目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)H19靶向微小RNA(miRNA，miR)-675/EHZ2对结肠癌细胞增殖的影响。方法:收集2013年7月到2018年7月郑州大学附属肿瘤医院结肠癌组织及其对应的癌旁组织各150例，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析LINC00052和miR-330-3p表达水平。待细胞完全贴壁后，采用lncRNAH19 shRNA、lncRNA control shRNA、miRNA Control和miR-675慢病毒感染SW480细胞，感染12 h更换含嘌呤霉素(1 mg/L)的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基处理24 h，存活的细胞即为稳定细胞株，分别命名为Lnc Control组、lncRNAH19 KD组、miR-Control组和miR-675组。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNAH19和miR-675关系以及miR-675的靶基因。在结肠癌细胞株SW480建立lncRNAH19沉默细胞株和miR-765过表达细胞株，采用5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法和细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定不同处理结肠癌细胞的增殖能力。体内异体移植瘤实验分析不同处理对成瘤的影响。采用 t检验分析两组数据的统计学意义。 结果:与癌旁组织lncRNAH19和miR-675[(1.12±0.18)、(1.09±0.17)]比较，结肠癌组织中lncRNAH19表达水平(3.49±0.27)显著增加，miR-675表达水平(0.32±0.11)显著下调，差异均有统计学意义( t＝3.109、2.981， P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EdU阳性率[(89.44±10.25)%、(85.41±12.33)%]比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EdU阳性率[(30.14±6.89)%、(41.72±8.32)%]显著下调，差异有统计学意义( t＝2.981、2.981， P<0.05)。CCK-8实验显示，与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞增殖能力比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调，差异有统计学意义( F＝2.441、2.592， P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞体内增殖能力比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调，差异有统计学意义( F＝1.980、2.019， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶分析显示lncRNAH19能与miR-675互补结合，EHZ2是miR-675的靶蛋白。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(1.19±0.13)、(1.04±0.14)]比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(0.32±0.13)、(0.47±0.13)]显著下调，差异有统计学意义( t＝3.109、3.011， P<0.05)。 结论:lncRNAH19通过靶向miR-675/EHZ2调控结肠癌细胞的增殖。

目的:探讨LINC00052通过靶向miR-148b-3p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的分子机制。方法:将肾小管上皮细胞HK-2分为对照组(NC组)、高糖组(HG组)、pcDNA-LINC00052+HG组、pcDNA-NC+HG组、anti-miR-148b-3p+HG组、anti-miR-NC+HG组、miR-148b-3p+pcDNA-LINC00052+HG组、miR-NC+pcDNA-LINC00052+HG组；采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00052和miR-148b-3p的表达水平；蛋白质印迹法(Western blot)检测E钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经钙黏蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(vimentin)蛋白表达；CCK-8检测细胞活性；流式细胞术检测细胞凋亡；双荧光素酶报告实验分为：miR-NC+LINC00052-WT组、miR-148b-3p+LINC00052-WT组、miR-NC+LINC00052-MUT组、miR-148b-3p+LINC00052-MUT组；将LINC00052过表达载体、抑制表达载体及其阴性对照转染至HK-2细胞中，分为：pcDNA-NC组、pcDNA-LINC00052组、si-NC组、si-LINC00052组，检测LINC00052和miR-148b-3p的靶向关系。结果:与NC组比较，HG组的细胞活性、E-Cadherin和LINC00052表达水平降低(均 P<0.001)，miR-148b-3p、N-Cadherin和vimentin表达水平、细胞凋亡率升高(均 P<0.001)。与pcDNA-NC+HG组比较，pcDNA-LINC00052+HG组的miR-148b-3p、N-Cadherin和vimentin表达水平以及细胞凋亡率降低，E-Cadherin表达水平和细胞活性升高(均 P<0.001)。与anti-miR-NC+HG组比较，anti-miR-148b-3p+HG组的miR-148b-3p、N-Cadherin和vimentin表达水平以及细胞凋亡率降低，E-Cadherin表达水平和细胞活性升高(均 P<0.001)。与pcDNA-NC组比较，pcDNA-LINC00052组的LINC00052表达水平升高，miR-148b-3p表达水平降低(均 P<0.001)；与si-NC组比较，si-LINC00052组的LINC00052表达水平降低，miR-148b-3p表达水平升高(均 P<0.001)。与miR-NC+pcDNA-LINC00052+HG组比较，miR-148b-3p+pcDNA-LINC00052+HG组miR-148b-3p、N-Cadherin和vimentin表达水平以及细胞凋亡率升高，E-Cadherin表达水平以及细胞活性降低(均 P<0.001)。 结论:LINC00052通过靶向miR-148b-3p抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡及EMT，促进细胞增殖。

目的:用基因捕获技术在肝癌细胞SMMC7721细胞中寻找与肝癌侵袭和迁移相关的基因.方法:首先,将pU21质粒转染到肝癌细胞SMMC7721细胞,用G418筛选出单克隆稳定细胞系;其次,采用Transwell小室实验和划痕实验,检测这些单克隆细胞侵袭和迁移能力的变化;最后,用5'-Full RACE实验、T克隆及基因测序检测这些细胞系中被pU21质粒捕获的基因.结果:成功获得了约300株稳定转染pU21质粒的单克隆细胞系,得到了约30株侵袭和迁移能力增强的细胞株和约40株侵袭和迁移能力减弱的细胞株.通过5'-Full RACE实验、T克隆及基因测序检测,证明了在A554细胞系中,被pU21质粒捕获的基因是long inter-genic non-protein coding RNA 52(LINC00052).结论:应用基因捕获技术筛选肝癌侵袭和迁移相关基因是可行的.

