JIB-04(Jumonji histone demethylase inihibitor,JIB-04)是一种泛组蛋白赖氨酸去甲基化酶抑制剂,可抑制多种肿瘤发生发展,但其具体机制仍不清楚.本文以肝癌细胞HepG2和Huh7为研究对象,探讨了 JIB-04对肝癌细胞的增殖影响,并揭示其可能的分子机制.CCK-8和EDU检测细胞增殖实验显示,JIB-04明显抑制肝癌细胞HepG2和Huh7活力,且具有浓度依赖性,其半数抑制浓度分别为0.7689 μmol/L及0.7392 μmol/L.流式细胞术检测细胞内ROS水平变化,结果显示,JIB-04可显著激活细胞内ROS的累积.通过谷胱甘肽(glutathione,GSH)检测试剂盒和脂质过氧化物检测试剂盒分别检测细胞内GSH和脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平发现,在2 μmol/L JIB-04处理下,HepG2和Huh7细胞内GSH分别下降88.4％和80.7％,而脂质过氧化物分别升高4.75倍和9.25倍.通过qRT-PCR和Western印迹分析发现,JIB-04显著降低铁死亡相关因子GPX4和SLC7A11的mRNA水平和蛋白质水平,同时铁死亡相关通路蛋白质MDM2明显下调,P53蛋白水平明显上调.机制研究显示,JIB-04可以使赖氨酸特异性去甲基化酶KDM4C的蛋白质水平下调约58％和51％.通过ChIP检测发现,在JIB-04处理肝癌细胞后MDM2基因启动子区域H3K9me3分别提高了 2.19倍和2.14倍,同时qRT-PCR证明,JIB-04处理肝癌细胞后MDM2 mRNA水平显著下调.综上所述,本研究初步揭示了 JIB-04可下调特异性去甲基化酶KDM4C的表达,进而影响MDM2基因启动子区域H3K9me3甲基化水平抑制MDM2基因表达,减少MDM2蛋白与P53蛋白结合,P53蛋白水平表达上调,同时,铁死亡相关蛋白质SLC7A11和GPX4的表达下调,导致细胞内GSH耗竭、ROS与脂质过氧化物积累,最终导致细胞发生铁死亡.

目的 探讨KDM2A在肺纤维化进展中的表达变化,以期为寻求肺纤维化的发病机制提供具有潜力的新方向.方法 将8～10周的C57BL/6J雄性小鼠随机分配为正常组、14d模型组与21 d模型组.取模型组小鼠麻醉后,气道滴定博来霉素诱导建立肺纤维化模型.分别于造模后第14天、第21天取材14 d模型组与21 d模型组小鼠肺组织,最后取材正常组小鼠肺组织.通过HE染色,Masson染色来评估小鼠肺泡炎及纤维化程度.免疫组化分析3组肺组织α-SMA、FN、TGF-β1及KDM2A蛋白表达情况并进行免疫组化评分.Western Blot法检测α-SMA、FN、TGF-β1及KDM2A蛋白表达量.结果 与正常组比较,14 d模型组肺泡炎评分明显增加(P＜0.001);21 d模型组较14 d模型组比较,肺泡炎评分轻度增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).与正常组比较,14 d模型组纤维化评分明显增加(P＜0.01);21 d模型组较14 d模型组比较,纤维化评分明显增加(P＜0.01).免疫组织化学染色结果显示:与正常组比较,14 d 模型组 α-SMA(P＜0.01)、FN(P＜0.01)、TGF-β1(P＜0.01)、KDM2A(P＜0.01)蛋白免疫组化评分明显升高;21 d 模型组较 14 d 模型组比较,α-SMA(P＜0.01)、FN(P＜0.05)、TGF-β1(P＜0.01)、KDM2A(P＜0.01)蛋白免疫组化评分升高.Western Blot 结果显示:与正常组比较,14 d 模型组 α-SMA(P＜0.01)、FN(P＜0.01)、TGF-β1(P＜0.01)、KDM2A(P＜0.01)蛋白表达量明显升高;21 d 模型组较 14 d 模型组相比,α-SMA(P＜0.01)、FN(P＜0.01)、TGF-β1(P＜0.01)、KDM2A(P＜0.01)蛋白表达量升高.结论 KDM2A在BLM诱导的肺纤维化小鼠肺组织中表达增强,其可能通过调控TGF-β1的表达来参与肺纤维化的形成.

