目的:探讨脓毒症中微小RNA-148b（miR-148b）靶向抑制诱骗受体3（DcR3）对巨噬细胞极化的影响。方法:2019年12月至2022年12月期间，在上海交通大学医学院附属松江医院（筹）检验科，检测3例脓毒症患者及3名健康对照血清microRNA表达。采用佛波酯（PMA）诱导人急性单核细胞白血病细胞THP-1分化为巨噬细胞，继而加入脂多糖（LPS）刺激建立脓毒症细胞模型，检测miR-148b和DcR3表达变化。过表达DcR3检测LPS（100 ng/ml）刺激巨噬细胞TNF-α、CD163及IL-10的表达水平。过表达miR-148b观察巨噬细胞极化分子标志物的变化。采用双荧光素酶报告基因实验测定miR-148b对DcR3的靶向调控作用。通过 t检验分析各组间是否具有统计学差异。 结果:LPS刺激THP-1巨噬细胞miR-148b表达下调（ P<0.05），DcR3表达升高（ P<0.01）；过表达DcR3抑制TNF-α的表达（ P<0.05），促进CD163（ P<0.01）和IL-10（ P<0.01）的表达，而加入miR-148b模拟物则相反；双荧光素酶报告基因实验证实miR-148b靶向结合 DcR3，抑制其转录和表达，流式细胞检测结果显示DcR3可逆转miR-148b对巨噬细胞CD86/CD163比值的促进作用（ P<0.05）。 结论:miR-148b靶向抑制DcR3的表达，从而抑制LPS诱导的巨噬细胞模型M2极化。

目的:探讨微小 RNA（microRNA，miRNA）在子宫内膜异位症（endometriosis，EMS）患者异位内膜组织中的表达特征。方法:收集2018年4月至2019年10月期间于厦门大学附属第一医院妇产科就诊EMS 患者异位内膜组织和对照组在位内膜组织开展实验。利用Illumina平台的miRNA测序检测内膜组织中 miRNA的表达情况。通过生物信息学分析差异表达的miRNAs及其潜在靶基因在EMS发生、发展中的作用。结合文献挑选6个具有显著差异的miRNAs（miR-98-5p、let-7c-5p、miR-495-3p、miR-200b-3p、miR-200c-3p、miR-148b-3p），应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）进行验证，并在构建miRNA-基因调控网络后初步验证其潜在靶基因。结果:测序结果显示，相比对照组，EMS患者异位内膜组织中有69个miRNAs出现差异表达（差异倍数>1.5， P<0.05），其中表达上调22个，表达下调47个。基因本体分析显示，差异表达的miRNAs所调控的靶基因在生物学过程中集中在与蛋白质修饰、发育调控、细胞代谢和形态结构等相关。KEGG pathway分析显示，靶基因富集于蛋白质功能、自噬、AGE-RAGE及MAPK信号通路中。qRT-PCR结果显示miR-98-5p、let-7c-5p、miR-200b-3p、miR-200c-3p的表达情况与测序结果一致。miRNA-基因共表达网络显示 miRNAs与所预测的靶基因间的相互关系。miRNAs潜在靶基因的qRT-PCR验证结果显示，miR-200b-3p、miR-200c-3p与 ZEB2呈负相关，miR-98-5p与 PGRMC1呈负相关，miR-98-5p、let-7c-5p与 ADIPOR2呈正相关。 结论:miR-98-5p、let-7c-5p、miR-200b-3p和miR-200c-3p在EMS患者异位内膜组织中存在显著差异表达，可能参与EMS的发生、发展。

