目的:探讨Krüppel样因子4（KLF4）在巨噬细胞炎症反应中的表达特点与作用及其对脓毒症小鼠炎症反应与脏器损伤的作用，为烧创伤脓毒症的靶向治疗奠定理论基础。方法:采用实验研究方法。取小鼠RAW264.7巨噬细胞与从10只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠中提取的原代腹腔巨噬细胞（PM）进行实验。采用内毒素/脂多糖（LPS）分别处理RAW264.7巨噬细胞与PM 0（未处理）、1、2、4、6、8、12、24 h构建巨噬细胞炎症反应模型，采用实时荧光定量反转录PCR（RT-PCR）法检测白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、CC趋化因子配体2（CCL2）与肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA表达，据此确定后续部分实验LPS处理时间。用LPS处理RAW264.7巨噬细胞0、8 h，采用免疫荧光法检测KLF4的定位与蛋白表达；利用高通量测序技术平台对细胞进行转录组测序，采用DESeq2软件筛选2种处理时间细胞间的差异表达基因（DEG）。采用LPS分别处理RAW264.7巨噬细胞与PM 0、1、2、4、6、8、12、24 h，分别用实时荧光定量RT-PCR法与蛋白质印迹法检测KLF4的mRNA与蛋白表达。将RAW264.7巨噬细胞按随机数字表法分为阴性对照组与KLF4过表达组，分别转染对应质粒后用LPS处理0、8 h，采用实时荧光定量RT-PCR法检测KLF4、IL-1β、IL-6、CCL2与TNF-α的mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测KLF4蛋白表达。前述实验样本数均为3。将40只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为KLF4过表达组和阴性对照组（每组20只），分别注射相应转染注射液后构建盲肠结扎穿孔脓毒症模型。采用随机数字表法从2组小鼠中各选取12只，观察建模后72 h内生存情况。于建模后8 h取2组分别剩余的8只小鼠，先行眼球取血，采用酶联免疫吸附测定法检测血清中IL-1β、IL-6水平，采用干化学法检测血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平；后取心脏、肺脏、肝脏组织，行苏木精-伊红染色后观察损伤情况。对数据行独立样本 t检验、Cochran&Cox近似 t检验、单因素方差分析、Dunnett检验、Brown-Forsythe和Welch单因素方差分析、Dunnett T3检验、log-rank（Mantel-Cox）检验。 结果:与LPS处理0 h比较，LPS处理6 h与8 h RAW264.7巨噬细胞中IL-1β mRNA表达、LPS处理4~12 h RAW264.7巨噬细胞中IL-6 mRNA表达、LPS处理8 h和12 h RAW264.7巨噬细胞中CCL2 mRNA表达以及LPS处理4~8 h RAW264.7巨噬细胞中TNF-α mRNA表达均显著上调（ P<0.05或 P<0.01），LPS处理4~8 h PM中IL-1β与CCL2 mRNA表达、LPS处理2~24 h PM中IL-6 mRNA表达以及LPS处理2~12 h PM中TNF-α mRNA表达均显著上调（ P<0.05或 P<0.01）。选取8 h作为后续部分实验的LPS处理时间。KLF4主要定位在RAW264.7巨噬细胞的细胞核中。与LPS处理0 h比较，LPS处理8 h RAW264.7巨噬细胞中KLF4蛋白表达明显减少；LPS处理8 h RAW264.7巨噬细胞中有1 470个差异表达显著的DEG，包括转录表达显著下调的 KLF4［错误发现率<0.05，log 2（差异倍数）=-2.47］。与LPS处理0 h比较，LPS处理6~24 h RAW264.7巨噬细胞中KLF4 mRNA表达、LPS处理1~24 h RAW264.7巨噬细胞与PM中KLF4蛋白表达以及LPS处理4~24 h PM中KLF4的mRNA表达均明显降低（ P<0.05或 P<0.01）。与阴性对照组比较，KLF4过表达组LPS处理0、8 h RAW264.7巨噬细胞中KLF4的mRNA（ t'值分别为17.03、8.61， P<0.05或 P<0.01）与蛋白表达均明显升高，LPS处理0 h RAW264.7巨噬细胞中IL-6、CCL2的mRNA表达均明显升高（ t值分别为6.29、3.40， P<0.05或 P<0.01），LPS处理8 h RAW264.7巨噬细胞中IL-1β、IL-6、CCL2、TNF-α的mRNA表达均显著下降（ t值分别为10.52、9.60、4.58、8.58， P<0.01）。KLF4过表达组小鼠建模后72 h内生存比例明显高于阴性对照组（ χ2=4.01， P<0.05）。建模后8 h，KLF4过表达组小鼠血清中IL-1β、IL-6与ALT、AST水平分别为（161±63）、（476±161）pg/mL与（144±24）、（264±93）U/L，明显低于阴性对照组的（257±58）、（654±129）pg/mL与（196±27）、（407±84）U/L（ t值分别为3.16、2.44与4.04、3.24， P<0.05或 P<0.01）。建模后8 h，与阴性对照组比较，KLF4过表达组小鼠心脏、肺脏、肝脏的组织结构紊乱减轻，炎性渗出明显减少，脏器实质细胞病理样改变明显减轻。 结论:KLF4在LPS诱导的巨噬细胞炎症反应中表达显著下降，显著抑制巨噬细胞炎症反应；KLF4显著提高脓毒症小鼠生存率并缓解炎症反应与脓毒症相关脏器损伤。