目的:分析赖氨酸特异性去甲基化酶6B（KDM6B）在乙型肝炎相关性肾炎（HBV-GN）患者肾组织及乙型肝炎病毒X基因（HBx）转染的人足细胞中的表达，及其在HBx介导的足细胞-巨噬细胞转分化（PMT）中的作用。方法:选取2013至2018年在上海交通大学附属第一人民医院经肾穿刺活检病理诊断为HBV-GN的48例患者肾活检标本，以30例原发性肾小球肾炎（PGN）肾活检标本及15例肾肿瘤患者癌旁正常肾组织作为对照。利用免疫荧光及免疫组化法观察HBV-GN患者肾组织KDM6B及巨噬细胞标志物F4/80的表达。分析肾组织KDM6B表达水平与HBV-GN患者临床特征的关系。Western印迹法检测足细胞中KDM6B、F4/80、主要组织相容性复合体Ⅱ（MHC-Ⅱ）以及共刺激分子CD40的表达；ELISA法测定细胞上清中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-6的含量；同时利用KDM6B小干扰RNA（siRNA）沉默HBx质粒转染的人足细胞中KDM6B基因表达后，Western印迹法检测细胞中KDM6B、F4/80及组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27me3）的表达变化。结果:与正常对照组相比，HBV-GN患者肾组织KDM6B表达增加（0.022±0.004比0.006±0.002， P=0.006）。HBV-GN不同病理类型组间KDM6B阳性率差异无统计学意义（ P=0.139）。此外，在HBV-GN患者足细胞中可观察到KDM6B和F4/80的共表达。估算肾小球滤过率（eGFR）<60 ml·min -1·（1.73 m 2） -1或尿蛋白≥3.5 g/d的患者肾组织KDM6B表达分别高于eGFR≥60 ml·min -1·（1.73 m 2） -1或尿蛋白<3.5 g/d的患者（均 P<0.05）。HBx转染人足细胞后KDM6B、F4/80、MHC-Ⅱ以及CD40表达均上调（均 P<0.05），上清IFN-γ和IL-6含量均增加（均 P<0.05）；将KDM6B基因沉默后，HBx所诱导的足细胞F4/80表达下调，H3K27me3表达则上调（均 P<0.05）。 结论:HBx可通过诱导足细胞KDM6B表达启动PMT，可能参与HBV-GN局部组织免疫微环境紊乱的发生。

高级别胃肠胰神经内分泌肿瘤（HG-GEP-NEN）是一种罕见但预后很差，且是一种未被充分研究的肿瘤类型。包括分化良好的神经内分泌瘤（NET G3）以及分化差的神经内分癌（NEC）。NET G3的预后优于NEC，但对于铂类为基础的化疗敏感性不如NEC。HG GEP-NEC的治疗参考小细胞肺癌的治疗。目前，对于HG GEP-NEN的分类、治疗和预后的分子标志物普遍缺乏。经过病理重新评估，该研究分析了181例HG-GEP-NEN患者的肿瘤DNA和匹配的血液样本，其中152例NEC和29例NET G3。根据对360个癌症相关基因的测序，评估突变和拷贝数变化，NEC中高频突变基因为TP53（64%）、APC（28%）、KRAS（22%）和BRAF（20%）。RB1只有14%发生突变，但有34%的拷贝数变化影响RB1。其他高频拷贝数缺失为ARID1A（35%）、ESR1（25%）和ATM（31%），其中出现高频拷贝数扩增/增加的两个基因为MYC（51%）和KDM5A（45%）。虽然这些分子特征与小细胞肺癌（SCLC）的相似性有限，但在66%的NEC样本中发现了潜在的靶向性改变。突变和拷贝数变化因原发肿瘤部位的不同而不同，BRAF突变主要见于结肠（49%），FBXW7突变主要见于直肠癌（25%）。152例NEC中有8例（5.3%）为微卫星不稳定（MSI）。NET G3中高频突变常见于MEN1（21%）、ATRX（17%）、DAXX（14%）、SETD2（14%）和TP53（14%）。此外该研究还发现HG-GEP-NEN的分子差异与形态分化和起源部位有关。总之其分子水平与小细胞肺癌的相似之处有限，但高比例的靶向性改变表明，个体化治疗的潜力很大。

目的:探讨1例具有不良孕产史的女性的遗传学病因。方法:以1例曾有1次胎停和2次横膈疝伴心脏复杂畸形胎儿引产史的女性作为研究对象，采集其第2次引产儿的组织，提取基因组DNA进行全外显子组测序，对候选变异进行Sanger测序家系验证。结果:测序发现胎儿的 KDM6A基因存在c.1228_1229del(p.Gln410GlufsTer2)半合子移码终止变异，既往未见报道。根据美国医学遗传学与基因组学学会相关指南判断为可能致病(PVS1＋PM2_Supporting)。该变异可导致歌舞伎综合征2型。孕妇及其母亲均携带相同的变异。孕妇身材矮小、眉毛外1/3稀疏，智力正常，存在女性生殖器官先天性发育异常(阴道不完全纵膈、双宫颈、双子宫和单侧卵巢缺失)，其外祖母表型大部分相似。对胎儿的产前影像学表型进行描述，对孕妇持续随访，探讨其在社区随访实践中的疾病管理策略。 结论:KDM6A基因的c.1228_1229del(p.Gln410GlufsTer2)变异可能是导致胎儿膈疝伴心脏结构畸形的遗传学病因。歌舞伎综合征2型胎儿的超声表型以及携带者双子宫畸形既往报道很少。本研究丰富了上述表型谱，为临床诊断和遗传咨询提供了依据。

