1型糖尿病（T1DM）是一种慢性自身免疫性疾病，以胰岛β细胞进行性破坏为特征。CD4 +和CD8 +记忆T细胞均在T1DM发病中发挥着重要作用，尤其是CD8 +T细胞被认为是介导β细胞破坏的关键T细胞。自身反应性记忆T细胞的持续存在被认为是T1DM慢性炎症持续存在的主要原因。T1DM患者自身反应性T细胞主要是效应记忆细胞。研究发现通过清除或调节自身反应性T细胞可以保护胰岛β细胞功能。在T1DM免疫治疗中涉及记忆T细胞免疫治疗方法包括T细胞清除、清除和抑制动态平衡细胞因子、T细胞表面共刺激因子的阻断、抑制Kv1.3通道等。这些免疫治疗方法对记忆T细胞亚群都会有所影响。

目的:探讨可变剪接调控RE-1序列沉默转录因子(REST)在血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化及腹主动脉瘤(AAA)发生发展中起到的作用。方法:检测人AAA组织和小鼠AAA模型及对照正常动脉中膜VSMC形态和弹性纤维改变；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质免疫印迹法(western blot)检测AAA组织及对照正常动脉组织中REST及其剪接异构体REST4的表达。RT-qPCR和Western blot检测沉默REST对人原代主动脉平滑肌细胞(HASMC)收缩型标志物α-SMA、合成型标志物波形蛋白(VIM)以及钾离子通道Kv1.3蛋白表达水平的影响。细胞增殖检测法(CCK-8)和细胞结晶紫染色实验检测沉默REST后HASMC增殖能力的改变。 t检验验证定量数据的统计学差异。 结果:人和小鼠AAA中膜平滑肌细胞形态由梭型向分支型转化，AAA组REST表达低于对照组、REST4表达高于对照组(REST＝0.143±0.086， t＝5.672, P<0.05；REST＝115.245±8.909， t＝21.460, P<0.01)。沉默REST后，α-SMA表达量低于对照组，VIM和Kv1.3表达量高于对照组(α-SMA＝0.335±0.030， t＝9.711， P<0.01；VIM＝10.177±0.728， t＝15.170, P<0.01；Kv1.3＝13.427±1.103， t＝14.690, P<0.01)，同时沉默REST后，VSMC增殖能力高于对照组( A450：2.41±0.27比3.85±0.14， t＝6.744， P<0.01；光密度值：29.00±2.46比348.25±27.36， t＝16.440， P<0.01)。上述作用可被Kv1.3特异性抑制剂逆转(α-SMA＝2.448±0.498， t＝4.314， P<0.05；VIM＝0.758±0.030， t＝4.018， P<0.05)。 结论:AAA中膜平滑肌细胞中REST可变剪接上调，抑制REST功能，激活Kv1.3表达，进而诱导VSMC表型转化。

目的:探讨依普利酮(EPL)对慢性心力衰竭(CHF)患者CD4+T淋巴细胞Kv1.3等通道的mRNA及蛋白质表达的影响.方法:收集慢性心衰Ⅱ、Ⅲ期的患者及正常人全血样本(30例vs 20例).免疫磁珠分选外周血CD4+T淋巴细胞,利用流式细胞仪检测其纯度,CCK-8法检测不同浓度的EPL对CD4+T淋巴细胞增殖的影响.共分为3组,Control组、CHF组及CHF+ EPL组.RT-qPCR检测各组培养体系中的Kv1.3、KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达;In-cell Western blot技术检测CD4+T淋巴细胞膜上Kv1.3通道蛋白质的表达.结果:EPL的最佳抑制浓度为30 μmol/L;CHF组Kv1.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别是Control组的10.74倍和1.20倍(P＜0.01),CHF+ EPL组Kv1.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别比CHF组降低了64.80％和39.62％ (P＜0.01);CHF组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达分别是Control组的4.73倍和3.77倍(P＜0.01),CHF+ EPL组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达比CHF组分别降低了19.30％和37.14％(P＜0.01).结论:CD4+T淋巴细胞的三种离子通道的mRNA和/或蛋白质在慢性心力衰竭情况下均有高表达,依普利酮均能明显下调三种离子通道的mRNA和/或蛋白质,其中Kv1.3通道的变化尤为突出,推测醛固酮受体拮抗剂可能通过抑制CD4+T淋巴细胞膜上的Kv1.3通道的激活,减少T淋巴细胞的活化/增殖,最终抑制CHF过程中炎症作用的发生发展而对心衰有利.

