目的:评价外源性胆绿素对氧糖缺失-复氧复糖损伤PC12细胞Litaf表达的影响。方法:将PC12细胞以1×10 4个/孔的密度接种于96孔细胞培养板培养3 d，采用随机数字表法分为3组( n＝18)：对照组(C组)、氧糖缺失-复氧复糖组(OGD/R组)和胆绿素组(BV组)。C组37 ℃培养箱(95%空气＋5%CO 2)中培养6 h；采用无糖培养基，37 ℃培养箱(95%N 2＋5%CO 2)中培养2 h后将培养基更换为正常培养基，37 ℃培养箱(95%空气＋5%CO 2)继续培养的方法制备PC12细胞氧糖缺失-复氧复糖模型，BV组于复氧复糖即刻加入2 μg/ml胆绿素孵育。于复氧复糖6 h时每组随机取6孔，采用Western blot和RT-PCR法检测Litaf及其mRNA表达，采用ELISA法检测上清液TNF-α浓度。 结果:与C组比较，OGD/R组Litaf及其mRNA表达上调，上清液TNF-α浓度升高( P<0.05)；与OGD/R组比较，BV组Litaf及其mRNA表达下调，上清液TNF-α浓度降低( P<0.05)。 结论:外源性胆绿素减轻PC12细胞氧糖缺失-复氧复糖损伤的机制与抑制Litaf表达上调，减轻炎症反应有关。

Objective:Lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor-α factor(LITAF)protein is a newly discovered inflammatory protein.This study aims to study the role of LITAF in the formation of atherosclerosis.Methods:A total of 10 C57BL/6J mice and 10 C57BL/6J mice with knockout of LITAF gene(C57BL/6J-LITAF-)were divided into two groups:the control group and the LITAF-/-group.The animals were accommodated for 16 weeks and then euthanized with their hearts and aortas isolated thereafter.Next,the roots of the mouse aorta were cryosectioned and stained with Oil Red O staining and immunohistochemical staining(CD68,α-SMA,and Masson),respectively.The area of Oil Red O staining and the proportion of positive expression after immunohistochemical staining were then compared between the control and LITAF-/-groups.At the same time,the blood of mice was collected for the extraction of proteins and RNA.The proteins and RNA were used to detect the expression of major molecules of the NF-kB inflammatory pathway in mice in the control group and the LITAF-/-group by Western blotting and RT-PCR.Results:Oil Red O staining of the aortic root sections of the mice in each group revealed that the area of atherosclerotic plaques in the LITAF-/-group was substantially lower than that in the control group(P＜0.05).Moreover,immunohistochemical staining determined that the expression level of α-SMA and CD68 in the LITAF-/-group was significantly lower than that in the control group,whereas the results were reversed following Masson staining(P＜0.05).The expression levels of P65 and caspase 3 were significantly lower in the LITAF--group than in the control group(P＜0.05),whereas the expression level of IkB was higher in the LITAF-/-group.Conclusion:LITAF might participate in the formation of atherosclerotic plaque through the NF-κB pathway and play a promoting role in the formation of atherosclerosis.

目的:探究甘草酸能否激活体外鸡巨噬细胞并增强其免疫和吞噬杀菌功能.创新点:甘草酸通过核因子 κB(NF-κB)和c-Jun氨基端激酶(JNK)信号通路提高一氧化氮(NO)和过氧化氢(H2O2)产生量,增强了其吞噬和杀菌的功能.方法:以不同浓度的甘草酸(0、12.5、25、50、100、200、400和800μg/ml)处理鸡巨噬细胞系HD11,采用荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和一氧化氮及过氧化氢测定试剂盒评价甘草酸对鸡巨噬细胞活化和免疫的影响,采用流式细胞技术和涂板计数法测定鸡巨噬细胞吞噬和杀菌能力.结论:甘草酸通过NF-κB和JNK信号通路激活鸡巨噬细胞,提高免疫细胞因子等基因的表达水平和NO及H2O2的产生量,从而增强了鸡巨噬细胞吞噬和清除胞内沙门氏菌的能力.