目的:观察微小RNA(miR)-137-3p对赖氨酸特异性去甲基化酶4A基因(KDM4A)的调控在坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)引起的神经病理性痛中的作用。方法:将大鼠随机分为假手术组(Sham)、CCI模型组、2 mg/kg miR-137-3p模拟物(mimic)鞘内注射组、4 mg/kg miR-137-3p mimic鞘内注射组。术后的第14天，实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测大鼠背根神经节(DRG)和脊髓(SC)中miR-137-3p及KDM4A的表达变化。于注射前及注射后的第1、3、7、14天，采用von Frey检测大鼠机械撤足阈值(PWT)和热撤足潜伏期(PWL)。蛋白质印迹法(Western blot)检测DRG和SC中KDM4A的表达变化；酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测脊髓L4~L5组织中脑源性神经营养因子(BDNF)的含量；双荧光素酶报告基因法检测miR-137-3p与KDM4A的靶向关系。应用GraphPad Prism 8.2.1软件，对数据进行配对 t检验、ANOVA单因素方差分析及双因素方差分析等方法分析。 结果:(1)与Sham组比较，miR-137-3p在CCI大鼠DRG和SC中的表达水平(0.363±0.130、0.490±0.099)显著低于Sham组(1.013±0.164、0.950±0.120)，且差异有统计学意义( t＝8.772、8.425， P<0.05)，但KDM4A在CCI大鼠DRG和SC中的表达水平(3.113±0.083、3.613±0.136)高于Sham组(1.025±0.158、0.975±0.198)，差异有统计学意义( t＝33.020、31.060， P<0.01)。(2)与Sham组大鼠机械撤足阈值(1 d，23.220±5.262；3 d，22.790±5.764；7 d，23.220±5.262)和热撤足潜伏期(1 d，11.617±0.518；3 d，11.345±0.867；7 d，11.645±0.588)比较，CCI组机械撤足阈值(1 d，10.269±2.422；3 d，6.484±2.314；7 d，4.434±2.273)热撤足潜伏期(1 d，8.061±0.123；3 d，6.661±0.298；7 d，5.067±0.335)显著下降( F＝7.841， P<0.05； F＝162.900， P<0.01)；而与CCI组比较，鞘内注射miR-137-3p mimic可显著促进大鼠机械撤足阈值(1 d，15.302±8.044；3 d，13.891±5.894；7 d，11.006±2.284)和热撤足潜伏期(1 d，10.995±0.139；3 d，9.972±0.336；7 d，8.522±0.322)的上升( F＝12.420， P<0.01； F＝80.300， P<0.01)，抑制KDM4A的表达(DRG中，1.554±0.071比2.698±0.160， t＝15.672， P<0.05；SC中，1.684±0.059比3.006±0.088， t＝5.223， P<0.05)。(3)与Sham组(153.600±15.600；150.900±6.302)比较，CCI组大鼠DRG和SC中BDNF表达水平(354.400±13.020；350.700±26.850)显著上升( t＝4.673， P<0.05； t＝1.981， P<0.05)；而与CCI组比较，鞘内注射miR-137-3p mimic可显著抑制BDNF的产生(188.000±5.685， t＝5.767， P<0.05；182.200±4.983， t＝20.034， P<0.05)。(4)与miR-scramble组相比，miR-137-3p mimic转染可显著降低KDM4A野生型载体的荧光素酶报告基因的荧光强度(1.002±0.080比0.486±0.063， t＝11.290， P<0.05)。 结论:miR-137-3p通过调控大鼠背根神经节和脊髓背角中KDM4A的表达参与神经病理性痛。