目的 研究Kv1.1及Kv1.3通道亚型对小鼠肠系膜微细血管的调节作用.方法 以健康6～8周C57BL/6雄性小鼠肠系膜微细动脉作为研究对象,应用丹麦DMT520A离体微血管张力测定系统记录血管张力变化.应用广谱电压依赖性钾通道(Kv)阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1,Kv1.1通道选择性阻断剂TEA分别作用于静息状态,KCl及NE预收缩动脉,记录血管张力变化情况.应用Kv通道阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1作用于血管,观察Kv及Kv1.3通道在0 mmol/L Ca2+及2 mmol/L Ca2+ K-H液中对NE收缩曲线的作用.结果 Kv通道阻断剂4-AP可引起静息状态的血管收缩,并进一步收缩KCl预收缩的血管,但浓度依赖性舒张NE预收缩的动脉,并且与对照组相比,4-AP能明显抑制NE在0 mmol/L Ca2+液中所致的血管收缩[(3.45-±0.24)mN vs(0.11±0.02) mN,P＜0.01].Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1未能收缩静息状态的血管,但可使KCl预收缩的血管发生轻微舒张反应,却明显舒张NE预收缩的动脉,而且PAP-1既可抑制NE在0 mmol/L Ca2+ K-H液中所致的血管收缩[对照组vs PAP-1组:(4.28 ±0.53)mN vs(2.75 ±0.49)mN,P＜0.05],又可抑制在2 mmol/L Ca2+液中的收缩张力[对照组vsPAP-1组:(7.08 ±0.58)mN vs(5.90 ±0.80)mN,P＜0.05].Kv1.1通道选择性阻断剂TEA可引起静息状态的血管收缩,但在0 mmol/L Ca2+液中该作用消失,同时对KCl或NE预收缩的动脉均无明显作用.结论 Kv通道可调节小鼠肠系膜动脉的舒缩反应.其中Kv1.1通道主要发挥血管收缩调节作用,可能与促进血管平滑肌细胞外钙内流有关,而Kv1.3通道主要发挥血管舒张调节作用,可能同时抑制平滑肌细胞内钙释放和细胞外钙内流.

目的 通过观察慢性心力衰竭(Chronic heart failure,CHF)患者外周血免疫因子、Th17/Treg比例及CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)电压依赖性 Kv1.3 钾离子通道电流的变化,为探究心力衰竭发生、发展的免疫学机制提供一定理论依据.方法 密度梯度磁性分选Treg细胞后使用流式液相多重蛋白定量技术(Cytometric Bead Array,CBA)测定CHF组与正常对照组外周血血浆中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF、IFN-γ荧光强度(Mean fluorescence intensity,MFI);流式法检测 CHF组与正常对照组全血中 Th17/Treg比例的变化;使用 ELISA法测定TGF-β、IL-10的浓度;膜片钳实验分 4 组:Psora-4 组、CHF组、正常对照组、CHF+EPL组.Psora-4组使用Kv1.3 通道阻断剂Psora-4灌流正常对照组细胞,CHF组与正常对照组细胞不做干预直接检测,CHF+EPL组使用依普利酮(eplerenone,EPL)灌流 CHF患者 Treg 细胞,通过全细胞膜片钳技术记录各组Treg细胞Kv1.3 钾离子通道的电流变化.结果 CHF组 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF、IFN-γ的 MFI明显强于正常对照组(P ＜0.05);Th17/Treg比例有统计学差异:CHF组 vs 正常对照组[(2.97±0.86)vs(0.95± 0.12)],(P ＜0.01);CHF组TGF-β、IL-10的浓度明显大于正常对照组(P ＜0.01);Psora-4组Treg细胞 Kv1.3 钾离子通道电流密度峰值较正常对照组明显减小[(35.6±3.51)vs(106.11±10.47)]pA/pF,(P ＜0.01);CHF组外周血Treg细胞Kv1.3 钾离子通道电流密度峰值较正常对照组明显增大[(259.57±19.07)vs(106.11±10.47)]pA/pF,(P ＜0.01);CHF+EPL 组 CD4+CD25+Treg 细胞 Kv1.3 钾离子通道电流密度峰值较 CHF 组明显减小[(41.21±3.61)vs(259.57±19.07)]pA/pF,(P ＜0.01).结论 CHF组较正常对照组各免疫因子明显增多,Th17/Treg细胞比例变高,CD4+CD25+Treg细胞Kv1.3 钾离子通道电流密度增大且依普利酮可降低心衰组电流密度,提示Kv1.3 钾离子通道可能参与慢性心力衰竭的发生和发展.