目的 观察LINC00052靶向微小RNA(miRNA,miR)-330-3 p/RCAN1对肝癌增殖和迁移的影响.方法 收集正常肝癌组织和癌旁组织各100例,采用荧光定量PCR分析LINC00052和miR-330-3p表达水平.采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析LINC00052和miR-330-3p间的关系以及miR-57的靶基因;在肝癌细胞株MHCC97H中构建LINC00052敲降细胞株和miR-330-3p过表达细胞株,采用EDU法和Transwell实验肝癌细胞的增殖和迁移能力.结果 与肝癌癌旁组织LINC00052和miR-330-3p[(1.01±0.21),(1.12±0.21)]比较,肝癌组织LINC00052表达水平(0.41±0.13)显著下降,miR-330-3p表达水平(2.37±0.20)显著下调,差异均有统计学意义(t=3.691、3.110,P＜0.05)].生物信息学和双荧光素酶分析显示LINC00052能与miR-330-3p互补结合,miR-330-3p调节着RCAN1蛋白表达.与Linc-contrtol组细胞[(67.43±9.32)、(120.32±11.32)]比较,LINC00052组肝癌细胞的增殖和迁移[(29.44±6.81),(73.41±9.76)]明显抑制,差异均有统计学意义(t=4.198、3.109,P＜0.05).与miR-control组[(69.33 ±10.98)、(130.22.33±13.19)]比较,miR-330-3p KD组肝癌细胞增殖和迁移[(35.32±7.12),(63.39±10.32)]显著抑制,差异均有统计学意义(t=3.091、4.011,P＜0.05).与LINC-contrtol组和miR-control组肝癌细胞RCAN1表达水平[(0.51±0.13)、(0.49±0.10)]比较,LINC00052组和miR-330-3p KD组细胞RCAN1蛋白表达水平[(1.23±0.23)、(1.03±0.12)]显著增加,差异有统计学意义(t=4.339、4.211,P＜0.05).结论 LINC00052通过靶向作用于miR-330-3p/RCAN1进而调节着肝癌细胞的增殖和迁移.

目的 探讨LINC00052在甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导人支气管上皮(16HBE)细胞恶性转化过程中的表达变化及其作用.方法 将16HBE细胞分为二甲基亚砜(DMSO)对照组和GMA处理组,收集两组处理后的第10代(P10,前期)、第20代(P20,中期)和第30代(P30,后期)细胞.采用LncRNA芯片分析LINC00052在不同时期的表达改变,借助生物信息学数据库进行靶基因和功能预测,并通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测LINC00052和预测靶基因NTRK3的相对表达量.结果 芯片结果显示,与对照组比较,LINC00052在转化的P10、P20和P30分别上调1.32倍、下调1.64倍和下调4.92倍.qPCR结果显示,与同期DMSO对照组比较,P10、P20和P30细胞LINC00052的相对表达量分别上调1.55倍、下调1.20倍和下调2.35倍,P10、P30细胞NTRK3的相对表达量分别上调1.37、1.69倍,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在GMA诱导16HBE细胞恶性转化过程中,LINC00052在转化前期表达量上调,中期、后期表达量下调,并可能通过影响靶基因NTRK3的表达发挥抑癌基因的作用.