目的 探讨桂皮醛(CA)在棕榈酸(PA)诱导的巨噬细胞(RAW264.7)炎症反应中的分子机制.方法 将RAW264.7随机分为空白对照组(NC)、PA处理组(PA组)和不同浓度CA处理组(10μmol/L CA组、20μmol/L CA组、40μmol/L CA组).MTT法检测不同浓度CA对RAW264.7的影响,确定CA作用时间和浓度.PCR检测各组脂多糖诱导的肿瘤坏死因子(LITAF),肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)mRNA表达,ELISA检测各组TNF-α和IL-6的蛋白水平,Western blot检测各组LITAF蛋白水平.结果 与PA组相比,10μmol/L CA组、20μmol/L CA组和40μmol/L CA组均能显著抑制细胞内TNF-α、IL-6的mRNA和蛋白水平(P<0.05或P<0.01),且随着CA浓度增加,抑制炎症作用越强.与PA组相比,10μmol/L CA组、20μmol/L CA组和40μmol/L CA组LITAF mRNA和蛋白表达降低(P<0.05).结论 CA具有抗炎活性,其机制可能通过抑制LITAF信号通路,降低脂肪酸诱导TNF-α、IL-6表达,调控慢性低度炎症反应,为糖尿病及并发症提供可能的治疗选择.

目的 分析人脑胶质母细胞瘤组织中LITAF基因mRNA表达情况,并通过抑制人脑胶质母细胞瘤U251细胞中LITAF基因表达,观察其对U251细胞增殖、凋亡和放疗敏感度的影响.方法 分析TCGA数据库中人脑胶质母细胞瘤组织中LITAF基因mRNA表达;通过RNAi抑制U251细胞中LITAF基因表达,采用胸腺嘧啶核苷类似物(EDU)检测U251细胞增殖变化,流式细胞仪分析U251细胞凋亡的变化,克隆形成实验和流式细胞分析U251细胞放疗敏感度的变化.结果 TCGA数据库分析结果 显示人脑胶质母细胞瘤组织LITAF表达显著高于正常脑组织;抑制LITAF表达后,U251细胞的增殖和凋亡未见明显变化,但在电离辐射后,LITAF抑制组U251细胞凋亡显著低于对照组,克隆形成显著高于对照组,对放疗敏感度减弱.结论 LITAF基因高表达于人脑胶质母细胞瘤组织,抑制人脑胶质母细胞瘤U251细胞中LITAF基因表达不影响细胞的增殖和凋亡,但显著降低细胞的放疗敏感度.

目的 基于基因数据集和分子对接技术筛选非小细胞肺癌表皮生长因子受体(EGFR)-酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)相关基因,并观察其对EGFR-TKIs药物(阿法替尼、奥斯替尼、厄洛替尼、吉非替尼)敏感性的影响.方法 收集GEO数据库4个基因数据集中非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药细胞系、敏感细胞系的差异表达基因,获得共同差异表达基因.基于CellMiner数据库使用Pearson相关分析法分析共同差异表达基因与EGFR-TKIs半数抑制浓度(IC50)之间的相关性,初步筛选基因—药物对,采用分子对接的方法对基因—药物对进行筛选验证.结果 4个基因数据集中EGFR-TKIs敏感细胞系共同的上调基因42个,共同的下调基因14个.初步筛选出符合标准的基因—药物对共16对,其中包含7个EGFR-TKIs相关基因,分别为脂多糖诱导肿瘤坏死因子(LITAF)、黏蛋白16(MUC16)、酪氨酸激酶受体2(ERBB2)、特异性雄激素调控基因116(C1orf116)、肌盲样蛋白3(MBNL3)、脾酪氨酸激酶(SYK)、四跨膜蛋白基因(TSPAN4),其中LITAF、MUC16、ERBB2、C1orf116、MBNL3、SYK表达与EGFR-TKIs的IC50呈负相关关系(P均<0.05),TSPAN4表达与EGFR-TKIs的IC50呈正相关关系(P均<0.05).分子对接结果显示,16对基因—药物对中仅5对EGFR-TKIs关键成分与对应靶点具有良好的结合活性,分别为ERBB2-阿法替尼、ERBB2-奥斯替尼、ERBB2-厄洛替尼、MUC16-阿法替尼、MUC16-厄洛替尼、MUC16-吉非替尼.结论 非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药/敏感相关的核心基因为MUC16、ERBB2,MUC16过表达能提高阿法替尼、厄洛替尼的敏感性,ERBB2过表达能提高阿法替尼、厄洛替尼、奥斯替尼的敏感性.