目的:探讨LINC00052通过靶向miR-148b-3p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的分子机制。方法:将肾小管上皮细胞HK-2分为对照组(NC组)、高糖组(HG组)、pcDNA-LINC00052+HG组、pcDNA-NC+HG组、anti-miR-148b-3p+HG组、anti-miR-NC+HG组、miR-148b-3p+pcDNA-LINC00052+HG组、miR-NC+pcDNA-LINC00052+HG组；采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00052和miR-148b-3p的表达水平；蛋白质印迹法(Western blot)检测E钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经钙黏蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(vimentin)蛋白表达；CCK-8检测细胞活性；流式细胞术检测细胞凋亡；双荧光素酶报告实验分为：miR-NC+LINC00052-WT组、miR-148b-3p+LINC00052-WT组、miR-NC+LINC00052-MUT组、miR-148b-3p+LINC00052-MUT组；将LINC00052过表达载体、抑制表达载体及其阴性对照转染至HK-2细胞中，分为：pcDNA-NC组、pcDNA-LINC00052组、si-NC组、si-LINC00052组，检测LINC00052和miR-148b-3p的靶向关系。结果:与NC组比较，HG组的细胞活性、E-Cadherin和LINC00052表达水平降低(均 P<0.001)，miR-148b-3p、N-Cadherin和vimentin表达水平、细胞凋亡率升高(均 P<0.001)。与pcDNA-NC+HG组比较，pcDNA-LINC00052+HG组的miR-148b-3p、N-Cadherin和vimentin表达水平以及细胞凋亡率降低，E-Cadherin表达水平和细胞活性升高(均 P<0.001)。与anti-miR-NC+HG组比较，anti-miR-148b-3p+HG组的miR-148b-3p、N-Cadherin和vimentin表达水平以及细胞凋亡率降低，E-Cadherin表达水平和细胞活性升高(均 P<0.001)。与pcDNA-NC组比较，pcDNA-LINC00052组的LINC00052表达水平升高，miR-148b-3p表达水平降低(均 P<0.001)；与si-NC组比较，si-LINC00052组的LINC00052表达水平降低，miR-148b-3p表达水平升高(均 P<0.001)。与miR-NC+pcDNA-LINC00052+HG组比较，miR-148b-3p+pcDNA-LINC00052+HG组miR-148b-3p、N-Cadherin和vimentin表达水平以及细胞凋亡率升高，E-Cadherin表达水平以及细胞活性降低(均 P<0.001)。 结论:LINC00052通过靶向miR-148b-3p抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡及EMT，促进细胞增殖。

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性.方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组.比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平.采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性.乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析.血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析.结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P＜0.05).耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P＜0.05).Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均 P＜0.05).多因素 Logistic 回归分析显示,血清 miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p 是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P＜0.05).结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高.

目的 分析2型糖尿病和糖尿病肾病患者血清微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)的水平变化及其与临床和病理指标的相关性.方法 入组人群分为3组,(1)糖尿病肾病组:肾活检病理诊断明确为糖尿病肾病的患者(n=25,男14例,女11例);(2)2型糖尿病组:尿微量白蛋白/尿肌酐正常的2型糖尿病患者(n=10,男4例,女6例);(3)正常对照组:健康体检者(n=9,男3例,女6例).临床指标包括性别、年龄、24 h尿蛋白量、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、血肌酐(Scr)、尿素氮(Urea)、胱抑素C(Cys-C)、血白蛋白(ALB)、尿微量白蛋白(UMA)、三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血尿酸(UA)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿微量白蛋白/尿肌酐(UACR)和利用CKD-EPI公式计算的估算肾小球滤过率(eGFR).实时定量PCR法测定入组人群的血清miR-148b-3p水平,分析血清miR-148b-3p水平与入组人群临床参数的关系.结果 糖尿病肾病组、2型糖尿病组血清miR-148b-3p水平分别是正常对照组的1.82倍和1.73倍(均P＜ 0.05).血清miR-148b-3p水平与HDL-C(r=-0.374,P=0.013)、UMA(r=0.426,P=0.004)、FBG(r=0.330,P=0.046)及TG(r=0.423,P=0.005)有明显相关性.多元线性回归分析显示UMA与血清miR-148b-3p独立相关(β=0.338,P=0.044).血清miR-148b-3p在诊断2型糖尿病及糖尿病肾病的受试者工作特征曲线(ROC)下面积分别为0.835和0.665.结论 2型糖尿病和糖尿病肾病患者血清中miR-148b-3p水平显著升高.UMA与血清miR-148b-3p水平独立相关.血清miR-148b-3p有望作为糖尿病肾病诊断的潜在生物标志物.