目的:检测Kv1.3钾通道在哮喘患者外周血T淋巴细胞中的表达水平,研究Kv1.3钾通道阻滞剂对哮喘患者外周血T淋巴细胞增殖及产生Th2细胞因子的影响,从而探讨Kv1.3钾通道阻滞剂应用于治疗哮喘患者慢性气道炎症的可能.方法:分离哮喘患者及健康对照者的外周血T淋巴细胞,检测T细胞中Kv1.3钾通道的mRNA及蛋白水平,并检测Kv1.3钾通道抑制剂ShK对T细胞增殖及产生Th2细胞因子的作用.结果:哮喘患者外周血T淋巴细胞的Kv1.3水平较健康对照者明显增高,Kv1.3钾通道抑制剂ShK能明显抑制T淋巴细胞的增殖及产生Th2细胞因子的能力.结论:Kv1.3可能是哮喘患者T细胞参与气道炎症的形成及发展的重要蛋白.选择性阻断Kv1.3钾通道可能成为哮喘未来治疗的方向之一.

目的 探讨Kv1.3钾通道阻滞剂应用于治疗慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)患者慢性气道炎症的可能.方法 选取慢阻肺患者及健康对照者各50例,分离外周血T淋巴细胞,实时荧光定量PCR及Western blot检测T细胞中Kv1.3钾通道的mRNA及蛋白水平,CCK-8法检测Kv1.3钾通道抑制剂ShK对T细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR法检测ShK对T细胞产生IL-2的作用.结果 慢阻肺患者外周血T淋巴细胞的Kv1.3的mRNA水平及蛋白水平较健康对照者明显增高,Kv1.3钾通道抑制剂ShK能明显抑制T淋巴细胞的增殖及产生IL-2的能力.结论 Kv1.3可能是慢阻肺患者T细胞参与气道炎症的形成及发展的重要蛋白.选择性阻断Kv1.3钾通道可能成为慢阻肺未来治疗的方向之一.

目的 探究靶向RNA干扰(RNAi)KCNA3(Kv1.3)基因后,体外给予依普利酮(eplerenone,EPL),分析Tregs细胞活化增殖的变化.方法 将慢病毒载体转染至大鼠调节性T细胞(Tregs)后,qPCR法和全细胞膜片钳法检测敲减效率.ELISA法检测Tregs组、Tregs+EPL组、RNAi-Tregs组、RNAi-Tregs+EPL组细胞因子IL-10、TGF-β 水平的变化.结果 慢病毒成功转染Tregs细胞,Kv1.3通道mRNA水平和电流密度抑制率分别为78％ 和71.3％;与Tregs组相比,RNAi-Tregs组内外液TGF-β 水平明显降低(P<0.01);Tregs+EPL组内外液TGF-β 水平均降低(P<0.05);与RNAi-Tregs组相比,RNAi-Tregs+EPL组内外液TGF-β 水平无明显变化;而Tregs组、Tregs+EPL组、RNAi-Tregs组和RNAi-Tregs+EPL组内外液IL-10水平变化不明显.结论 Kv1.3通道介导Tregs的活化增殖,而EPL可通过直接抑制Tregs Kv1.3通道,减少Tregs活化增殖,进而抑制TGF-β 的分泌水平,说明依普利酮是Kv1.3通道的特异性阻断剂.

