目的:探讨G蛋白耦联受体30(GPR30)与Hippo-Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路在甲状腺乳头状癌发生、发展中的影响。方法:收集福建医科大学附属第二医院2019年9月至2020年4月之间40例甲状腺乳头状癌及癌旁组织标本，分析GPR30、YAP、TAZ mRNA及蛋白表达，并分析三者mRNA表达量与甲状腺乳头状癌病理资料之间的关系。采用GPR30特异性激动剂G1及抑制剂G15处理人甲状腺乳头状癌细胞系(TPC-1)，分析GPR30、YAP、TAZ表达变化。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪等检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡，细胞衰老的检测应用β-半乳糖苷酶染色法，细胞迁移侵袭采用Transwell实验。采用配对 t检验分析各组数据差异。用 t检验评估GPR30、YAP、TAZ表达与具体病理资料之间的关系。用皮尔森(Person)相关分析评估GPR30表达量与YAP、TAZ表达量的关系。 结果:40例甲状腺乳头状癌组织中GPR30、YAP、TAZ的表达在转录及翻译水平均明显高于癌旁组织(癌与癌旁mRNA相对表达量分别为3.438±0.123比2.463±0.747， t＝7.786， P<0.01；3.325±0.111比2.638±0.541， t＝8.285， P<0.01；2.581±0.089比2.041±0.418， t＝8.068， P<0.01；癌及癌旁蛋白相对表达量分别为1.838±0.074比1.172±0.211， t＝13.333， P<0.01、1.735±0.152比1.200±0.321， t＝7.641， P<0.01、2.265±0.024比1.310±0.301， t＝13.915， P<0.01)，差异均有统计学意义。GPR30的mRNA表达与淋巴结转移(3.519±0.094比3.328±0.096， t＝3.786， P<0.01)和肿瘤大小(<2 cm为3.424±0.116，≥2 cm为3.600±0.099， t＝2.553， P<0.05)明显相关，与年龄、性别、腺外侵犯、病灶数量无明显相关。YAP、TAZmRNA表达与淋巴结转移(3.395±0.105比3.283±0.093， t＝3.519， P<0.01；2.627±0.117比2.554±0.053， t＝2.686， P<0.05)明显相关，与年龄、性别、肿瘤大小、腺外侵犯、病灶数量无明显相关。GPR30特异性激动剂G1处理TPC-1细胞后，GPR30 mRNA表达量高于对照组(1.224±0.067比0.976±0.048， t＝5.212， P<0.01)，YAP、TAZ表达量高于对照组(分别为1.359±0.096比0.995±0.004， t＝6.562， P<0.01；1.311±0.024比0.985±0.066， t＝8.040， P<0.01)，促进细胞的增殖(0.381±0.002、0.523±0.003、0.754±0.004比0.359±0.004、0.476±0.003、0.665±0.003， t＝8.521、19.190、30.830， P<0.01)、侵袭(422.33±7.23比210.00±3.61， t＝45.510， P<0.01)、迁移(550.67±10.69比229.67±8.33， t＝41.030， P<0.01)，抑制细胞的衰老(0.052±0.001比0.094±0.001， t＝51.440， P<0.01)、凋亡[(1.8±0.2)%比(5.8±0.3)%， t＝19.220， P<0.01]，差异均有统计学意义。 结论:GPR30、YAP、TAZ的的高表达可能与甲状腺乳头状癌淋巴结转移以及预后相关，GPR30可能通过Hippo-TAZ/YAP通路促进甲状腺乳头状癌的发生、发展。