目的 探讨铁蓄积小鼠骨量下降与微小RNA(miRNA,miR)差异性表达的关系.方法 12周龄雄性ICR小鼠(n=12)随机分为两组:铁蓄积组(FAC组)及对照组(Con组),分别腹腔注射枸橼酸铁胺(FAC)及等量生理盐水,干预8周后检测血清铁蛋白,微计算机断层扫描技术(Micro-CT)检测小鼠股骨骨量,并分析相关骨结构参数.小鼠全血分离白细胞提取RNA,进行TaqmanmiRNA芯片检测表达谱差异,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测验证差异miRNA.利用Targetscan及miRDB数据库预测差异miRNA的下游靶基因,并对预测的下游靶基因进行生物信息学分析,包括细胞成分、生物过程、分子功能和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析.结果 FAC组干预8周后,血清铁蛋白[(218.2 ±29.5) μg/L]相较于对照组[(30.6±9.9)μg/L]明显升高(P =0.000).股骨三维重建示铁蓄积小鼠骨质结构破坏,骨量、骨小梁厚度(Tb.Th)及骨体积分数(BV/TV)显著下降(P=0.001、0.005、0.021),而骨小梁间隙(Tb.Sp)升高(P=0.000).miRNA芯片结果:初步筛选出20个miRNA表达上调:mmu-miR-29b-3p、mmu-miR-324-3p、mmu-miR-133a-5p、mmu-miR-214-5p、mmu-miR-22-3p、mmu-miR-34a-5p、mmu-miR-31-5p、mmu-miR-143-5p、mmu-miR-423-3p、mmu-miR-223、mmu-miR-155、mmu-miR-106a、mmu-miR-2861、mmu-miR-148a、mmu-miR-96、mmu-miR-449a-5p、mmu-miR-423-Sp、mmu-miR-204-5p、mmu-miR-211、mmu-miR-23b及7个miRNA表达下调:mmu-miR-1 8a-3p、mmu-miR-223-3p、mmu-miR-199a-5p、mmu-miR-196a-5p、mmu-miR-30c-5p、mmu-miR-15b、mmu-miR-130b.其中mmu-miR-423-5p表达差异最为显著,q-PCR验证结果显示miR-423-5p的表达趋势与测序结果一致.Targetscan和miRDB预测并筛选miR-423-5p下游靶基因共91个.生物信息学分析表明miR-423-5p的靶基因在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)、Rap1、Ras及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路上出现聚集.结论 铁蓄积导致的骨量下降可能与miR-423-5p差异性表达相关.

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-148b-3p表达对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响机制.方法 采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测前列腺癌细胞株LNCap、22RV1、DU-145、PC-3和人正常前列腺上皮细胞RWPE-1中miR-148b-3p的表达.采用Lipofectamine 2000分别将miR-148b-3p inhibitor模拟物(实验组)和miR-NC(对照组)转染入PC-3细胞.qPCR检测PC-3细胞中miR-148b-3p的表达变化.CCK8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移能力.采用生物信息学技术和双荧光素酶报告基因检测实验分别预测和验证miR-148b-3p的潜在靶基因.qPCR和Western blot检测PTEN基因及CDK6、Cyclin D2、Claudin-1和Vimentin蛋白表达.结果 前列腺癌细胞株LNCap、22RV1、DU-145、PC-3和人正常前列腺上皮细胞RWPE-1中miR-148b-3p的表达分别为0.18±0.08、0.60±0.10、0.44 ±0.07、0.55 ±0.13和1.02±0.24,前列腺癌细胞中miR-148b-3p表达明显降低(P＜0.01).对照组和实验组PC-3细胞中miR-148b-3p的表达量分别为1.09 ±0.57和72.27±13.78(P ＜0.001,￡=10.320).与对照组相比,细胞增殖能力和迁移能力均降低(P＜0.01).通过生物信息学技术和双荧光素酶报告基因预测并验证了PTEN为miR-148b-3p的潜在靶基因.对照组和实验组PTEN mRNA的表达量分别为1.03 ±0.29和4.10± 1.15(P=0.002,t=5.179).与对照组相比,实验组中PTEN和Claudin-1蛋白表达升高,CDK6、Cyclin D2和Vimentin蛋白表达降低.结论 miR-148b-3p可通过上调PTEN基因的表达抑制PC-3细胞的增殖和迁移,延缓前列腺癌的进展.

