目的:探讨冬凌草甲素(Ori)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞凋亡的影响.方法:随机选取10只大鼠为假手术组仅分离但不切除卵巢,其余大鼠通过切除双侧卵巢建立OP模型,将造模成功的大鼠随机分为OP组、不同剂量Ori(5mg/kg Ori、10mg/kg Ori、20mg/kg Ori)组、20mg/kg Ori+Hippo/YAP 激活剂-Verteporfin(10mg/kg)组.干预后,收集腹主动脉血液,ELISA检测血清中骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)水平;分离股骨组织,双能X射线骨密度仪检测股骨矿含量、骨密度;HE检测股骨组织形态学变化;TUNEL检测成骨细胞凋亡变化;Western blot检测YAP、转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)蛋白表达.结果:假手术组大鼠股骨结构变化不明显,与假手术组相比,OP组股骨组织形态发生明 显改变,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨 密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05);与OP组相比,5mg/kg Ori组、10mg/kg Ori组、20mg/kg Ori组股骨组织形态得到改善,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著增加(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著降低(P＜0.05),不同剂量Ori间具有统计差异(P＜0.05);与20mg/kg Ori组相比,20mg/kg Ori+V erteporfin组股骨组织形态变化加重,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05).结论:Ori调节Hippo/YAP信号通路减少OP大鼠成骨细胞凋亡,减轻OP大鼠症状.

目的:探讨G蛋白耦联受体30(GPR30)与Hippo-Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路在甲状腺乳头状癌发生、发展中的影响。方法:收集福建医科大学附属第二医院2019年9月至2020年4月之间40例甲状腺乳头状癌及癌旁组织标本，分析GPR30、YAP、TAZ mRNA及蛋白表达，并分析三者mRNA表达量与甲状腺乳头状癌病理资料之间的关系。采用GPR30特异性激动剂G1及抑制剂G15处理人甲状腺乳头状癌细胞系(TPC-1)，分析GPR30、YAP、TAZ表达变化。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪等检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡，细胞衰老的检测应用β-半乳糖苷酶染色法，细胞迁移侵袭采用Transwell实验。采用配对 t检验分析各组数据差异。用 t检验评估GPR30、YAP、TAZ表达与具体病理资料之间的关系。用皮尔森(Person)相关分析评估GPR30表达量与YAP、TAZ表达量的关系。 结果:40例甲状腺乳头状癌组织中GPR30、YAP、TAZ的表达在转录及翻译水平均明显高于癌旁组织(癌与癌旁mRNA相对表达量分别为3.438±0.123比2.463±0.747， t＝7.786， P<0.01；3.325±0.111比2.638±0.541， t＝8.285， P<0.01；2.581±0.089比2.041±0.418， t＝8.068， P<0.01；癌及癌旁蛋白相对表达量分别为1.838±0.074比1.172±0.211， t＝13.333， P<0.01、1.735±0.152比1.200±0.321， t＝7.641， P<0.01、2.265±0.024比1.310±0.301， t＝13.915， P<0.01)，差异均有统计学意义。GPR30的mRNA表达与淋巴结转移(3.519±0.094比3.328±0.096， t＝3.786， P<0.01)和肿瘤大小(<2 cm为3.424±0.116，≥2 cm为3.600±0.099， t＝2.553， P<0.05)明显相关，与年龄、性别、腺外侵犯、病灶数量无明显相关。YAP、TAZmRNA表达与淋巴结转移(3.395±0.105比3.283±0.093， t＝3.519， P<0.01；2.627±0.117比2.554±0.053， t＝2.686， P<0.05)明显相关，与年龄、性别、肿瘤大小、腺外侵犯、病灶数量无明显相关。GPR30特异性激动剂G1处理TPC-1细胞后，GPR30 mRNA表达量高于对照组(1.224±0.067比0.976±0.048， t＝5.212， P<0.01)，YAP、TAZ表达量高于对照组(分别为1.359±0.096比0.995±0.004， t＝6.562， P<0.01；1.311±0.024比0.985±0.066， t＝8.040， P<0.01)，促进细胞的增殖(0.381±0.002、0.523±0.003、0.754±0.004比0.359±0.004、0.476±0.003、0.665±0.003， t＝8.521、19.190、30.830， P<0.01)、侵袭(422.33±7.23比210.00±3.61， t＝45.510， P<0.01)、迁移(550.67±10.69比229.67±8.33， t＝41.030， P<0.01)，抑制细胞的衰老(0.052±0.001比0.094±0.001， t＝51.440， P<0.01)、凋亡[(1.8±0.2)%比(5.8±0.3)%， t＝19.220， P<0.01]，差异均有统计学意义。 结论:GPR30、YAP、TAZ的的高表达可能与甲状腺乳头状癌淋巴结转移以及预后相关，GPR30可能通过Hippo-TAZ/YAP通路促进甲状腺乳头状癌的发生、发展。

