甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤，且发病率逐年上升，严重威胁人们的身体健康。自噬是一种程序性死亡方式，能够作为抗肿瘤治疗潜在的作用靶点，发挥重要的调控作用。富含亮氨酸重复序列激酶2（LRRK2）是由PARK8基因编码的一种蛋白激酶。最近研究证实，细胞自噬和甲状腺癌关系密切。文章就LRRK2通过自噬影响甲状腺癌的可能调控机制进行分析，为甲状腺癌的基础研究和临床诊疗提供新思路。

帕金森病是一种常见的中枢神经系统退行性疾病。在共病研究中发现帕金森病与胃肠道疾病密切关联，两者之间的关系可能涉及“肠-脑轴”紊乱。有遗传学证据和流行病学证据将帕金森病与炎性肠病联系起来。文中将从遗传学证据及“肠-脑轴”的相关概念简述帕金森病和炎性肠病之间的关联。

帕金森病（Parkinson′s disease，PD）是一种神经退行性疾病，其患病率仅次于脑血管疾病和老年痴呆 ［1］，给患者自身及家庭照料者带来极大痛苦，目前PD尚不能治愈，药物治疗也以左旋多巴对症治疗为主，但随着用药时间延长，其不良反应及并发症也日趋严重，早期诊断并开展PD神经保护治疗可有望打破这种被动的局面。有动物实验及临床试验研究显示，LRRK2激酶抑制剂 ［2］、葡萄糖脑苷酯酶基因（GBA）调节剂、抗氧化剂辅酶Q10、神经胶质细胞原性神经营养因子（GDNF） ［3］等可通过保护退行性变性的神经细胞以阻止PD的病情进展。但是，实行神经保护治疗的前提是PD患者的神经元变性尚处于初期，当大面积神经元变性时，再开始实施神经保护治疗效果已不佳。研究显示，当帕金森病患者进入中、晚期，出现典型PD运动症状时，黑质多巴胺能神经元变性范围已超50%，脑内纹状体多巴胺含量丧失至少达到80% ［4］。故PD早期诊断、早期开展神经保护治疗至关重要。限于各种因素，专科医生很难做到大范围对PD患者的早期诊断，2020年由中华医学会组织制订的《帕金森病基层诊疗指南（2019年）》 ［5］为基层开展相关诊治与管理提供了参考，发挥全科医生在社区对PD患者早期诊断中的作用，对确诊的PD患者进行有效的社区管理，可大大延缓PD患者病情的进一步发展，减少其并发症的发生。经全国继续医学教育委员会批准，本刊开设继教专栏，每年从第1期至第10期共刊发10篇继教文章，文后附5道单选题，读者阅读后可扫描标签二维码答题，每篇可免费获得Ⅱ类继教学分0.5分，全年最多可获5分。

