目的:探讨lncRNA LINC00958对结直肠癌细胞凋亡及放射敏感性的影响以及其作用机制。方法:将pcDNA、pcDNA-LINC00958、si-NC、si-LINC00958、miR-NC和miR-422a质粒分别转染到SW480细胞中，并分别记为pcDNA组、pcDNA-LINC00958组、si-NC组、si-LINC00958组、miR-NC组和miR-422a组；将anti-miR-NC和anti-miR-422a质粒分别与si-LINC00958共转染到SW480细胞中，并分别记为si-LINC00958＋anti-miR-NC组和si-LINC00958＋anti-miR-422a组；分别将miR-NC和miR-422a分别转染到WT-LINC00958和MUT-LINC00958组细胞中，检测荧光活性；转染均用脂质体法。采用qRT-PCR检测miR-422a和LINC00958的表达；Western blot检测蛋白表达；流式细胞术检测细胞凋亡；细胞克隆形成实验检测对结直肠癌细胞放射敏感性的影响；双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果:结直肠癌细胞中LINC00958高表达，miR-422a低表达；抑制LINC00958表达和过表达miR-422a，可促进结直肠癌细胞凋亡，并增加细胞放射敏感性。LINC00958可靶向调节miR-422a表达；抑制miR-422a，逆转了抑制LINC00958表达对结直肠癌细胞的放射增敏和细胞凋亡促进的作用。结论:抑制LINC00958表达，增加结直肠癌细胞的放射敏感性，并促细胞凋亡，其机制可能与调控miR-422a有关，将为结直肠癌治疗提供新靶点和新思路。

目的 探讨LINC00958在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中的表达和作用.方法 利用TCGA数据库分析LINC00958在HNSCC中的表达和对生存预后的影响;体外培养HNSCC细胞系CAL27和HN6,对其转染对照组和敲低组(si-LINC00958)质粒,采用实时荧光定量PCR实验检测LINC00958表达;CCK-8实验检测细胞增殖能力变化;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力变化;WB实验检测转移相关蛋白E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达情况;应用TargetScan数据库预测LINC00958和miR-877-3p的结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证;分析miR-877-3p对HNSCC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.结果 LINC00958在HNSCC中高表达,并影响患者总体生存率(P＜0.05).和对照组(si-NC)相比,si-LINC00958组细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,E-cadherin表达降低,N-cadherin和Vimentin表达升高(P＜0.05);TargetScan数据库显示miR-877-3p是LINC00958的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证两者存在靶向关系.和对照组(NC)相比,miR-877-3p mimics组细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P＜0.05).结论 LINC00958通过靶向调控miR-877-3p促进HNSCC的增殖、迁移和侵袭.

子宫内膜癌(uterine corpus endometrial carcinoma,UCEC)是危害女性健康的癌症之一,但其发生发展机制尚不完全清楚.基因的异常表达在细胞癌变过程中发挥着重要的作用.本研究利用生物信息学方法对UCEC中异常表达的基因进行网络调控分析,为UCEC的机制研究及预后治疗提供理论依据.首先,利用"limma"包筛选得到差异表达的RNA分子;接着,利用R软件中的"GDCRNA-Tools"包构建lncRNA-miRNA-mRNAceRNA网络;最后,利用DAVID(The Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery)、R软件中的"survival"包、MCODE(Molecular COmplex Detection)插件、StarBase数据库等对ceRNA网络中的RNA分子进行综合分析.结果显示,在UCEC中,我们鉴定了 1 319个mRNA、68个lncRNA及100个miRNA为差异表达的RNA分子.同时,利用这些UCEC中的差异表达RNA分子,成功构建了ceRNA网络,结果表明,HCG11、LINC00958、LINC00667、MAGI2-AS3和AC093010.3可能具有ceRNA的功能.通过进一步对该网络成员的分析,结果发现,该网络中的mRNA分子聚集于内皮细胞增殖、细胞骨架和锌离子结合负调控等生物学过程中.生存分析显示,hsa-miR-449a、LINC00958、PKIA和DPYSL2等19个差异表达的RNA分子与UCEC患者预后显著相关.最后,利用MCODE插件对ceRNA网络进行筛选,共获得一个子网络,其成员分别是LINC00667、hsa-miR-449a、hsa-miR-34a-5p和RECK.该研究结果提示,在UCEC的发生发展中存在lncRNA、miRNA和mRNA的差异表达,并且这些RNA分子之间存在ceRNA网络模式的调控,其中一些关键分子与患者的预后相关,这将为进一步研究与理解UCEC的发病机制及预后提供理论依据.

目的 探究产黑普氏菌(Prevotella melaninogenica,P.m)作用下原代人口腔角质细胞(primary human oral keratinocytes,pHOK)的转录组变化,并在人口腔角质形成细胞(human oral keratinocyte,HOK)细胞系中进行验证.方法 分离培养pHOK,并与P.m共培养4 h与24 h,提取总RNA,构建基因文库,转录组测序,分析差异表达基因,并进行基因本体论(gene ontology,GO)通路分析与京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclo?pedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析,在HOK与P.m共培养模型中采用qRT?PCR及Western Blot对差异基因进行验证.结果 在pHOK与P.m共培养4 h组与对照组间上调表达的差异基因有:淋巴细胞胞浆蛋白1(lymphocyte cytosolic protein 1,LCP1)、角蛋白7(keratin 7,KRT7)、纤毛和鞭毛相关蛋白251(cilia and flagel?la associated protein 251,CFAP251)等,下调表达的差异基因有:含FERM、RhoGEF和Pleckstrin结构域蛋白1(FERM,ARH/RhoGEF and Pleckstrin domain protein 1,FARP1)、WW结构域转录调控因子1(WW domain contain?ing transcription regulator 1,WWTR1)、含Discoidin、CUB和LCCL结构域蛋白2(Discoidin,CUB and LCCL domain?containing protein 2,DCBLD2)等,共1788个差异表达基因;24 h组与对照组间上调表达的差异基因有:LCP1、补体C1s(complement C1s,C1S)、犬尿氨酸酶(kynureninase,KYNU)等,下调表达的差异基因有:磷酸丝氨酸转氨酶?1(phosphoserine aminotransferase 1,PSAT1)、FARP1、FKBP型脯氨酰异构酶10(FKBP prolyl isomerase 10,FKBP10)等,共1832个差异表达基因;其中共同差异表达基因(common differentially expressed genes,cDEGs)有LCP1、KYNU、长链非编码RNA958(long intergenic non?protein coding RNA 958,LINC00958)等1090个,差异均具有统计学意义.通过GO数据库分析,cDEGs主要富集到细菌对脂多糖的反应、对细菌来源分子的反应、细胞的顶端部分等;通过KEGG分析,cDEGs富集到的通路有白介素?17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、Toll样受体通路等;从cDEGs中筛选肌球蛋白1B(myosin1B,MYO1B)在HOK与P.m共培养模型中进行验证,qRT?PCR及Western Blot检测结果表明,MYO1B的表达在对照组和P.m刺激组之间存在显著性差异(P<0.001),且其表达随P.m刺激时间的延长及刺激浓度的增大而递增.结论 P.m对口腔角质细胞的转录组存在重要影响.