目的 探讨橄榄苦苷(OL)通过调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜炎症的影响.方法 采用改良的Hulth法构建KOA大鼠模型,并随机分为Model组、低剂量OL组(20 mg/kg)、高剂量OL组(40 mg/kg)、高剂量OL+VT103组(40 mg/kg+10 mg/kg YAP/TAZ抑制剂),每组12只,另取12只大鼠作为正常对照组(NC组).观察各组大鼠的情况,Lequesne MG评分对各组大鼠行为学进行评估;ELISA试剂盒检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的表达;苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠滑膜组织的病理损伤;qRT-PCR法检测滑膜组织中YAP和TAZ mRNA的表达;Western blot检测大鼠滑膜组织中YAP、磷酸化YAP(p-YAP)、磷酸化TAZ(p-TAZ)、TAZ、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达.结果 与NC组比较,Model组大鼠Lequesne MG评分升高、血清中 TNF-α 和 IL-6 的表达增加、YAP 和 TAZ mRNA 表达增加、p-YAP/YAP、p-TAZ/TAZ、Bax 蛋白表达升高(P＜0.05);与 Model组比较,低剂量、高剂量OL组大鼠Lequesne MG评分降低、血清中TNF-α和IL-6的表达减少、YAP和TAZ mRNA表达减少、p-YAP/YAP、p-TAZ/TAZ、Bax蛋白表达降低(P＜0.05);VT103可明显减弱OL对KOA大鼠滑膜组织的保护作用(P＜0.05).结论 OL可能通过激活YAP/TAZ信号通路减轻膝骨关节炎大鼠滑膜炎症.

目的 探讨小豆蔻明(Cardamonin,CAR)对脑梗死大鼠模型血脑屏障(Blood-brain barrier,BBB)及 Hippo-p-Yes 相关蛋白(Yes associated protein,YAP)/转录共激活因子(Tafazzin,TAZ)信号通路的影响.方法 建立脑梗死大鼠模型,所有大鼠分为对照组[Control(CT)组]、[模型组(Model(M)组]、CAR低剂量组(CAR L 组,5 mg·kg-1·d-1 CAR)、CAR 高剂量组(CAR H 组,20 mg·kg-1·d-1 CAR)和 CAR 高剂量+PY60组(CAR H+PY60组,20 mg·kg-1·d-1 CAR+10 mg/mL PY60);给药期间各组大鼠做神经功能评分;给药结束后苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察脑组织病理变化,氯化三苯基四氮唑(Triphe-nyl-tetrazolium chloride,TCC)染色测定脑梗死体积,免疫组化检测脑组织闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白(Claudin-5)的表达水平,计算脑含水量和伊文思蓝(Evans blue,EB)渗透量,Western blot技术验证脑组织磷酸化(Phosphorylation,p)-哺乳动物 STE20 样蛋白激酶 1(Mammalian sterile20-like kinase1,MST1)、MST1、p-大肿瘤抑制因子 1(Large tumor suppressor factor 1,LATS1)、LATS1,p-YAP,YAP 蛋白表达水平.结果 与CT组比较,M组大鼠脑组织细胞间隙变大且有大量炎症细胞浸润及少量空泡变性,神经功能评分、脑梗死体积、脑含水量、EB渗透量及p-YAP/YAP蛋白表达水平升高,Occludin,Claudin-5,p-MST1/MST1,p-LATS1/LATS1蛋白表达水平降低(P＜0.05);与M组比较,CAR L,H组大鼠炎症细胞浸润、细胞空泡变性、细胞间隙减少,脑组织结构更完整,神经功能评分、脑梗死体积、脑含水量、EB渗透量及p-YAP/YAP蛋白表达水平降低,Occludin,Claudin-5,p-MST1/MST1,p-LATS1/LATS1 蛋白表达水平升高(P＜0.05);与CAR H组比较,CAR H+PY60组大鼠炎症细胞浸润和细胞空泡变性增加,神经功能评分、脑梗死体积、脑含水量、EB 渗透量及 p-YAP/YAP 蛋白表达水平升高,Occludin,Claudin-5,p-MST1/MST1,p-LATS1/LATS1蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论 CAR可能通过抑制YAP/TAZ信号通路来改善脑梗死大鼠模型BBB功能.