目的:探究miR-216a-5p靶向Krüppel样转录因子12（KLF12）对肝癌细胞放射敏感性的影响。方法:实时反转录PCR（RT-qPCR）检测人正常肝细胞L-02，人肝癌细胞Huh7、HepG2、Hep3B、MHCC-97H中miR-216a-5p、KLF12 mRNA水平并比较。采用0、2、4、6、8 Gy X射线照射HepG2细胞2 h，比较不同剂量照射组间的miR-216a-5p、KLF12 mRNA水平。采用质粒转染构建miR-216a-5p和/或KLF12过表达的HepG2细胞，并给予4 Gy X射线照射2 h。相应的分组为miR-NC（对照）组、miR-216a-5p组、miR-216a-5p+NC组、miR-216a-5p+KLF12组、IR+miR-NC组、IR+miR-216a-5p组、IR+miR-216a-5p+NC组、IR+miR-216a-5p+KLF12组，比较分组间的miR-216a-5p、KLF12 mRNA水平。克隆形成实验检测细胞放射敏感性；CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD- t检验。 结果:与L-02细胞相比，肝癌细胞系中KLF12 mRNA水平升高，miR-216a-5p水平降低（ P<0.05）。与0 Gy组相比，2、4、6、8 Gy组KLF12 mRNA水平降低，miR-216a-5p水平升高（ P<0.05）。过表达miR-216a-5p或放射处理能够增强细胞放射敏感性和凋亡水平，并降低细胞增殖水平（ P<0.05）；且过表达miR-216a-5p同时放射处理对细胞上述效果更加明显（ P<0.05）。过表达KLF12能部分逆转过表达miR-216a-5p对细胞的上述效果（ P<0.05）。 结论:miR-216a-5p通过调控KLF12降低细胞增殖能力，增强细胞放射敏感性和细胞凋亡。