目的:探讨LRRK2G2019S位点突变对驱铁处理后小胶质细胞活化的影响及其机制。方法:（1）利用人类诱导多能干细胞（IPSC）经造血祖细胞（HPC）分化产生小胶质细胞，免疫荧光染色进行鉴定，利用蛋白纯化技术获取α-突触核蛋白（α-syn）A53T突变蛋白。（2）将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+甲磺酸去铁胺（DFO）组，分别加入磷酸盐缓冲液（PBS）、1 μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白、1 μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白+30 mmol/L DFO作用24 h。采用比色法检测细胞Fe 2+浓度，Western blotting实验检测细胞Rab35蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平，实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测细胞白细胞介素（ IL） -6、肿瘤坏死因子α（ TNF-α）、转化生长因子β（ TGF-β）mRNA的表达。将3组小胶质细胞培养上清液（MCS）转移到SH-SY5Y细胞中，采用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞的凋亡情况。（3）双向DNA测序检测1 μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白处理后小胶质细胞富亮氨酸重复激酶2（ LRRK2）基因的突变。将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+GSK3357679A组，分别加入对应的药物处理24 h（LRRK2抑制剂GSK3357679A浓度为10 nmol/L），采用Western blotting实验检测细胞LRRK2蛋白的表达。将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+GSK3357679A、α-syn+GSK3357679A+DFO组，分别加入对应的药物处理24 h后采用Western blotting实验检测细胞Rab35蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞内ROS水平，RT-PCR检测细胞 IL-6、 TNF-a、 TGF-β mRNA的表达。（4）将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+雷帕霉素（RAPA）组，分别加入对应的药物处理24 h（自噬诱导剂RAPA的浓度为50 nmol/L），采用Western blotting实验检测细胞Rab35、P62、微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞内ROS水平，RT-PCR检测细胞 IL-6、 TNF-α、 TGF-β mRNA的表达。（5）将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+Rab35组，分别加入对应的药物处理24 h（Rab35过表达质粒的浓度为1 μg/mL），采用Western blotting实验检测细胞Rab35、P62、LC3Ⅱ蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞内ROS水平，RT-PCR检测细胞 IL-6、 TNF-α、 TGF-β mRNA的表达。 结果:（1）免疫荧光染色检测显示小胶质细胞神经元核蛋白（NeuN）表达阴性、离子钙结合适配分子1（Iba1）表达阳性、LRRK2呈高表达。成功构建PcDNA3.1-SNCA-A53T表达质粒并纯化获得α-syn A53T突变蛋白。（2）α-syn组细胞Fe 2+浓度高于对照组，α-syn+DFO组细胞Fe 2+浓度低于α-syn组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。对照组、α-syn组、α-syn+DFO组细胞Rab35蛋白、 TGF-β mRNA的表达依次降低， IL-6、 TNF-a mRNA的表达依次增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。对照组、α-syn组、α-syn+DFO组小胶质细胞ROS水平、SH-SY5Y细胞凋亡率均依次增加。（3）双向DNA测序显示α-synA53T突变蛋白刺激后小胶质细胞LRRK2G2019S突变最明显。与对照组比较，α-syn组细胞LRRK2蛋白的表达增高；与α-syn组比较，α-syn+GSK3357679A组细胞LRRK2蛋白的表达降低，差异有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，α-syn组细胞Rab35蛋白、 TGF-β mRNA的表达降低， IL-6、 TNF-a mRNA的表达增高；与α-syn组比较，α-syn+GSK3357679A组细胞Rab35蛋白、 TGF-β mRNA的表达增高， IL-6、 TNF-a mRNA的表达降低；与α-syn+GSK3357679A组比较，α-syn+GSK3357679A+DFO组细胞Rab35蛋白、 TGF-β mRNA的表达降低， IL-6、 TNF-a mRNA的表达增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。α-syn组细胞ROS水平高于对照组，α-syn+GSK3357679A组细胞ROS水平低于α-syn组，α-syn+GSK3357679A+DFO组细胞ROS水平高于α-syn+GSK3357679A组。（4）与对照组比较，α-syn组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、 TGF-β mRNA的表达降低，P62蛋白、IL-6、 TNF-a mRNA的表达升高；与α-syn组比较，α-syn+RAPA组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、 TGF-β mRNA的表达升高，P62蛋白、 IL-6、 TNF-a mRNA的表达降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。α-syn组细胞ROS水平高于对照组和α-syn+RAPA组。（5）与对照组比较，α-syn组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、 TGF-β mRNA的表达降低，P62蛋白、 IL-6、 TNF-a mRNA的表达升高；与α-syn组比较，α-syn+Rab35组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、 TGF-β mRNA的表达升高，P62蛋白、 IL-6、 TNF-a mRNA的表达降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。α-syn组细胞ROS水平高于对照组和α-syn+Rab35组。 结论:在驱铁处理条件下，LRRK2G2019S能通过抑制Rab35等自噬相关蛋白诱发小胶质细胞活化，Rab35有望成为干预神经炎症反应的关键因素。

本刊2024年第3期报道专题为帕金森病及运动障碍疾病,重点内容包括:抗Aβ单克隆抗体临床应用建议(2024版);自主神经损害在中枢性α-突触核蛋白病中的应用价值;前庭诱发肌源性电位在帕金森病中的研究进展;脂质代谢在帕金森病发生及进展中的意义;GBA基因变异在帕金森病中的研究进展;帕金森病构音障碍研究进展;机器人辅助步行训练改善帕金森病步态障碍研究进展;表面肌电在评估帕金森病患者肌强直中的应用;帕金森病患者血清8-羟基脱氧鸟苷酸、丙二醛与认知功能障碍的相关性研究;帕金森病患者黄斑区视网膜浅层血管密度及神经纤维层厚度的观察研究;老年帕金森病患者自主神经功能与认知功能相关分析;GBA基因变异患者帕金森病遗传风险基因分析一例;LRRK2基因R1067Q和GBA基因R202Q双突变致早发型帕金森病一例