目的 探讨llinc000522调控Wnt通路影响胃癌侵袭转移的机制.方法 选取胃癌细胞系中的SGC-7901细胞,通过长链非编码RNA(IncRNA)表达谱与逆转录定量聚合酶链锁反应(qRT-PCR)结合,筛选出与INC0005相关且在胃癌细胞中具有侵袭转移作用的微小RNA( miRNA);通过体外细胞转染实验,研究Ilinc00052和miRNA的表达变化;通过分子实验,研究Ilinc00052表达及其对Wnt／β-连环蛋白( β-catenin)表达的影响,探索linc00052 能否通过调控miRNA影响Wnt／β-catenin 信号通路,影响胃癌细胞的侵袭转移.结果 通过Transwell小室试验测得未转染质粒组,穿膜细胞数为(134.10 ±4.29)个,llinc000522过表达转染质粒组穿膜细胞数为(169.24 ±6.99)个,差异有统计学意义( t ＝8.956, P ＝0.001 ).划痕实验显示, llinc000522过表达转染质粒组迁移距离显著高于空载质粒转染组(r＝0.907,P＜0.01). llinc000522过表达转染质粒组克隆形成率与空载质粒组相比明显提高[(92.75 ±6.32)%比(73.34 ±9.14)%,t＝5.998,P＜0.05].与空白质粒转染相比,llinc000522过表达转染组Wnt1、Wnt3a、Wnt2、β-catenin的miRNA表达均显著上调(均P＜0.05),而miRNA转染组对其表达并无明显作用,而当llinc000522、miRNA过表达共转染胃癌细胞后,Wnt1、Wnt3a、Wnt2、β-catenin miRNA 转录水平提高[(1.82 ±0.11)、(1.52 ±0.15)、( 1.42 ±0.21)、(1.71 ±0.19),P＜0.05],但其表达仍低于单独llinc000522转染的基因miRNA转录水平.与空白质粒转染相比,llinc000522过表达转染组Wnt1、Wnt3a、Wnt2、β-catenin蛋白表达均显著上调(均P＜0.05),而miRNA转染组对其表达并无明显作用,而当llinc000522、 miRNA 过表达共转染胃癌细胞后,Wnt1、Wnt3a、 Wnt2、β-catenin蛋白表达也明显提高[(1.53 ±0.09)、(1.4 ±0.21)、(1.33 ±0.07)、(1.47 ±0.19),P＜0.05],但其表达仍低于单独llinc000522转染的基因蛋白表达水平.结论 在胃癌细胞中,llinc000522可通过调控miR-NA水平,影响Wnt／β-catenin通路,进而影响胃癌的侵袭转移.

目的:探究非小细胞肺癌(NSCLC)组织及其细胞系内基因长链非编码RNA00052(long intergenic non-coding RNA 00052,Linc00052)的表达水平,以及Linc00052在肺癌中的临床意义、作用机制及与患者预后的相关性.方法:利用逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常肺细胞系与肺癌细胞系之间Linc00052表达水平的差异,肺癌组织与癌旁组织之间Linc00052表达水平的差异,并分析Linc00052与肺癌临床病理特征的相关性,Kaplan-Meier生存曲线分析Linc00052与肺癌预后之间的相关性.在A549细胞系中过表达Linc00052,采用MTT实验检测过表达Linc00052前后细胞增殖变化,并采用qRT-PCR检测miR-330-3p表达变化.结果:肺癌细胞系较正常肺细胞系中Linc00052明显低表达,同时肺癌组织比癌旁组织中Linc00052明显低表达(P<0.01);Linc00052的表达与肿瘤的分化程度(P=0.02)、淋巴结转移(P=0.002)、远处转移(P=0.005)和临床分期(P=0.001)有关.肺癌的Linc00052表达水平减低与肺癌患者的预后不良有关(P<0.05).过表达Linc00052后可显著抑制细胞增殖(P<0.05),qRT-PCR结果证实,过表达Linc00052可显著下调miR-330-3p mRNA的表达水平(P<0.05).结论:Linc00052在肺癌组织中表达下调,并与肺癌的发生发展及预后密切相关,Linc00052有可能通过负调控miR-330-3p在肺癌中发挥抑癌作用.

目的 明确长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)LINC00052在肿瘤坏死因子α(tumor necro-sis factorα,TNF-α)诱导人关节软骨细胞损伤中的作用,并阐明其对miR-145的调控机制.方法 利用0、10及30 ng/mL TNF-α诱导建立人C-20/A4关节软骨细胞损伤模型.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantita-tive polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测LINC00052与miR-145的表达及二者的相关性.通过特异性短发夹RNA干扰C-20/A4细胞中LINC00052的表达,采用四唑盐比色法[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazo-lium bromide,MTT]检测细胞增殖能力.采用蛋白质印迹检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3,CASP3)、cleaved CASP3、Bcl-2相关X(Bcl-2 associated X,BAX)蛋白的表达水平.采用酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症因子白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6及IL-13的浓度.采用双荧光素酶报告基因实验分析LINC00052对miR-145的直接调控作用.采用拯救实验验证LINC00052靶向miR-145在TNF-α诱导C-20/A4细胞损伤中的作用.采用t检验与方差分析进行统计比较.结果 LINC00052在0、10及30 ng/mL TNF-α诱导C-20/A4细胞中的表达水平呈上调趋势,而miR-145呈下调趋势,二者表达水平呈负相关(P＜0.05).干扰LINC00052降低TNF-α诱导C-20/A4细胞增殖能力,增加CASP3、cleaved CASP3及BAX的蛋白表达水平,并提高IL-1β、IL-6及IL-13的浓度(P＜005).miR-145是LINC00052的直接靶基因,干扰LINC00052上调C-20/A4细胞中miR-145的表达水平(P＜0.05).干扰miR-145部分逆转LINC00052抑制对TNF-α诱导C-20/A4细胞增殖、凋亡及炎症反应的影响(P＜0.05).结论 LINC00052靶向miR-145发挥对TNF-α诱导人关节软骨细胞损伤的保护作用,其机制可能与促进增殖并抑制凋亡与炎症反应有关.