目的 检测微小RNA(micro RNA,miR)-148b-3p在人胶质瘤细胞中的表达水平,并探讨其对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响.方法 荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测胶质瘤细胞A172和正常星形胶质细胞HA1800中miR-148b-3p的表达水平.合成miR-148b-3pmimics及阴性对照(NC),用Lipofectamine 2000将miR-148b-3p mimics和NC转染至人胶质瘤细胞A172.分别采用噻唑蓝(MTT)法、Transwell实验、流式细胞术检测转染miR-148b-3p mimics对胶质瘤细胞A172增殖、侵袭及细胞周期的影响.结果 miR-148b-3p在胶质瘤细胞A172中的相对表达量为0.27±0.06,显著低于在正常星形胶质细胞HA1800中的相对表达量1.16±0.21(P＜0.01).MTT检测到miR-148b-3p mimics组A172细胞增殖率在转染后显著降低,转染24 h、48 h及72 h后,细胞增殖率分别下降(12.33±0.46)％、(18.35±0.64)％和(30.54±1.22)％.Transwell实验结果显示miR-148b-3pmimics组A172细胞穿膜细胞数为23.1±1.8,显著低于NC组的87.1±4.6 (P＜0.01),miR-148b-3pmimics能够抑制A172细胞的侵袭能力.流式细胞术结果显示miR-148b-3p mimics显著阻滞A172细胞从G0/G1期向S期转换.结论 miR-148b-3p在胶质瘤细胞中低表达,miR-148b-3p在胶质瘤细胞中发挥抑制肿瘤增殖和侵袭的作用.

目的 探讨微小RNA-148b(miRNA-148b)在高糖诱导肾小管损伤中表达变化及其作用机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2细胞),分为正常糖组、甘露醇高渗对照组、高糖组,培养48 h后,实时定量PCR法检测miRNA-148b表达;采用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)在荧光显微镜下检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western印迹检测HK-2细胞腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1 (AMPKα1)、NOX2、NOX4、Bcl-2、cleaved-caspase3的蛋白表达.结果 培养48 h后,与正常糖组相比,高糖组、高渗组HK-2细胞内miRNA-148b表达上调(P＜0.01),ROS产生增多(P＜0.01),NOX2、NOX4蛋白表达增多(均P＜0.01),AMPKα1蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达减少(均P＜0.01),线粒体凋亡通路相关蛋白cleaved-caspase3蛋白表达增加(P＜0.01),差异均有统计学意义.结论 高糖上调体外培养HK-2细胞miRNA-148b的表达,靶向抑制AMPKα1的表达,促进NOX2、NOX4表达,活性氧产生增多,活化线粒体凋亡途径,激活caspase酶,诱导HK-2细胞凋亡.高糖的肾小管毒性部分是渗透压的影响.miRNA-148b可能参与了糖尿病肾病病理损伤的发生,有望成为糖尿病肾病新的治疗靶点.

目的 检测微小RNA(miRNA)-148a-3p在寻常型银屑病患者外周血CD4+T淋巴细胞中的表达,探讨其在寻常型银屑病发病中的作用.方法 2017年7月至2018年4月在广州市皮肤病防治所收集寻常型银屑病患者20例,健康对照20例.抽取受试者外周静脉血,采用免疫磁珠法分选CD4+T细胞,实时定量PCR检测外周血CD4+T细胞中miRNA-148a-3p的表达;利用生物信息学软件预测miRNA-148a-3p的潜在靶基因,并通过双萤光素酶报告系统进行验证;采用Western印迹法检测受试者CD4+T细胞中miRNA-148a-3p潜在靶基因Bim蛋白表达水平.采用SPSS 20软件,对于符合正态分布的资料,两个独立样本均数比较采用t检验,对双变量资料计算Pearson相关系数;对不符合正态分布的资料,两样本均数比较采用非参数Mann Whitney U检验,对双变量资料计算Spearman相关系数.结果 寻常型银屑病组18例患者CD4+T细胞中miRNA-148a-3p的表达水平为5.61±1.66,健康对照组12例为1.00±0.26,两组比较,U=12,P＜ 0.05.银屑病患者miRNA-148a-3p表达量与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)呈正相关(r=0.93,P＜0.001).生物信息学软件预测B淋巴细胞瘤2相互作用的细胞死亡调节因子(Bim)是miRNA-148a的潜在靶基因之一,并通过双萤荧光素酶报告系统得到验证.患者组(11例)CD4+T细胞Bim表达水平为0.69±0.07,健康对照组8例为0.93±0.06,两组比较,t=4.38,P＜ 0.01.银屑病患者Bim表达量与PASI评分呈负相关(r=-0.774,P＜0.01).结论 miRNA-148a-3p在寻常型银屑病患者外周血CD4+T细胞中过度表达,并可能通过调控Bim蛋白的表达,导致CD4+T细胞异常活化,进而参与银屑病的发生、发展.