目的:观察二氧化硅（SiO 2）对小鼠肺泡巨噬细胞（AMs）极化的影响，探讨信号转导及转录激活因子-6（STAT-6）/Krüppel样因子-4（KLF-4）/过氧化物酶体增殖激活受体-γ（PPAR-γ）信号分子在AMs中的表达情况及意义。 方法:于2020年11月，将C57BL/6小鼠随机分为结晶型SiO 2组和生理盐水（NS）组，每组12只。通过气管滴注100 μl SiO 2混悬液（20 mg/ml）或NS，28 d后处死小鼠，Masson染色观察小鼠肺组织纤维化情况，并检测羟脯氨酸（HYP）水平；流式细胞术检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中M1和M2型AMs比例，用实时荧光定量PCR检测AMs中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶-1（Arg-1）、白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-6、IL-10、转化生长因子-β（TGF-β）、STAT-6、KLF-4、PPAR-γ等mRNA相对表达水平；酶联免疫吸附试验检测BALF中iNOS、Arg-1活力和IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10、TGF-β含量，免疫荧光检测AMs中磷酸化信号转导及转录激活因子-6（p-STAT-6）、KLF-4、PPAR-γ蛋白相对表达水平。 结果:处理28 d后，结晶型SiO 2组小鼠肺组织结构被破坏，胶原蛋白沉积明显增多；与NS组比较，结晶型SiO 2组小鼠肺组织HYP水平明显升高，M2型AMs比例明显增加，M1型AMs比例明显下降；Arg-1、IL-10和TGF-β mRNA相对表达水平和含量升高，而iNOS、IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA相对表达水平和含量降低，STAT-6、KLF-4、PPAR-γ mRNA和p-STAT-6、KLF-4、PPAR-γ蛋白相对表达水平上调，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:结晶型SiO 2可能通过激活STAT-6/KLF-4/PPAR-γ信号通路，促进AMs向M2型极化，从而介导肺纤维化过程。

目的:观察Krüppel样因子7 （KLF7）对视网膜缺血再灌注（RIR）损伤小鼠RGC存活及ERG的影响。方法:采用随机数字表法将126只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、RIR组、正常-KLF7组、正常-绿色荧光蛋白（GFP）组、RIR-KLF7组、RIR-GFP组。小鼠8周龄时，正常-KLF7组及RIR-KLF7组小鼠玻璃体腔注射1.0×10 12 vg/ml过表达KLF7的重组腺相关病毒载体（AAV2-KLF7-GFP）1 μl；正常-GFP组及RIR-GFP组小鼠玻璃体腔注射同样滴度的仅带GFP的空白腺相关病毒载体1 μl。小鼠11周龄时，RIR组、RIR-KLF7组、RIR-GFP组小鼠建立RIR模型并测量眼压。玻璃体腔注射AAV2-KLF7-GFP病毒载体4周后，利用视网膜冰冻切片观察病毒转染情况。RIR建模后第7天，利用视网膜铺片免疫荧光染色定量观察RGC存活率；行全视野ERG检查，观察其暗适应a、b波和振荡电位（Ops ）、光负性反应（PhNR）振幅和潜伏期的变化；行视动反应检测，观察其视敏度的变化。玻璃体腔注射病毒4周后，采用Western bolt检测小鼠视网膜中KLF7的蛋白表达。 结果:与正常组比较，RIR组小鼠视网膜RGC存活率，ERG a、b波振幅，Ops、PhNR振幅以及视敏度均明显降低，差异有统计学意义（ t=12.860、7.157、5.735、8.953、4.744、9.887， P<0.05 ）。随着刺激光强的增加，小鼠暗适应ERG a、b波振幅逐渐升高，其潜伏期逐渐缩短。与RIR组比较，RIR-KLF7组小鼠视网膜RGC存活率，ERG a、b波振幅，Ops、PhNR振幅以及视敏度均明显升高，差异有统计学意义（ t=6.350、3.253、3.695、5.825、5.325、4.591， P<0.05）。Western bolt检测结果显示，正常-KLF7组小鼠视网膜中KLF7蛋白表达较正常组明显上调，差异有统计学意义（ t=4.105， P<0.01 ）。 结论:KLF7过表达可提高RGC存活率，保护其电生理功能。