目的:探讨鸢尾素(Irisin)对绝经后骨质疏松(PMOP)大鼠骨代谢及Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路的影响.方法:采用双侧卵巢切除法构建 PMOP 大鼠模型,将所有实验大鼠分为对照组(Control组)、PMOP 组、鸢尾素低、中、高剂量组(Irisin-L、Irisin-M、Irisin-H 组)、鸢尾素高剂量+YAP抑制剂维替泊芬组(Irisin-H+VTPF 组);骨密度仪测定骨密度(BMD);Micro-CT 分析骨小梁的平均厚度(Tb.Th)、骨小梁面积百分比(Tb.Ar)、骨小梁数量(Tb.N)和骨小梁分离度(Tb.Sp);HE 染色观察股骨组织形态学变化;ELISA法检测大鼠血清中骨代谢标志物特异性碱性磷酸酶(BALP)、I 型前胶原氨基端前肽(PINP)、Ⅰ型胶原氨基端延长肽(PINP)、骨钙素(OC)、核结合因子-α1(CBF-α1)水平;West-ern blot法检测带pdz结合基序的转录共激活因子(TAZ)、YAP、p-YAP 蛋白表达水平.结果:与Control组比较,PMOP 组大鼠股骨组织的骨小梁结构紊乱,骨小梁厚度变薄,空骨陷窝明显,甚至发生轻微骨折,BMD、Tb.Th、Tb.Ar、Tb.N、BALP、P1NP、OC、CBF-α1、TAZ、YAP、p-YAP 表达水平显著降低,Tb.Sp显著升高(P<0.05);与PMOP 组比较,Irisin-L、Irisin-M、Irisin-H组大鼠股骨组织骨小梁结构逐渐排列有序,空骨陷窝减少,股骨组织损伤逐渐减轻,BMD、Tb.Th、Tb.Ar、Tb.N、BALP、P1NP、OC、CBF-α1、TAZ、YAP、p-YAP 表达水平依次显著升高,Tb.Sp依次显著降低(P<0.05);与Irisin-H组比较,Irisin-H +VTPF组大鼠股骨组织的骨小梁结构紊乱,空骨陷窝明显增加,股骨组织损伤加重,BMD、Tb.Th、Tb.Ar、Tb.N、BALP、P1NP、OC、CBF-α1、TAZ、YAP、p-YAP 表达水平显著降低,Tb.Sp显著升高(P<0.05).结论:鸢尾素可以通过激活Hippo-YAP 信号通路,调节绝经后骨质疏松大鼠骨代谢,防治骨质疏松.

目的 探讨白血病抑制因子受体(LIFR)在宫颈癌肺转移中的作用以及Hippo-YAP信号通路在其中的作用.方法 ①采用实时荧光定量PCR法检测50例宫颈癌肺转移患者原发灶癌组织、癌旁组织及转移灶癌组织LIFR mRNA表达.②用包含LIFR的重组慢病毒质粒及其阴性对照空载体质粒vector转染人宫颈癌SiHa细胞, 2.0 μg/mL嘌呤霉素筛选,得到稳定过表达LIFR的宫颈癌细胞(观察组)和对照细胞(对照组).采用Western blotting法检测两组LIFR及Hippo-YAP信号通路相关蛋白YAP、P-YAP、TAZ、p-TAZ.将两组细胞经尾静脉注射到BALB/c裸鼠体内,4周后处死裸鼠,取出肺组织,HE染色,镜下计数肺组织中所有转移灶个数.结果 ①LIFR mRNA相对表达量:原发灶癌组织高于癌旁组织,转移灶癌组织低于原发灶癌组织和癌旁组织(P均<0.05).②观察组过表达LIFR的SiHa细胞LIFR、p-YAP、p-TAZ蛋白相对表达量高于对照组(P均<0.05),YAP、TAZ蛋白表达量与对照组比较P均>0.05.注射过表达LIFR的SiHa细胞及对照细胞的裸鼠肺转移灶个数分别为(9 ±2)、(60 ±5)个,P<0.05.结论 过表达LIFR可促进Hippo-YAP信号通路蛋白YAP、TAZ磷酸化,进而抑制宫颈癌肺转移灶的形成.

