNOS 1177位点的磷酸化。 结论:负压微环境可能通过促进HUVEC中HSP90结合窖蛋白1进而抑制窖蛋白1结合eNOS，以解除窖蛋白1对eNOS 1177位点磷酸化的抑制，从而促进HUVEC增殖、迁移和成管，最终促进HUVEC新生。

目的:探讨芹菜素通过调控窖蛋白-1(Caveolin-1)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠血管紧张素 1-7(Ang1-7)及左室舒张功能的机制研究.方法:按照随机数字表法将大鼠分为假手术(Sham)组、CHF组、芹菜素组、Caveolin-1 组及联合组,每组 10 只,除 Sham组外均建立 CHF大鼠模型.建模后 24 h,芹菜素组大鼠腹腔注射 2 mg/kg的芹菜素,Caveolin-1 组腹腔注射 1.2 mg/kg的 Caveolin-1质粒的脂质体溶液,联合组大鼠腹腔注射 2 mg/kg的芹菜素及 1.2 mg/kg的 Caveolin-1 质粒的脂质体溶液,Sham组及 CHF组大鼠腹腔注射等体积生理盐水.比较各组大鼠心脏收缩及舒张功能指标、血清因子水平;苏木精-伊红(HE)染色检测心肌组织病理形态;电镜观察心房超微结构;免疫组化检测心肌组织血管生成情况;蛋白免疫印迹检测心肌组织Caveolin-1、缺氧诱导因子 1(HIF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白水平.结果:CHF组与 Sham组比较,大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、Ang1-7及 Caveolin-1蛋白、HIF-1蛋白、VEGF蛋白降低,左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、肾素活性(PRA)升高,差异有统计学意义(P<0.05);芹菜素组、Caveolin-1组与 CHF组比较,大鼠 LVEF、LVFS、Ang1-7、Caveolin-1 蛋白、HIF-1 蛋白、VEGF蛋白及血管数目升高,LVESD、LVEDD、LVEDV、LVESV、AngⅡ、ALD、PRA降低,差异有统计学意义(P<0.05);芹菜素组与 Caveolin-1 组各指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05);联合组与芹菜素组及 Caveolin-1组各指标比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:芹菜素对慢性心力衰竭大鼠心脏舒张及收缩功能具有改善作用,并可通过上调 Ang1-7改善心肌重塑从而保护心脏,其机制可能与激活 Caveolin-1 表达而增加心肌新生血管相关.

已知Caveolin-1 (Cav-1)是胞膜窖的重要结构蛋白,通过介导多条信号转导途径广泛参与细胞的生理和病理过程.引人关注的是,Cav-1的表达通常具有组织特异性和功能多样性,在乳腺癌、肝癌等肿瘤的发生和发展中起到重要的调节作用.近年研究表明,Cav-1参与胰腺癌细胞放射引起的DNA损伤修复过程,从而对放疗产生抵抗.但其是否对其它种类细胞的DNA损伤也存在类似作用并不清楚.本文采用RNA干扰技术建立稳定敲低Cav-1表达的张氏肝细胞系(Chang liver cell line,CHL),即CHL-CAV7细胞,旨在探讨Cav-1在CHL细胞DNA损伤修复中的作用.Western blot结果显示,与转染非靶向质粒的对照细胞(CHL-C细胞)相比,CHL-CAV7细胞Cav-1蛋白表达水平被抑制了60％.采用X射线对细胞进行辐射,并对细胞的存活能力及DNA损伤修复相关蛋白的表达水平进行检测.克隆形成实验结果显示,在8和10 Gy X射线照射下,CHL-CAV7细胞的存活能力相对CHL-C细胞明显降低.Western blot结果显示,与CHL-C细胞相比,CHL-CAV7细胞照射后γH2AX蛋白表达量增加,p-ATM、DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase,catalytic subunit,DNA-PKcs)和p53蛋白表达量减少.免疫荧光分析结果显示,CHL-CAV7细胞Mdm2和Cav-1的共定位相对CHL-C细胞显著减少.上述结果提示,Cav-1表达下降后,CHL细胞DNA的损伤加重,这可能与Cav-1与Mdm2相互作用减少,进而导致p53的降解增加有关.本文为了解肝细胞的放疗抵抗作用机制提供了一定的实验依据.

窖蛋白-1 (Caveolin-1,Cav-1)作为胞膜窖的标志蛋白,介导许多生理和病理过程,包括胞膜窖的形成、膜泡运输、维持细胞胆固醇稳态、信号转导和肿瘤的发生.Cav-1广泛存在于多种肺部细胞中,在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中扮演着十分重要的角色.其中ALI的严重阶段急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的发病率和死亡率非常高.近年来,许多研究表明Cav-1在ALI的发病机理中起到至关重要的作用.文中就近年来Cav-1与急性肺损伤的关系及其在ALI发生和发展过程中的作用进行综述.