目的 分析B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和G蛋白耦联雌激素受体(GPER)在子宫内膜息肉患者组织中的表达及相关性,为临床诊治提供参考.方法 选取2010年10月-2012年4月绍兴市妇幼保健院收治的子宫内膜息肉患者30例为研究组,正常子宫内膜的30例患者为对照组.使用免疫组化Envision法检测Bcl-2、GPER阳性率,分析二者的相关性.结果 Bcl-2在研究组和对照组的阳性率分别为66.67％和26.67％,研究组的阳性率高于对照组,差异有统计学意义(x2=10.545,P＜0.05).Bcl-2在研究组增生期和分泌期的阳性率分别为68.75％和64.29％,差异无统计学意义(P＞0.05).Bcl-2在对照组增生期和分泌期的阳性率分别为43.75％和7.14％,增生期的阳性率高于分泌期,差异有统计学意义(P＜0.05).GPER在研究组和对照组的阳性率分别为73.33％和16.67％,研究组的阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).GPER在对照组增生期与分泌期的阳性率分别为18.75％和14.29％,差异无统计学意义(P＞0.05).GPER在研究组增生期和分泌期的阳性率分别为56.25％和92.86％,分泌期的阳性率高于增生期,差异有统计学意义(P＜0.05).Spearman相关性分析结果表明:Bel-2与GPER在子宫内膜息肉患者中的表达呈正相关(rs=0.933,0.872,均P＜0.05).结论 Bcl-2和GPER高表达使子宫内膜息肉组织凋亡减弱、增生加强,进而导致子宫内膜息肉的发生,并促进其发展.