目的 探究血清Krüppel样转录因子2(KLF2)、血管生成素1(Ang1)水平与新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)严重程度及预后的相关性.方法 选取2019年1月至2022年12月在该院就诊的416例NRDS患儿为NRDS组,根据NRDS组患儿胸部影像检查结果将其分为轻度组(145例)、中度组(174例)和重度组(97例);再根据NRDS患儿结局将其分为预后良好组322例和预后不良组94例;另选取同期该院体检健康的早产儿150例作为对照组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清KLF2、Ang1水平;采用Pearson相关分析NRDS患儿血清KLF2、Ang1水平与新生儿急性心理学评分围生期补充Ⅱ(SNAPPE-Ⅱ)、1 min Apgar评分的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清 KLF2、Ang1水平在预测 NRDS患儿预后中的价值.结果 NRDS组出生体重及血清KLF2、Ang1水平较对照组降低(P<0.05);NRDS患儿血清KLF2、Ang1水平及1 min Apgar评分随患儿病情严重程度加重而逐渐降低(P<0.05);与预后良好组比较,预后不良组NRDS患儿血清KLF2、Ang1水平均降低,SNAPPE-Ⅱ评分升高(P<0.05);NRDS患儿血清KLF2、Ang1水平与SNAPPE-Ⅱ评分均呈负相关(P<0.05),与1 min Apgar评分均呈正相关(P<0.05);血清KLF2、Ang1水平预测NRDS患儿预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.931、0.909,二者联合预测NRDS患儿预后不良的AUC为0.949,高于KLF2、Ang1单独预测,且灵敏度为96.81%.结论 血清KLF2、Ang1水平在NRDS患儿中均降低,二者水平均随NRDS患儿病情严重程度加重而逐渐降低,且二者在预测NRDS患儿预后中具有重要价值.

Krüppel样因子12(KLF12)是Krüppel样因子(KLF)家族成员之一,作为真核生物的转录因子,它参与肾脏发育,脂代谢,子宫内膜蜕膜化,肿瘤细胞增殖、侵袭、失巢凋亡等多种生物学进程.作者对KLF12在以上生物学进程中的研究进展作一综述,为进一步探究KLF12参与疾病发生、发展的分子机制提供理论基础,也为KLF12可能作为判断肿瘤预后新的分子标志物和治疗靶点提供理论依据.

目的 探讨Krüpple样转录因子12(KLF12)参与结直肠癌上皮-间充质转化(EMT)的机制.方法 应用免疫组织化学技术检测85例结直肠癌手术患者肿瘤与癌旁肠黏膜组织中KLF12及E-钙黏素(E-cadherin)、N-钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Snail蛋白表达,患者均有完整的临床及随访资料.合成KLF12-小干扰RNA(siRNA)转染结肠癌细胞株HT29;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;荧光实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测各基因的mRNA和蛋白表达.结果 免疫组织化学结果显示结直肠癌组织中KLF12、N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白阳性率明显高于癌旁肠黏膜,而E-cadherin在肿瘤组织中的阳性率低于癌旁肠黏膜(x2=43.724、26.145、35.788、10.985、59.225,P =0.000).KLF12蛋白阳性表达的患者肿瘤浸润程度较深(x2=7.773,P=0.005).KLF12蛋白阳性表达的患者生存率低于阴性者(x2=8.724,P=0.003).各结肠癌细胞株中,HT29的KLF12蛋白表达最强(P =0.000).抑制HT29细胞KLF12表达后细胞的活性及迁移和侵袭能力明显减弱(F=22.541、15.002、21.908,P=0.000);抑制HT29细胞KLF12表达后N-cadherin、Snail表达减弱,E-cadherin表达增强(P=0.000).结论 KLF12通过参与了肿瘤的EMT过程来促进结直肠癌的侵袭转移.