目的:探讨组蛋白去甲基化酶含Jumonji结构域的蛋白3（Jumonji domain-containing protein D3，JMJD3）在新生儿坏死性小肠结肠炎（necrotizing enterocolitis，NEC）肠道组织中的表达情况。方法:收集对照（先天性小肠闭锁）患儿及NEC患儿手术中切除的回肠组织进行RNA测序，筛选出差异基因。对差异基因进行组蛋白甲基化修饰酶相关基因聚类分析，筛选出目的基因赖氨酸特异性去甲基化酶6B[lysine（K）-specific demethylase 6B，KDM6B]，并采用实时荧光定量聚合酶链反应扩大样本量进行验证。蛋白免疫印迹和免疫组织化学检测JMJD3以及其底物组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（trimethylation of histone H3 at lysine 27，H3K27me3）在肠道组织中的蛋白表达情况。组间比较根据数据分布特点采用 t检验或Mann-Whitney U检验。 结果:RNA测序筛查出1 481条差异基因，其中643条基因上调，838条基因下调。筛查NEC肠道组织中30种组蛋白甲基化修饰酶的表达情况，其中KDM6B在NEC样本中差异表达最显著[Log 2（fold change）=0.769 104， P=0.009 009]。实时荧光定量聚合酶链反应结果显示，与对照组相比，KDM6B在NEC肠道组织中高表达（ P<0.05）；蛋白免疫印迹和免疫组织化学结果显示JMJD3蛋白水平在NEC肠道组织中明显增高，H3K27me3蛋白水平在NEC肠道组织中降低。 结论:在NEC肠道组织中组蛋白去甲基化酶JMJD3高表达，H3K27me3低表达。JMJD3可能通过降低H3K27me3的表达水平调控NEC的发生发展。

Xp11.22微重复综合征十分罕见，2017年7月解放军联勤保障部队第980医院收治同一家系Xp11.22微重复综合征男性患者2例。诊断过程：采用高通量测序技术对先证者及其父母进行医学外显子测序，并进行基因序列比对分析。利用染色体微阵列技术对先证者、其舅、其母进行基因组拷贝数变异分析。医学外显子测序未发现与先证者临床表型高度相关的基因突变；染色体芯片分析检测染色体拷贝数变异情况，发现先证者在chrXp11.22区域发生629 kb片段重复，基因位点：Xp11.22(53，188，779-53，817，598)，该段包含HSD17B10、HUWE1、SMC1A、KDM5C、IQSEC2重要OMIM基因，与Xp11.22微重复综合征相关。先证者舅舅在相同区域发现有612 kb片段重复，基因组位点Xp11.22(53，188，779-53，800，670)。先证者母亲在相同区域发现有803 kb片段重复，基因组位点Xp11.22(53，188，779-53，991，495)。对不明原因智力低下家系，特别是男性患者，要警惕Xp11.22微重复综合征，有必要对患者进行全基因组拷贝数检测。

目的:探讨组蛋白赖氨酸去甲基化酶4A(KDM4A)在结直肠癌发生发展中的作用及可能的机制。方法:2019年1月至2019年6月，构建高(KDM4A)、低表达(ShKDM4A#1，ShKDM4A#2)KDM4A的结直肠癌细胞株(购自美国典型菌种保藏中心公司)，同时设立对照组(NC，ShNC)。通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测KDM4A对细胞增殖的影响。利用细胞侵袭小室法(Transwell)检测KDM4A对结直肠癌细胞迁移/侵袭能力的影响。通过蛋白质印迹法(Western blot)检测高、低表达KDM4A后细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。两组间统计学差异通过双尾 t检验进行分析。 结果:KDM4A高表达组与对照组比较，细胞增殖率明显提高[(50.233±3.430)%和(35.417±4.501)%， t＝3.900、2.942， P<0.05]。低表达KDM4A与对照组比较，细胞增殖能力明显受抑制[(58.056±2.750)%和(57.386±8.228)%， t＝4.558、4.419， P<0.05]。Transwell实验显示高表达KDM4A后穿孔细胞数[(304.000±62.466)个]比对照组[(64.000±20.833)个]增多( t＝5.154， P<0.01)；低表达KDM4A后穿孔细胞数[(47.333±13.573)个]较对照组[(93.667±18.874)个]减少( t＝2.819， P<0.05)。KDM4A可以正向调节Cyclin D1和MMP-9的蛋白表达。 结论:KDM4A在结直肠肿瘤发生发展中起到重要作用，其机制可能是通过调节Cyclin D1和MMP-9的表达。

目的:对1个X连锁隐性遗传精神发育迟滞Claes-Jensen型家系进行 KDM5C基因变异分析，明确其致病原因。 方法:采集先证者及其父母兄弟共5人外周血，进行全外显子测序，Sanger测序验证。结果:测序结果提示先证者为 KDM5C基因第11外显子c.1565C>T(p.Ser522Phe)半合子错义变异，Sanger测序验证其两兄长也为c.1565C>T(p.Ser522Phe)变异的半合子，母亲为c.1565C>T(p.Ser522Phe)变异杂合子，父亲未检测到 KDM5C基因变异。c.1565C>T(p.Ser522Phe)变异引起患儿及其两兄长精神发育迟滞、癫痫、身材矮小、小头畸形，母亲有轻度认知障碍和学习困难。 KDM5C基因第11外显子c.1565C>T(p.Ser522Phe)变异是一种未见报道过的致病变异。 结论:KDM5C第11外显子c.1565C>T变异是本患儿家系的致病原因。