目的:总结儿童鼠伤寒沙门菌感染患儿的临床特点和药敏结果，探讨厦门地区鼠伤寒沙门菌感染特征及耐药性，指导临床合理用药。方法:回顾性分析2018至2019年厦门市儿童医院感染科收治的56例经粪培养确诊为鼠伤寒沙门菌感染患儿的临床资料，并对分离培养出的沙门菌进行血清学及药敏鉴定，总结其临床特征及耐药性。结果:56例儿童鼠伤寒沙门菌感染中，2018年32例，2019年24例，年龄23 d～4岁8个月，男32例(57.14%)，女24例(42.86%)，<2岁患儿76.79%(43/56)，其中<1岁占2岁以下患儿的62.79%(27/43)。易感季节多为夏秋季节(5～10月)，患儿临床多表现为发热(89.29%)、腹泻(98.21%)、脓血便(48.21%)，少数可出现呕吐(21.43%)、抽搐(17.86%)表现。鼠伤寒沙门菌对亚胺培南100%敏感，对哌拉西林/他唑巴坦、厄他培南均有98.04%的敏感率，对头孢他啶、氨曲南分别有76.47%和72.00%的敏感率，对妥布霉素100%耐药，对氨苄西林、氨苄西林舒巴坦分别有90.00%和86.00%的耐药率。结论:在夏秋季节，2岁以下儿童易感染鼠伤寒沙门菌，临床多表现为发热、腹泻，可伴有脓血便，鼠伤寒沙门菌易对多种抗生素耐药，临床上需根据药敏结果合理使用抗生素。

艾美耳球虫是鸡球虫病的病原体，采用疫苗防治是当前研究的热点之一。其表面抗原是一种有效的疫苗候选分子，本文对卡介苗（BCG）、乳酸乳球菌（LL）、植物乳杆菌（LP）、鼠伤寒沙门氏菌（St）、枯草芽孢杆菌（Bs）、粪肠球菌（Efs）、大肠埃希菌（Ec）、蓝细菌（CB）、酵母、蜥蜴利什曼原虫（Lt）、鸡痘病毒（FPV）、火鸡疱疹病毒（HVT）、牛痘病毒（VV）和昆虫杆状病毒等载体介导的艾美耳球虫表面抗原疫苗的研制现状做一概述，以期为新型疫苗的开发和应用提供参考依据。

目的:评价医用羧甲基葡糖胺聚糖凝胶的生物安全性。方法:采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验（Ames实验）、体外染色体畸变实验和体外基因突变实验检测医用羧甲基葡糖胺聚糖凝胶的遗传毒性。以日本大耳白兔为受试动物，经耳缘静脉缓缓注入凝胶盐水浸提液（10 ml/kg），测其体温并计算体温升温值。以昆明种小鼠为受试动物，分别经腹腔注射和尾静脉注射凝胶盐水浸提液（50 ml/kg）和氯化钠注射液（对照），观察动物的毒性反应，记录动物的体质量变化。在抗凝兔血中分别加入凝胶盐水浸提液、氯化钠注射液与蒸馏水，检测溶血率。结果:在活化和非活化条件下，凝胶盐水浸提液组和凝胶二甲基亚砜浸提液组4种菌株的回变菌落数均未达到相应阴性对照组的2倍；3个剂量组（凝胶培养基浸提液和1/2、1/4凝胶培养基浸提液组）中国仓鼠肺成纤维细胞的染色体畸变率均为0；3个剂量组小鼠淋巴瘤细胞L5178Y的大集落突变频率、小集落突变频率和总突变频率均无明显增长（均 P>0.05）。注射凝胶盐水浸提液后，3只日本大耳白兔的体温升温值分别为0、0.3和0.2 ℃。注射凝胶盐水浸提液后24、48和72 h，各组小鼠均未见毒性反应症状，且随着注射后时间的延长，样品组和对照组小鼠体质量均有所增长，但差异均无统计学意义（均 P>0.05）。溶血实验结果显示，医用羧甲基葡糖胺聚糖凝胶的溶血率为0.1%。 结论:医用羧甲基葡糖胺聚糖凝胶无诱发细菌突变、体外细胞染色体畸变及细胞基因突变的作用，亦无热原性、急性全身毒性和溶血性，表明其具有良好的生物安全性。

目的 研究D-谷氨酸和D-丙氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌的安全性和免疫原性,探讨D-氨基酸营养缺陷株作为口服减毒活疫苗或载体的可行性.方法 通过聚合酶链式反应(PCR)扩增并测序进行基因型分析,同时利用生长曲线实验、扫描电镜和透射电镜观察菌株生长状态和形态,确认敲除相应基因后D-氨基酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌表型稳定;药敏试验探讨外源补充D-氨基酸后,营养缺陷株对作用于细胞壁的青霉素和氨苄青霉素的敏感性;安全性评价有设置不同免疫剂量攻毒,脏器病理切片,小鼠活体成像,菌株计数和粪便16s rRNA全长测序,以检测D-氨基酸营养缺陷型菌株的定植和侵袭能力;免疫小鼠测抗体滴度检测疫苗引起的免疫应答,免疫后攻毒测定D-氨基酸营养缺陷株的保护效力.结果 D-氨基酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌生长稳定,口服有效减毒,在小鼠体内停留时间缩短,激发的炎症反应较低.尤其是D-谷氨酸营养缺陷株,即使在外源补充D-谷氨酸的条件下耐药性也明显降低,既减少了对小鼠机体的损伤又能激发有效的保护性免疫应答.结论 D-谷氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌有希望作为减毒活疫苗或载体递送抗原,预防病原体感染.