目的 探讨血压级别不同的新疆哈萨克族原发性高血压患者T淋巴细胞上电压依赖性钾通道(Kv1.3钾通道)表达的差异.方法 从2018年1-8月,在新疆医科大学第一附属医院、乌鲁木齐市友谊医院和乌鲁木齐市达坂城区柴窝堡社区卫生服务中心选取初诊且未经治疗的哈萨克族高血压患者90例,其中高血压1级组30例,年龄(49.2±9.1)岁,高血压2级组30例,年龄(53.2±8.3)岁,高血压3级组30例,年龄(53.1±9.9)岁;血压正常的哈萨克族健康体检者30名(男女各15名)为对照组,年龄(49.0±9.8)岁.收集静脉血,分离T淋巴细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Western blot技术检测T淋巴细胞Kv1.3钾通道的基因和蛋白表达量及T淋巴细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素6(IL-6)基因表达量.结果 与对照组相比,高血压1、2、3级组的Kv1.3钾通道mRNA相对表达量逐渐增高[(1.55±0.54)、(1.75±0.72)、(3.12±1.40)比(1.08±0.49),P＜0.05];与对照组相比,高血压1、2、3组的Kv1.3钾通道蛋白相对表达量逐渐增高[(0.17±0.04)、(0.18±0.06)、(0.40±0.17)比(0.11±0.04),P＜0.05];与高血压1、2级组相比,高血压3级组Kv1.3钾通道mRNA及蛋白相对表达明显增加(P＜0.05).与对照组(0.42±0.21)相比,高血压2级组(1.82±0.71)、高血压3级组(2.33±1.02) TNF-α mRNA相对表达增高(P＜0.05);与对照组(0.27±0.11)相比,高血压1级组(1.10±0.64)、高血压2级组(2.68±1.26)、高血压3级组(2.99±1.57)IL-6 mRNA相对表达增高(P＜0.05).结论 T淋巴细胞上的Kv1.3钾通道在新疆哈萨克族不同级别高血压患者中的表达都增加,其中在高血压3级患者当中的表达增加更为明显.

目的 观察Kv1.3钾通道在LOX-1摄取oxLDL中的作用,并探讨其机制.方法 分别以慢病毒载体shRNA-Kv1.3-LV3-pGLV-h1-GFP-puro和Kv1.3-LV5-EF1 a-GFP-Puro转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),以获得HUVECs细胞中下调和上调表达Kv1.3蛋白.利用全细胞膜片钳技术记录Kv1.3蛋白过表达和下调的HUVECs Kv1.3 I/V曲线.以ox-LDL与HUVECs共孵育后,分别应用免疫比色法和Fluo-3/AM荧光标记法测定细胞内胆固醇和钙离子相对含量.经Western blot法测定Kv1.3、LOX-1、p38、p38磷酸化水平.结果 shRNA950转染组HUVECs Kv1.3 mRNA和蛋白表达量较空白对照组显著降低(P<0.05),过表达转染组Kv1.3 mRNA和蛋白表达量较空白对照组显著升高(P<0.05).Kv1.3表达上调后,I/V曲线上移,该效应可被奎尼丁抑制;Kv1.3表达下调后,I/V曲线下移.Kv1.3过表达组胆固醇相对水平明显高于对照组(P<0.05),shRNA950+oxLDL组胆固醇的相对含量低于oxLDL组(P<0.05).Western blot法检测显示,Kv1.3过表达组的LOX-1蛋白表达量较对照组升高(P<0.05),Kv1.3敲低组的LOX-1蛋白水平较对照组减低(P<0.05);Kv1.3过表达组磷酸化p38与p38蛋白水平的比值高于对照组二者的比值(P<0.05),Kv1.3敲低组磷酸化p38与p38蛋白表达量的比值低于对照组两者的比值(P<0.05).结论 Kv1.3钾通道经p38信号通路参与调节HUVECs LOX-1受体摄取oxLDL.该研究为阐明LOX-1结合oxLDL的电荷依赖性机制增添了新的实验依据.