目的:探讨蠲痹方含药血清对绝经后膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KO A)大鼠软骨细胞自噬的影响及其作用机制.方法:①绝经后KOA动物模型的建造和蠲痹方含药血清的制备.采用摘取大鼠卵巢,并切断膝关节内侧副韧带、前交叉韧带,摘除膝关节内侧半月板的方法,建造绝经后KOA大鼠模型.造模成功后,对模型大鼠进行蠲痹方浓缩液灌胃,制备蠲痹方含药血清.②大鼠软骨细胞的提取.分别取正常大鼠和模型大鼠的膝关节软骨分离、提取软骨细胞.③蠲痹方含药血清最佳作用浓度筛选.将模型大鼠软骨细胞分为模型组及1.25％、2.5％、5％、10％、20％含药血清组6组,除模型组外,其余各组分别加入相应体积分数的蠲痹方含药血清干预24 h.检测各组软骨细胞的活力,筛选蠲痹方含药血清最佳作用浓度.④蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞G蛋白耦联受体30(G protein-coupled receptor 30,GPR30)表达影响的检测.将模型大鼠软骨细胞分为模型组及1.25％、2.5％、5％、10％含药血清组,并取正常大鼠软骨细胞设为空白组.除模型组和空白组外,其他各组软骨细胞用相应体积分数的蠲痹方含药血清干预24 h.检测各组大鼠软骨细胞GPR30的相对表达量.⑤蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞自噬相关蛋白表达和 AMP 活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路影响的检测.将模型大鼠软骨细胞分为模型组、含药血清组、含药血清+Compound C组、Compound C组,并取正常大鼠软骨细胞设为空白组.除模型组和空白组外,含药血清组、含药血清+Compound C组、Compound C组分别用10％蠲痹方含药血清、10％蠲痹方含药血清+Compound C及Compound C干预24 h.检测各组软骨细胞中自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3β(microtu-bule-associated protein light chain 3 beta,MAPLC3β)、Beclin-1、p62,及 AMPK/mTOR 信号通路相关蛋白磷酸化 AMP 活化蛋白激酶(phosphorylated AMP-activated protein kinase,p-AMPK)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapam-ycin,p-mTOR)的相对表达量.结果:①动物模型鉴定结果.造模8周后,可见造模大鼠膝关节表面软骨毛糙或缺损,关节间隙变窄,滑膜增生,绝经后KOA大鼠模型造模成功.②软骨细胞鉴定结果.甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定结果显示,所提取的细胞符合软骨细胞特征.③蠲痹方含药血清最佳作用浓度筛选结果.5％、10％、20％含药血清组细胞活力均高于1.25％、2.5％含药血清组和模型组(LSD-t=6.767,P=0.003,LSD-t=7.666,P=0.002,LSD-t=5.091,P=0.007;LSD-t=5.080,P=0.007,LSD-t=6.690,P=0.003,LSD-t=3.433,P=0.027;LSD-t=7.590,P=0.002,LSD-t=8.200,P=0.001,LSD-t=6.031,P=0.004);10％含药血清组细胞活力高于5％含药血清组和20％含药血清组(LSD-t=3.204,P=0.033,LSD-t=4.671,P=0.010).④蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞GPR30表达影响的检测结果.模型组GPR30相对表达量低于空白组及5％、10％含药血清组(LSD-t=5.695,P=0.005,LSD-t=5.400,P=0.006,LSD-t=9.006,P=0.001),5％、10％含药血清组 GPR30 相对表达量均高于1.25％含药血清组(LSD-t=2.782,P=0.049,LSD-t=4.473,P=0.011),10％含药血清组GPR30相对表达量高于2.5％含药血清组(LSD-t=4.544,P=0.011).⑤蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞自噬相关蛋白表达影响的检测结果.模型组、含药血清+Compound C 组、Compound C 组 MAPLC3β 相对表达量均低于空白组、含药血清组(LSD-t=6.855,P=0.002,LSD-t=8.675,P=0.001;LSD-t=5.096,P=0.007,LSD-t=5.931,P=0.004;LSD-t=5.560,P=0.005,LSD-t=5.354,P=0.006);模型组、Compound C 组 MAPLC3β 相对表达量均低于含药血清+Compound C 组(LSD-t=4.627,P=0.010,LSD-t=8.677,P=0.001).模型组、Com-pound C组Beclin-1相对表达量低于空白组、含药血清组、含药血清+Compound C(LSD-t=12.912,P=0.000,LSD-t=7.401,P=0.002,LSD-t=5.360,P=0.006;LSD-t=2.950,P=0.042,LSD-t=5.484,P=0.005,LSD-t=3.903,P=0.018);含药血清+Com-pound C组Beclin-1相对表达量低于空白组(LSD-t=26.840,P=0.000).含药血清组、空白组p62相对表达量低于模型组、含药血清+Compound C 组、Compound C 组(LSD-t=3.925,P=0.017,LSD-t=3.985,P=0.019,LSD-t=0.016,P=0.001;LSD-t=3.149,P=0.035,LSD-t=5.094,P=0.007,LSD-t=8.740,P=0.001),含药血清+Compound C 组 p62 相对表达量低于 Compound C组(LSD-t=3.455,P=0.026).⑥蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞AMPK/mTOR信号通路影响的检测结果.含药血清组p-AMPK相对表达量高于模型组、Compound C 组(LSD-t=3.623,P=0.022,LSD-t=6.537,P=0.003),空白组 p-AMPK 相对表达量高于模型组、含药血清+Compound C 组、Compound C 组(LSD-t=4.149,P=0.014,LSD-t=2.791,P=0.049,LSD-t=5.734,P=0.004),含药血清+Compound C组p-AMPK相对表达量高于Compound C组(LSD-t=5.958,P=0.004).空白组、含药血清组、含药血清+Compound C 组 p-mTOR 相对表达量均低于模型组(LSD-t=8.722,P=0.001,LSD-t=8.849,P=0.001,LSD-t=5.558,P=0.005),含药血清组、空白组p-mTOR相对表达量均低于含药血清+Compound C组、Compound C组(LSD-t=4.201,P=0.014,LSD-t=10.030,P=0.001;LSD-t=4.879,P=0.008,LSD-t=9.782,P=0.001),含药血清+Compound C 组 p-mTOR 相对表达量低于Compound C组(LSD-t=6.934,P=0.002).结论:蠲痹方含药血清作用于绝经后KOA大鼠软骨细胞,可增加细胞活力,并通过上调MAPLC3β、Beclin-1的表达和抑制p62的表达增强细胞自噬能力;其作用机制可能与促进GPR30表达,上调AMPK磷酸化水平,下调mTOR磷酸化水平,激活GPR30和AMPK/mTOR信号通路有关.

