本研究从溶藻弧菌中成功克隆获得Va1686基因的编码区序列(GenBank:KX245316),该基因全长1 164bp,可编码387个氨基酸,应用生物信息学的方法和工具对溶藻弧菌HY9901Ⅲ型分泌系统效应蛋白Va1686的理化性质、蛋白结构、遗传进化关系和抗原特性等方面进行预测和分析.结果表明:Va1686蛋白为稳定的亲水性蛋白,蛋白呈酸性,不具有跨膜区和信号肽,二级结构以α螺旋为主.进化分析显示溶藻弧菌HY9901与哈维氏弧菌(V.harveyi)聚为一支,表明在进化关系上最为接近.Va1686蛋白包含一段与细胞分裂相关的Fic superfamily保守结构域.生物信息学分析表明Va1686可能的B细胞抗原优势表位,分别是第48～49、82～85、125～126、150～153、185～186、236～237等区段.利用SWISS-MODEL软件,模拟了Va1686亚基三维结构模型,发现与其同源蛋白副溶血弧菌vopS非常相似,相似度达到89.46％.本研究从生物信息学角度分析了Va1686作为弧菌共同抗原的可行性,为下一步的疫苗研发提供了理论依据.

本研究从溶藻弧菌中成功克隆获得HY322基因的编码区序列(GenBank:KX245317.1),该基因全长969 bp,可编码322个氨基酸,应用生物信息学的方法和工具对溶藻弧菌HY9901效应蛋白HY322的理化性质、蛋白结构、遗传进化关系和抗原特性等方面进行预测和分析.结果表明:HY322蛋白为不稳定的亲水性蛋白,蛋白呈酸性,无跨膜区,无明显的信号肽;二级结构以α螺旋为主,进化分析显示溶藻弧菌HY9901与哈维氏弧菌(V.harveyi)聚为一支,表明在进化关系上最为接近.HY322序列中包含有一个与鞭毛形成有关的FliN功能结构域.多种参数预测了HY322可能的B细胞抗原优势表位,分别是第32～33、100～102、138～140、215～216、235～238、246～249区段.利用SWISS-MODEL软件,得到了HY322亚基三维模型.本研究从生物信息学角度验证了HY322作为弧菌共同抗原的可行性,为下一步的疫苗研发提供了理论依据.

目的 对2017年河南省报告的登革热疑似病例进行实验室确诊,从分子水平追踪其来源.方法 血液标本(3～5 ml)来源于2017年河南省传染病监测网络直报系统中上报的8例登革热疑似病例,按照《全国登革热监测方案》对病例进行个案调查.血液样本分离血清后,通过检测血清中登革病毒非结构蛋白1抗原(NS1)、IgM和IgG抗体以及病毒RNA进行实验室确诊;对于登革病毒RNA检测阳性的样本进行荧光PCR分型诊断和E基因序列扩增,阳性扩增产物测序后进行同源性比对.结果 8个登革热疑似病例中6例确诊为登革热实验室诊断病例,均为境外输入;其中5例病例登革病毒RNA检测阳性,经分型检测发现,登革病毒1型为1例,2型和3型各2例;对1例登革病毒2型和1例3型病例成功进行了分子溯源,其中由巴基斯坦输入的登革病毒2型病例核酸序列属于cosmopolitan基因型,与巴基斯坦2013年登革病毒2型KJ010186一致性最高,为99.0%;由马来西亚输入的登革病毒3型病例核酸序列属于Ⅰ型基因型,与2014年新加坡登革病毒3型KX224276一致性最高,为99.0%.结论 2017年河南省登革热病例经实验室诊断和分子溯源证实均为输入性病例,未引起本地流行.