患者 男性,42岁.主因左手抖动18个月,左下肢抖动伴运动迟缓6个月,于2023年7月8日入院.患者18个月前(2022年1月)无明显诱因出现左上肢不自主抖动,静止时出现、持物及动作时消失,无动作迟缓、反应变慢等其他伴随症状.于

目的:探讨Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体能否诱导帕金森病(PD)样病理改变.方法:提取野生型(WT)和Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体,使用免疫印迹法检测尿液外泌体标记物TSG101 和CD81,Y216位点磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK-3β-216)表达水平.在C57 小鼠纹状体中分别注射WT小鼠(C57-WT组,n = 8)和Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体(C57-Lrrk2 组,n =8).注射前 3 天,注射后 1、3、6 个月,利用平衡木、挂线、转棒和旷场实验对小鼠进行行为学分析,免疫组化法分析脑组织中磷酸化α-突触核蛋白(pα-syn)的沉积情况,免疫印迹法检测脑组织中pα-syn的表达.结果:Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体TSG101 和CD81 表达水平与WT小鼠比较,差异无统计学意义(P>0.05),pGSK-3β-216 表达水平高于WT小鼠(P<0.001).C57-Lrrk2 组小鼠出现PD样行为学表型(P<0.001),皮层、纹状体和黑质中有pα-syn沉积,脑组织中pα-syn表达水平为(0.44±0.06),C57-WT组则无表达(P<0.001).结论:小鼠纹状体中注射Lrrk2 R1628P转基因小鼠的尿液外泌体能够诱导PD样病理改变.

目的 探索汉族人群LRRK2 基因突变携带者与非携带者患家族性帕金森病(PD)风险差异.方法 收集58 例家族性PD患者为试验组,58 例非PD患者为对照组,磁共振成像(MRI)确认分组结果;抽取外周血,提取基因组DNA作为模板进行聚合酶链反应(PCR)扩增,并以产物进行Sanger测序,分析结果.结果 p.G2385R基因突变型在汉族人群中所占的比例最高,且试验组LRRK2 基因p.G2385R位点突变型频率分布显著高于对照组(P<0.05),试验组p.G2385R突变型频率高出对照组2.21 倍,而其他3 组无显著性差异(P>0.05).结论 4 类突变位点中,p.R1441C、p.G2019S和p.K616R 3 突变位点对家族性PD风险预测是无意义突变;而p.G2385R突变型与家族性PD具有相关性,且该位点具备预测家族性PD患病的潜在价值.

目的:探讨富亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)在巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染中的作用机制.方法:用结核分枝杆菌疫苗株卡介苗(BCG)感染巨噬细胞RAW264.7,菌落形成单位(CFU)计数检测结核分枝杆菌生存率;酶联免疫吸附法测定白细胞介素(IL)-1β、IL-6和干扰素γ(IFN-γ)表达水平;qPCR和Western blot法分别检测相关mRNA和蛋白的表达.结果:BCG感染的巨噬细胞RAW264.7中LRRK2的mRNA和蛋白表达均显著上调,并刺激RAW264.7细胞释放大量细胞因子.此外,沉默LRRK2明显抑制BCG感染巨噬细胞的分枝杆菌存活率;同时,沉默LRRK2降低BCG刺激诱导分泌的促炎细胞因子IL-1β、IL-6和IFN-γ.更为重要的是,LRRK2可能通过正调控NF-κB通路调节BCG诱导的炎症应答进程.结论:LRRK2/NF-κB信号正调控BCG刺激诱导的巨噬细胞炎症应答进程.本研究结果为结核病在基因水平上的诊断和治疗提供了实验依据.

目的 建立帕金森病(PD)相关基因LRRK2疾病易感位点R1628P、G2385R的新检测方法.方法 设计序列特异性引物,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)的方法,对已知基因型的标准品进行分型检验;检测100例未知基因型的PD样品,并用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RLFP)的方法对待检样品基因型进行验证.结果 标准品分型结果完全正确,待检的100例样品分型结果与PCR-RLFP分型结果完全吻合.结论 序列特异性引物联合实时荧光定量PCR可成功实现对LRRK2疾病易感位点R1628P、G2385R的基因型分型.