目的 探究G蛋白耦联受体激酶(GRK)2 在帕金森病(PD)小鼠纹状体中的作用机制.方法 选用C57BL/J雄性8 周龄小鼠,随机分为对照组和模型组;对照组腹腔注射0.2 ml生理盐水,模型组腹腔注射30 mg/kg的1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),2 次/w,共5w.35d后对两组进行爬杆实验和旷场实验检测.行为学检测后,小鼠麻醉后眼球取血、取脑,运用酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫组化检测血清和中脑酪氨酸羟化酶(TH)表达,Western印迹和免疫组化检测纹状体GRK2 和多巴胺2 受体(D2R)表达.结果 在旷场实验中,MPTP干预后模型组自发活动总距离、穿越中心格次数和距离比对照组明显减少(均P＜0.001).在爬杆实验中,模型组爬杆时间比对照组明显延长(P＜0.001).ELISA及免疫组化显示,模型组血清和中脑TH值较对照组明显减少(P＜0.001).Western印迹和免疫组化提示,与对照组相比,纹状体D2R表达显著减少,而CRK2 表达显著升高(P＜0.05).结论 GRK2 可能通过D2R参与调控PD的症状,针对GRK2 是潜在的PD治疗靶点.

目的 研究老年脑梗死后认知功能障碍患者血清骨钙素、G蛋白耦联雌激素受体30(GPER 30)水平变化及其与预后的相关性,为评估患者预后提供参考.方法 选取2021年1月至2022年10月平顶山市第二人民医院收治的115例老年脑梗死患者为研究对象,于脑梗死后第3天采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估患者的认知功能,根据有无认知功能障碍分为障碍组(54例,MOCA评分≤26分)和无障碍组(61例,MOCA评分＞26分),比较两组患者的一般资料及血清骨钙素、GPER 30水平,同时比较不同认知障碍程度患者及障碍组中预后良好组和预后不良组患者的骨钙素、GPER 30蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量,采用多因素Logistic回归分析老年脑梗死后认知功能障碍的影响因素,采用Spearman分析障碍组血清骨钙素、GPER 30水平与认知障碍程度及预后的相关性.结果 两组患者的年龄、神经功能缺损(NIHSS)评分、骨钙素、GPER 30蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归分析结果显示,年龄、NIHSS评分、骨钙素、GPER 30蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量均是老年脑梗死患者认知功能障碍发生的影响因素(P<0.05);不同认知障碍程度患者的骨钙素、GPER 30蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量比较,轻度>中度>重度,差异均有统计学意义(P<0.05);经Spearman分析结果显示,血清骨钙素、GPER 30蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量与老年脑梗死后认知障碍程度呈正相关(r=0.784、0.715、0.673;P<0.05);障碍组预后良好患者血清骨钙素、GPER 30蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量水平明显高于预后不良组,差异均有统计学意义(P<0.05);经Spearman分析结果显示,血清骨钙素、GPER 30蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量与老年脑梗死后认知障碍预后呈负相关(r=-0.675、-0.663、-0.584;P<0.05).结论 骨钙素、GPER 30蛋白相对灰度值、GPER 30 mRNA相对表达量是老年脑梗死患者认知功能障碍发生的影响因素,其水平变化与认知障碍严重程度及预后均存在相关性.