目的 了解引起安庆地区急性呼吸道感染的人类腺病毒( HAdv)流行株型别特点及编码六邻体蛋白基因及氨基酸残基的变异情况.方法 收集2013—2015年间流感监测哨点596份急性呼吸道感染患儿咽拭子,real-time PCR腺病毒核酸检测试剂盒进行检测,阳性标本进行Hep细胞病毒分离,对病毒分离成功样本进行六邻体蛋白基因( hexon gene) PCR扩增、测序并将序列与Gen-Bank发表的序列进行同源比对和进化树分析.结果 HAdv阳性标本68份,阳性率为11. 4% .病毒分离成功34株,其中,HAdv-3型为9株占26. 5% ;HAdv-7型为12株占35. 3% ;HAdv-14型为12株占35. 3% ;HAdv-55型为1株占2. 9% . 9株HAdv-3型分离株与KX384958亲缘关系最近,为99. 8% ～100% ,与其他株相比较氨基酸残基的变异主要有 3 个;12 株 HAdv-7 型分离株与 KX897164 和KU361344亲缘关系最近,为99. 8% ～100% ,与其他株相比较氨基酸残基的变异主要有7 个;12 株HAdv-14型分离株与JF420883亲缘关系最近,为99. 6% ～99. 9% ,与其他株相比较氨基酸残基的变异主要有3个;1株HAdv-55型分离株与KP279748和KX289874亲缘关系较近,核苷酸和氨基酸的同源性为100% .在这几个型别的研究株中HAdv-7 型变异最大,其次为 HAdv-14 型.结论 2013—2015年,引起安庆地区急性呼吸道感染的腺病毒流行株主要为HAdv-3型、HAdv-7型、HAdv-14型,同时存在少量HAdv-55型. HAdv-55型分离株六邻体基因稳定,没有出现变异.而HAdv-3型、HAdv-7型、HAdv-14型型别之间,核苷酸和氨基酸均发生不同程度的变异.在抗原决定簇HVR1、HVR2 和HVR7区存在氨基酸的变异.

目的 了解2012-2015年深圳市手足口病重症患儿柯萨奇A6型肠道病毒(CVA6)VP1～VP4基因特征.方法 对2012-2015年深圳市重症手足口病样本中所有CVA6阳性样本进行VP1～VP4全长序列扩增和测序,运用DNASTAR6.0和MEGA6.02软件进行系统进化分析.结果 深圳市2012—2015年共有4例重症手足口病是由CVA6病毒感染引起的,临床表现均为发热、疱疹和无菌性脑炎等中枢神经系统症状.其中2013年深圳市CVA6重症株与2012年深圳重症株核苷酸的同源性为98.8％ ～98.9％,氨基酸同源性为99.3％ ～99.8％,共有2个氨基酸突变(VP2区的G73E和VP1区的S13G).2015年深圳市CVA6重症株与2013年重症株的核苷酸和氨基酸的同源性分别为95.0％和99.3％,共发现6个氨基酸突变(分别为VP2区的E73G和VP1区的T5A、S27N、A30V、N137S和V242I).进化分析表明,2012-2015年深圳市引起无菌性脑炎的CVA6重症株均属于D3亚型,其中深圳市2012年CVA6重症株与2012年长沙市分离株(KJ156349)进化关系最近,深圳市2013年CVA6重症株与上海市2013年CVA6分离株(KJ612513)进化关系最近,而深圳市2015年CVA6重症株与山东省2014年潍坊株(KX752785)属于同一进化分支.结论 2012-2015年引起深圳市重症手足口病的CVA6重症株均属于D3亚型,其中2015年CVA6重症株VP1区S27N、A30V的氨基酸突变位点均位于线性B细胞抗原表位区域,V242I氨基酸突变位点位于细胞受体PSGL-1结合区域,这可能会影响CVA6重症株与细胞受体的结合力及其对人群的感染力.

目的:筛查变应原并明确蒿属植物种属鉴定,深入分析野艾蒿变应原的免疫活性.方法:进行问卷调查及血清特异性IgE(sIgE)检测筛查变应原;采集蒿属样本及内转录间隔区(ITS)序列鉴别物种;构建野艾蒿变应原毕赤酵母蛋白表达载体,转化宿主重组表达和纯化,结果经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和western blotting检测分析.结果:376例受试者血清sIgE检测总阳性率为58.78％,其中艾蒿阳性率高达48.67％.ITS序列物种鉴定发现样本与野艾蒿Artemisia lavandulifolia(KX421740)相似性为99.74％;野艾蒿花粉变应原基因Art la3毕赤酵母分泌表达载体pPICZαA-Art la3.0101和pPICZαA-Art la 3.0102的片段大小分别为798 bp和795 bp.Western blotting检测结果显示重组变应原Art la 3.0102与16例艾蒿过敏患者血清的IgE结合,阳性率为26.7％(16/60),该16例受试者临床症状较重且艾蒿sIgE等级高.结论:野艾蒿是内蒙古及甘肃地区主要致敏源之一,其重组变应原Art la 3.0102具有IgE结合活性,可作为致敏源筛查的候选抗原,并推测对变应原Art la 3.0102过敏可能作为野艾蒿诱发变应性疾病的病情严重程度指标.

KX血型抗原是一个重要的红细胞膜抗原,在膜上与Kell抗原有关联性,二者在抗原表达上相关,且相互影响.KX抗原的缺失,表型为Mcleod综合征,是由于X染色突变引起,是一种遗传性疾病.本文就KX抗原近几年来的研究进展,做一简略综述.