目的 报道3例窖蛋白相关肌病患者的临床、肌肉病理及分子病理特点,并结合文献对本病进行回顾.方法 总结3例以肌肉波纹样蠕动为突出特点患者的临床和随访资料,分析肌肉活体组织检查(活检)病理和窖蛋白-3免疫组织化学病理特点,行CAV3和PTRF基因检测.结果 3例患者临床均有典型的肌肉兴奋性增高症状,包括叩击诱发的肌肉快速收缩和肌肉隆起以及机械刺激诱发的肌肉波纹样蠕动.例1尚有手肌无力和萎缩;例2在病程早期仅表现为肌肉兴奋性增高症状,起病12年后出现不对称的下肢远端肌无力和肌萎缩;例3肌力和肌张力均正常.3例患者均有肌肉酸痛或压痛.肌活检病理提示2例患者呈轻度肌源性损害,1例为肌营养不良样改变.肌肉窖蛋白-3免疫组织化学染色示例1肌膜着色呈均一性减弱,另2例为窖蛋白-3表达减弱肌纤维与表达正常肌纤维呈镶嵌样分布.基因检测发现例1有CAV3基因突变(c.80G>A,p.R27Q),另2例CAV3和PTRF基因检测均未见突变.结论 窖蛋白相关肌病患者的临床表现变异较大,可表现为肢带综合征、波纹样肌病、远端肌病、肌肉肥大、高肌酸激酶血症以及心肌病.对伴有肌肉波纹样蠕动的患者应常规行肌活检窖蛋白-3免疫组织化学染色.

目的 观察菖蒲郁金汤化裁方对慢加急性肝衰竭(ACLF)大鼠脑组织IL-6、IL-1β及血脑屏障通透性的影响.方法 30只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和菖蒲郁金汤化裁方给药组,采用人血清白蛋白免疫诱导大鼠肝纤维化模型,再予D-GalN/LPS联合腹腔注射急性攻击,建立ACLF大鼠模型.肝纤维化模型造模完成后,给药组在急性攻击前予菖蒲郁金汤化裁方灌胃5天,正常组、模型组均予0.9％氯化钠注射液灌胃5天,各组均在急性攻击8h后麻醉处死.HE染色、电镜观察各组大鼠肝、脑组织病理变化,ELISA法观察各组大鼠脑组织白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)含量,Western Blot检测紧密连接蛋白(ZO-1)、P-糖蛋白(P-gp)、窖蛋白(Caveolin-1)的表达含量.结果 与模型组相比,菖蒲郁金汤化裁方给药可降低ACLF大鼠神经元损伤、减轻脑血管水肿,减少脑组织内IL-6、IL-13表达含量(P ＜0.05,P＜0.01),降低ZO-1、P-gp、Caveolin-1蛋白表达(P＜0.05).结论 菖蒲郁金汤化裁方具有保护神经元、减少脑微血管水肿的作用,其作用机制可能通过开放血脑屏障,增加药物在脑内浓度,而发挥抗炎作用.

食管癌是常见的恶性肿瘤,病因及发病机制尚不明确.近些年来,基因靶向治疗肿瘤成为研究热点.窖蛋白1(C av-1)是胞膜窖的标志性蛋白,在细胞的分子信号转导、胆固醇转运及细胞侵袭、迁移、周期等多个方面有重要作用.Caveolin-1在多种肿瘤发生发展中充当抑癌样作用,但在肿瘤中的作用不尽相同.因此,明确Caveolin-1对肿瘤发生发展的机制具有重要意义.本研究通过RNA干扰技术抑制Caveolin-1表达,检测细胞增殖及侵袭情况,并探讨其可能的作用机制.

目的:观察窖蛋白-1(Caveolin-1)在小鼠不同发育时期成釉细胞中的超微结构定位.方法:取胚胎发育第16.5天、第18.5天和出生第2.0天的C57BL/6小鼠下颌第一磨牙牙胚,HE染色、透射电镜观察不同发育时期成釉细胞的组织学形态及超微结构变化,免疫电镜技术观察Caveolin-1在成釉细胞中的超微结构定位.结果:在各个发育阶段的成釉细胞细胞膜上均可见形态类似于胞膜窖的凹陷状结构,随着成釉细胞逐渐发育成熟,细胞器数量逐渐增多;在不同发育阶段的成釉细胞中均可见Caveolin-1免疫阳性颗粒,在成熟成釉细胞的内质网腔中也可检测到Caveolin-1免疫阳性颗粒.结论:在小鼠下颌第一磨牙牙胚成釉细胞中,Caveolin-1定位于成釉细胞的细胞膜及成熟成釉细胞的内质网中.

心脏缺血缺氧导致的T管重构是引起胞内Ca2+紊乱的重要机制.主要就T管系统以及桥接整合因子1(BIN1)、2型junctophilin蛋白(JP-2)、窖蛋白-3(caveolin-3)等T管重构相关蛋白对心肌细胞Ca2+调节的研究进展进行综述.

外泌体作为细胞间信息交流的重要结构,不仅介导正常生理过程的调节(如细胞间的交流),还参与许多疾病的病理过程.多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体.已经发现,不同细胞来源的外泌体内含有的蛋白或miRNA等分子的作用不同,可以作为肿瘤患者预后的标志物,但详细机制并不十分清楚.窖蛋白-1作为胞膜窖的标志性蛋白,可作为肿瘤调控因子行使多种细胞功能.近年来发现,多种肿瘤的外泌体有窖蛋白-1的表达,且窖蛋白-1作为重要的功能蛋白调控外泌体的内化过程.我们简要综述了肿瘤细胞外泌体与窖蛋白-1之间的联系,以期为肿瘤的早期诊断和治疗提供新思路.