[目的]探讨围绝经期非器质性失眠肝郁分级与雌激素受体α、β(ERα、ERβ),G蛋白耦联受体30(GPR30)mRNA及蛋白表达的相关性.[方法]收集127例围绝经期非器质性失眠妇女的四诊信息及匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评分,参照《证素辨证学》进行肝郁证素积分和肝郁分级,运用实时荧光定量(RT-qPCR)法和免疫印迹(WB)法检测外周血单个核细胞上的GPR30、ERα、ERβmRNA及蛋白的表达水平.[结果](1)ERαmRNA、ERβmRNA、GPR30 mRNA相对表达量在不同肝郁分级间差异均无统计学意义(P>0.05);ERαmRNA/ERβmRNA比值随肝郁分级增高而降低,其在不同肝郁分级间差异有统计学意义(F=6.710,P<0.001).(2)ERα、ERβ、GPR30蛋白相对灰度值在不同肝郁分级间的差异均无统计学意义(P>0.05);ERα/ERβ蛋白相对灰度值比值随肝郁分级增高而降低,其在不同肝郁分级间差异有统计学意义(P<0.05).[结论]围绝经期非器质性失眠妇女肝郁的病理基础可能与ERα/ERβ比值下降相关.

目的 探讨下调雄激素受体(AR)表达对不同类型老年宫颈癌患者癌细胞凋亡情况的影响及其相关机制.方法 以AR为靶点构建小干扰RNA(siRNA),慢病毒为载体转染人宫颈腺癌细胞系C33a、宫颈鳞癌细胞系Caski.荧光定量PCR和Western印迹分别检测AR mRNA和蛋白的表达情况,流式细胞术检测宫颈癌细胞的凋亡情况.RT-PCR和Western印迹检测各组细胞中G蛋白耦联受体(Cpr)30 mRNA和蛋白表达情况.结果 AR干扰组人宫颈癌细胞株C33a、Caski AR mRNA及其蛋白的相对表达量较阴性对照组、空白对照组明显降低(P＜0.05).AR干扰组C33a、Caski凋亡率较阴性对照组和空白对照组明显增加(P＜0.05).AR干扰组内比较显示,C33a凋亡率明显大于Caski(P＜0.05).AR干扰组Cpr30 mRNA及其蛋白相对表达量均明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论 经siRNA转染下调AR表达后宫颈腺癌和宫颈鳞癌细胞凋亡率均增加,以宫颈腺癌更为明显;下调AR表达可提升Cpr30表达水平,进而激活Cpr30/Tlr3信号通路,促进宫颈癌细胞凋亡.

女性绝经后会出现一系列与雌激素缺乏有关的症状和疾病,补充雌激素是目前主要的治疗方法.雌激素除了通过与传统的核受体ERα、β 结合产生基因组效应外,雌激素膜受体-G蛋白耦联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)介导的雌激素对靶器官的快速效应也得到了证实.近些年,关于GPER介导雌激素在不同靶细胞的特异生理功能及其作用机制的研究层出不穷,本文从生殖系统、神经系统、心血管系统、内分泌代谢及骨代谢方面,综述这些年来研究发现的GPER介导的雌激素作用的相关机制.

G蛋白耦联雌激素受体1(GPER1)作为雌激素的新型受体,与经典的雌激素受体α、β不同,主要参与调节雌激素活化的快速非基因信号通路.研究发现,雌激素通过激活GPER1,可以调节细胞内信号分子的活性状态,从而起到促进细胞生长、对抗凋亡的作用.本文就GPER1的结构、分布、相关配体及作用通路等的研究进展作一综述.

目的 探讨雌二醇(E2)对去势大鼠脑组织中G蛋白耦联雌激素受体(GPR30)的表达.方法 将健康成年12周龄性成熟雌性大鼠50只分为去势组和假手术组.按不同组的配置连续7d注射E2、GPER特异性激动剂G1和GPER特异性激动剂G15后,采用Western Blot检测脑组织GPR30表达量.结果 注射G1或G15后,去势组GPR30表达量较低(0.057±0.032 vs.0.150±0.060,P=0.020;0.078±0.049 vs.0.187±0.098,P=0.047).去势大鼠G1、G15脑组织GPR30的表达量较去势组注射油剂组降低,而E2+G1组表达量没有降低.结论 GPR30在脑组织的表达调控与雌激素水平密切相关,G1对GPR30的下调作用可被雌激素部分阻断.