目的 研究Krüppel样转录因子12(KLF12蛋白)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中表达情况与程序性死亡受体1(PD-1)及程序性死亡受体配体1(PD-L1)的关系.方法 114例NSCLC患者的病灶标本作为实验组(n=114),另于手术时取患者癌旁的正常组织作为对照组(n=114).通过免疫组化染色,观察两组KLF12蛋白、PD-1及PD-L1表达情况.采用Spearman分析法分析KLF12蛋白与PD-1及PD-L1关系.采用Logistic回归分析分析NSCLC患者中KLF12蛋白表达阳性的危险因素.结果 实验组免疫组化染色后PD-1阳性率与PD-L1阳性率明显分别高于对照组(P<0.05).实验组KLF12蛋白阳性率明显高于对照组(P<0.05).NSCLC患者PD-1、PD-L1与KLF12蛋白相关性较高,均呈正相关(P<0.05).有淋巴结转移患者KLF12蛋白阳性率高于无淋巴结转移患者(P<0.05);PD-1表达阳性患者KLF12蛋白阳性率与PD-L1表达阳性患者KLF12蛋白阳性率分别高于PD-1阴性患者、PD-L1阴性患者(P<0.05).Logistic回归分析显示,NSCLC患者KLF12蛋白表达阳性与伴淋巴结转移、PD-1及PD-L1表达阳性有关(P<0.05).结论 NSCLC患者病灶组织中KLF12蛋白、PD-1及PD-L1均处于高表达状态.且KLF12蛋白的高表达与PD-1及PD-L1阳性密切相关.

目的 探究Krüppel样因子12(KLF12)在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及其对程序性死亡因子配体1(PD-L1)的调控机制.方法 收集2017年5月至2019年5月福建医科大学附属宁德市医院收治的87例NSCLC患者的癌组织及癌旁正常组织标本用于本研究,采用免疫组化染色法检测KLF12和PD-L1蛋白在NSCLC组织及癌旁正常组织中的表达水平,分析KLF12、PD-L1表达与NSCLC患者临床病理特征的关系,采用Spearman相关分析NSCLC患者中KLF12、PD-L1表达的相关性.将人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299分为siRNA-NC组(转染KLF12-siRNA)和siRNA-KLF12组(转染无关干扰序列),采用qRT-PCR检测两组KLF12、PD-L1 mRNA表达水平,采用Western blot检测两组KLF12、PD-L1蛋白表达水平.结果 KLF12和PD-L1蛋白在NSCLC组织中阳性表达率显著低于癌旁正常组织(P＜0.05);TNM分期不同的NSCLC患者癌组织中KLF12、PD-L1表达水平差异具有统计学意义(P＜0.05);KLF12与PD-L1在非小细胞肺癌中的表达呈正相关(P＜0.05);siRNA-KLF12组KLF12、PD-L1 mRNA及蛋白表达水平较siRNA-NC组明显下降(P＜0.05).结论 KLF12、PD-L1在非小细胞肺癌中表达水平均呈下降趋势,PD-L1表达受KLF12调控,KLF12可能通过促进PD-L1转录从而增加其表达,有望成为抗非小细胞肺癌的新治疗靶点.

目的 研究敲低Krüppel样因子4(KLF4)基因对RAW264.7巨噬细胞极化的影响.方法 采用RNA干涉技术(RNAi)构建敲低KLF4的慢病毒载体,转染RAW264.7巨噬细胞获得KLF4基因沉默的稳定细胞株.采用白细胞介素4(IL-4)刺激野生型、KLF4敲低组和阴性对照组巨噬细胞,反转录PCR检测细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及精氨酸酶1(Arg1)、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)的mRNA水平,免疫细胞化学染色检测和定位巨噬细胞iNOS及Arg1蛋白.结果 敲低KLF4基因后,RAW264.7细胞的iNOS、IL-1β的mRNA含量明显增高,而TNF-α、Arg1、IL-10及TGF-β的mRNA含量则明显降低;IL-4处理野生型RAW264.7细胞后KLF4、Arg1、IL-10及TGF-β的mRNA的表达增加,iNOS、IL-1β及TNF-α mRNA的表达减少;IL-4处理敲低KLF4的细胞,其iNOS、IL-1β及TNF-α mRNA含量低于野生型组,但高于阴性对照组,而Arg1、IL-10及TGF-β mRNA含量较高于野生型组,而Arg1及IL-10低于阴性对照组;IL-4处理敲低KLF4细胞12 h后,与野生型细胞相比,iNOS蛋白表达显著减少,而Arg1的蛋白的表达则明显增加.结论 敲低KLF4促进RAW264.7巨噬细胞向M1型极化、抑制巨噬细胞向M2型极化.