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠肺部纤维化的诱导机制.方法 SPF级雄性Wistar大鼠30只,分为对照组、模型组、模型+AngⅡ组,每组10只.各组大鼠行HE染色,评价肺纤维化和肺泡炎症程度,RT-PCR检测Yes相关蛋白1(Yap1)、PDZ结合相关性转录共激活因子(TAZ)、Smad2/3和Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)mRNA相对表达水平.结果 对照组大鼠肺组织在光学显微镜下可见肺泡壁完整,结构清晰,肺泡隔无增宽,支气管腔及肺泡腔内无炎性渗出物,肺泡无炎性改变;模型组大鼠肺组织镜下可见部分肺泡融合,肺组织结构紊乱,肺泡隔严重充血、水肿及炎细胞浸润;模型+AngⅡ组大鼠肺组织镜下可见肺间质呈现均匀增厚,炎症细胞浸润增多.模型组和模型+AngⅡ组肺纤维化和肺泡炎症程度评分均显著高于对照组(P<0.05),且模型+AngⅡ组肺纤维化和肺泡炎症程度评分均显著高于模型组(P<0.05).模型组和模型+AngⅡ组Yap1、TAZ、Smad2/3和Col-ⅠmRNA和蛋白均显著高于对照组(P<0.05),且模型+AngⅡ 组Yap1、TAZ、Smad2/3和Col-ⅠmRNA和蛋白均显著高于模型组(P<0.05).结论 AngⅡ可能通过上调Hippo信号通路中Yap1的表达和TGF-β1/Smad信号通路中Smad2/3的表达,促进Ⅰ型胶原的合成,诱导大鼠肺纤维化.

目的 探讨促红细胞生成素(Epo)对短肠综合征(SBS)大鼠适应后期干细胞分化及Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路的影响.方法 将16只成功建立的SBS大鼠模型分为模型组和Epo组,每组8只;另选8只为假手术组,只行肠横断和再吻合.Epo组隔日皮下注射157μ/kg Epo,每周3次,持续2个月;其余两组注射等体积生理盐水.术前、术后7 d,药物治疗2个月后称量体重;苏木精-伊红(HE)染色观察肠道组织学情况;阿利新蓝染色观察肠黏膜杯状细胞情况;免疫组织化学观察肠黏膜内分泌细胞、潘式细胞情况;West-ern blot检测肠组织YAP、转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)蛋白表达情况.结果 术后7 d,与假手术组比较,模型组、Epo组体重降低(P<0.05).治疗2个月后,与假手术组比较,模型组体重降低(P<0.05);与模型组比较,Epo组体重增加(P<0.05).假手术组肠道肌层层次清晰,黏膜上皮完整清晰;模型组黏膜腺体较多,出现细胞浸润现象;Epo组肌层层次较清晰、细胞浸润现象缓解.与假手术组比较,模型组环状肌、纵肌厚度,绒毛长度、隐窝深度均增加(P<0.05);杯状细胞、潘式细胞相对数量,YAP、TAZ蛋白水平降低(P<0.05).与模型组比较,Epo组环状肌、纵肌厚度,绒毛长度、隐窝深度均增加(P<0.05);杯状细胞、潘式细胞相对数量,YAP、TAZ蛋白水平升高(P<0.05).结论 Epo在SBS大鼠适应后期可促进干细胞分化从而增加环状肌、纵肌厚度,绒毛长度、隐窝深度,可能是通过激活Hippo/YAP信号通路而实现.