目的 本文研究了巨噬细胞RAW 264.7 感染鼠伤寒沙门氏菌SL1344 后在分子水平上发生的时序变化,旨在全面了解感染期间的动态转录物图谱.方法 使用鼠伤寒沙门氏菌SL1344 感染巨噬细胞RAW 264.7,分别在 0h、8h和 16h收集细胞样本进行转录物组测序(RNA-sequencing,RNA-seq).通过对转录物组数据进行上下游分析,包括差异基因表达、聚类和功能注释,再结合分子网络研究,来阐明巨噬细胞信号通路的变化.结果 感染的巨噬细胞呈现出明显的形态和转录水平变化.差异基因分析确定了显著的上调和下调模式.聚类揭示了六个基因簇,涉及多种信号通路,包括免疫反应、膜转运和脂质代谢等.结论 巨噬细胞对沙门氏菌感染表现出动态响应,具有明显的时序基因表达模式.免疫反应、膜转运和脂质代谢通路的协同激活暗示了巨噬细胞对外源感染的多层次细胞适应性,为了解巨噬细胞响应沙门氏菌感染的分子机制提供了重要见解.

目的 明确浙江省市售猪肉中非伤寒沙门菌(non-typhoidal Salmonella,NTS)的污染特征、影响因素及血清型分布.方法 2017-2021年在浙江省流通和餐饮环节采集猪肉样品999份,按《GB 4789.4-2016食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》开展猪肉中NTS的定性检测和血清学分型,采用MPN计数法进行NTS定量检测.结果 浙江省市售猪肉中NTS检出率为39.94％(339/999),9.32％(26/279)的样品中NTS污染水平＞55 MPN/g,不同猪肉类型、采样场所和采样季节采集的猪肉NTS检出率差异有统计学意义(P＜0.05).猪肉类型、采样季节和采样场所是影响NTS检出的重要因素,夏季是影响阳性猪肉样本中NTS污染水平的显著因素(P＜0.05).445株NTS分离株共分为48种血清型,主要为里森沙门菌(19.33％)、伦敦沙门菌(14.38％)、德尔卑沙门菌(13.48％)和鼠伤寒沙门菌(9.66％).结论 2017-2021年浙江省市售猪肉NTS检出率高,污染程度受多方面因素影响,血清型多样.

目的:探究口腔黏膜树突状细胞(dendritic cells,DCs)肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)表达对于应用黏膜疫苗佐剂反应的影响.方法:使用CD11ccre-GFP;LKB1fl/fl条件性敲除(conditional knockout,cKO)小鼠,同窝LKB1n/fl小鼠作为野生型(wild type,WT)对照组.首先选6～8周龄cKO与WT小鼠各12只,流式细胞术分选小鼠口腔黏膜DCs,进行转录组高通量测序;其次使用cKO与WT小鼠各16只,建立小鼠黏膜免疫模型,在第0、2和4周用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)模式抗原颊黏膜下注射免疫(cKO-OVA,WT-OVA),鼠伤寒沙门氏菌来源的 FimH(FimH-S.typhimurium,FimH-ST)佐剂联合 OVA 模式抗原颊黏膜下注射免疫(cKO-OVA+FimH-ST,WT-OVA+FimH-ST).在接种后第3周收集小鼠血清和唾液,通过免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immu-nosorbent assay,ELISA)法检测血清中OVA特异性IgG1和IgG2b、唾液中OVA特异性IgA抗体水平;在接种后第6周,使用流式细胞术检测小鼠颊黏膜和包括下颌下、颈部淋巴结的口腔引流淋巴结(draining lymph node,dLN)中各免疫细胞数目和比例.结果:cKO组口腔黏膜DCs的上调基因在基因本体论(gene ontology,GO)数据库富集到先天免疫反应、B细胞介导的免疫反应;基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)中富集到Toll样受体信号通路和mTOR信号通路.WT-OVA+FimH-ST组相对WT-OVA组血清OVA特异性IgG1和IgG2b、唾液中OVA特异性IgA抗体水平升高;黏膜局部免疫B细胞与浆细胞数目与比例升高.cKO-OVA组血清IgG1和IgG2b、唾液中IgA抗体水平较WT-OVA组升高;dLN中滤泡辅助T细胞(follicular helper T,Tfh)及B细胞比例升高(P＜0.05).但cKO-OVA+FimH-ST组相对cKO-OVA组抗体分泌水平无差异,仅表现为dLN中Tfh和B细胞增多.结论:LKB1通过DCs调控先天免疫反应和B细胞功能;FimH-ST经小鼠口腔黏膜下注射具有佐剂效应;DCs激活口腔黏膜免疫反应依赖LKB1,DCs上LKB1缺陷导致FimH-ST佐剂效应丧失.

目的:探究TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)调控核苷结合寡聚化结构域样受体4(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor 4,NLRC4)炎症小体激活的作用及其机制.方法:在鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.T)感染的永生化骨髓巨噬细胞(immortalized bone marrow derived macrophage,IBMDM)中,Western blot检测 NLRC4 炎症小体激活及其下游分子半胱天冬蛋白酶 1(cysteine aspartic acid specific protease 1,Caspase-1)和 Gasdermin D(GSDMD)的剪切情况;乳酸脱氢酶检测试剂盒检测细胞培养基上清中乳酸脱氢酶的含量;蛋白质免疫共沉淀实验确定TBK1与NLRC4的相互作用及其具体结构域;细胞免疫荧光实验确定TBK1与NLRC4的空间定位;GST pull-down实验确定TBK1与NLRC4是否存在直接相互作用;凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)寡聚化检测实验验证NLRC4炎症小体组装.构建S.T感染C57BL/6小鼠动物模型,观察小鼠生存情况.涂板计数腹腔灌洗液和肺的细菌负荷量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测腹腔灌洗液及血清中的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和白细胞介素(interleukin,IL)-1β的含量;流式细胞术检测腹腔灌洗液中的中性粒细胞比例.结果:在S.T感染的IBMDM中,抑制TBK1可减弱NLRC4炎症小体激活,NLRC4磷酸化水平下降,Caspase-1与GSDMD的剪切减少;TBK1与NLRC4存在相互作用,TBK1的N端与NLRC4的NACHT结构域相互作用;TBK1与NLRC4存在空间上的共定位;TBK1可以磷酸化NLRC4的Ser533位点.S.T动物模型实验显示,抑制TBK1活性可以显著提高小鼠的生存率;减低小鼠腹腔灌洗液和肺中的细菌负荷量;降低血清以及腹腔灌洗液中的IL-1β、TNF-α的表达水平;减少腹腔灌洗液中的中性粒细胞比例.结论:TBK1与NLRC4相互作用,磷酸化NLRC4 Ser533位点,促进NLRC4炎症小体的激活,为治疗相关疾病提供理论依据和新的潜在靶点.

结核分枝杆菌(MTB)引起的结核病是一种慢性呼吸道传染病,研制载体介导的ESAT-6疫苗是当前的热点之一,ESAT-6抗原是一种公认的疫苗分子.本研究概述了卡介苗、耻垢分支杆菌、母牛分支杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、格式链球菌、单核细胞增生性李斯特菌、根癌农杆菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、毕赤酵母、流感病毒、高度减毒的牛痘病毒、腺病毒血清型5、慢病毒和昆虫杆状病毒等载体介导的结核分枝杆菌ESAT-6疫苗的研制现状.

目的 分析2020-2021年云南省食源性沙门氏菌感染腹泻的流行病学特征,为食源性疾病的防治提供理论依据.方法 收集2020年1月至2021年12月云南省医疗机构上报的食源性疾病个案病例监测数据,应用描述性流行病学方法对病例个案的患者性别、年龄、发病时间、可疑食品暴露史、食品加工及包装方式、进食场所、临床症状、初步诊断、血清型分型等指标进行统计分析.结果 本研究共收集9060例食源性疾病腹泻病例,检出沙门氏菌感染者452例.阳性检出率4.99％,男性、女性检出率分别为5.57％、4.33％;以0～5岁年龄组检出率最高(7.84％).不同月份沙门氏菌检出率差异有统计学意义(χ2=127.004,P<0.05),以7月检出率最高(8.67％);可疑食品暴露史以婴幼儿食品为主,病例检出率最高为7.95％;不同食品加工及包装方式以散装食品为主,病例检出率最高(6.04％),其次为家庭自制食品(5.71％).家庭是沙门氏菌感染的主要场所,病例检出率为5.53％.沙门氏菌感染者大便性状以水样便为主(61.50％),初步诊断急性胃肠炎占比最多(46.02％),其次为感染性腹泻(37.83％).沙门氏菌血清型共检出34个,以鼠伤寒沙门氏菌(18.36％)、鼠伤寒沙门氏菌变种(13.72％)等为主.结论 云南省沙门氏菌感染引起的食源性疾病较为普遍,应加强监测,对及时发现食品安全隐患和减少食源性疾病的发生有重要意义,也将为食品安全监管提供科学依据.