目的:探讨zeste同源物2的增强子（EZH2）和人类mutL同源物1（hMLH1）在神经胶质瘤中的作用。方法:设计合成靶向抑制EZH2和hMLH1和hMLH1特异的小干扰RNA（siRNA），转染U-87细胞，分为对照组和敲低组，通过5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）增殖实验分析两组的增殖能力。采用 t检验进行组间比较。 结果:神经胶质瘤组织和细胞中EZH2（7.97±0.14、6.00±0.18、6.24±0.11， t＝83.80、47.18、83.55）和hMLH1（6.15±0.08、3.93±0.17、4.25±0.12， t＝103.700、29.800、45.510）的mRNA水平明显高于对照组（ P<0.01）。U-87胶质瘤细胞的siRNA转染导致细胞增殖能力降低，对照组（68.2±14.8），EZH2敲低组（33.5±13.1），hMLH1敲低组（43.1±10.0）。敲低EZH2和hMLH1表达后增强转染细胞凋亡（ t＝3.041、2.934， P<0.05）。沉默后磷酸化丝裂原细胞外激酶1（p-MEK1）/丝裂原细胞外激酶1（MEK1）和磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK1）/细胞外信号调节激酶（ERK1）的比例下调，p-MEK（ t＝5.590、6.548， P<0.05）和p-ERK1的水平降低（ t＝10.730、9.260， P<0.05）。与单独转染EZH2-siRNA和hMLH1-siRNA比较，EZH2-siRNA和hMLH1-siRNA共转染的U-87细胞中，抑制作用增强（ t＝6.425、7.273， P<0.05）。 结论:对EZH2和hMLH1的抑制可能通过激活MEK/ERK途径影响神经胶质瘤的生长和细胞死亡。

激素受体(HR)阳性人表皮生长因子受体2(HER-2)阳性乳腺癌侵袭性强，易发生耐药而复发转移，目前临床多采用抗HER-2单抗联合内分泌治疗。但即使两药联合治疗，患者的预后仍不理想，这可能是HER-2下游的PI3K/Akt/mTOR信号通路激活所导致，因此HER-2受体胞外、胞内及其下游PI3K/Akt/mTOR信号通路多重抑制，及HER-2和HR的双重阻断，更有利于HR阳性HER-2阳性乳腺癌的治疗。小分子酪氨酸激酶抑制剂奈拉替尼不仅能抑制HER-1、HER-2和HER-4受体磷酸化，还可以阻断PI3K/Akt和Ras/Raf/MEK/ERK途径的下游信号传导。在强化辅助治疗研究中已证实，奈拉替尼可改善HER-2阳性乳腺癌患者的预后，尤其HR阳性HER-2阳性患者获益更加显著。在晚期乳腺癌的治疗中奈拉替尼也获得了肯定疗效，但尚缺乏奈拉替尼治疗HR阳性HER-2阳性晚期乳腺癌的相关数据。与奈拉替尼类似的小分子HER抑制剂拉帕替尼，在HR阳性HER-2阳性晚期乳腺癌患者的治疗中显示出一定疗效。鉴于奈拉替尼较拉帕替尼更优的作用机制，其有望为乳腺癌的治疗提供更多思路和选择。

目的 探讨四妙勇安汤对尿酸钠诱导的痛风性关节炎大鼠的作用机制.方法 运用网络药理学方法预测四妙勇安汤干预痛风性关节炎的靶点,构建"成分-靶点-通路"关系网络.将48只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、秋水仙碱(阳性对照,0.000 3 g·kg-1)组及四妙勇安汤低、中、高剂量(6.075、12.150、24.300 g·kg-1)组,每组8只,预防性ig给药,每天1次,持续7d,ig第3天,除了对照组,构建痛风性关节炎大鼠模型.测量并计算大鼠踝关节肿胀度,HE染色检测大鼠踝关节滑膜组织病理学改变;ELISA试剂盒法检测各组大鼠血清中炎症因子白细胞介素(IL)-17A、IL-17F、环氧化酶-2(COX-2)、趋化因子配体2(CXCL2)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF)-α的水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测关节组织中MEK1/2-ErK1/2途径基因mRNA和蛋白表达水平.结果 网络药理学结果显示,AKT1、ALB、TNF、HSP90AA1、EGFR、SRC、VEGFA、CCND1、HRAS、MAPK3、MAP2K1 可能是四妙勇安汤治疗痛风性关节炎的关键靶点;β-谷甾醇、山柰酚、槲皮素、木犀草素可能为治疗痛风性关节炎中较重要的有效成分;生物过程(BP)中富集基因主要与炎症反应、对细胞迁移的积极调节、对外部刺激反应的负调节、小分子代谢过程的调控等过程密切相关,细胞组分(CC)分析包括分泌颗粒、细胞质囊泡、内质网、高尔基、血小板颗粒等,分子功能(MF)中富集基因靠前的有转录因子结合、蛋白激酶活性、激酶调节活性等;KEGG代谢通路主要富集于MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、IL-17信号通路、Ras信号通路等.与模型组比较,四妙勇安汤高剂量可明显改善踝关节肿胀度(P＜0.05);中、高剂量可缓解痛风性关节炎大鼠滑膜组织炎性浸润;中、高剂量组炎症因子水平显著降低(P＜0.05、0.01);中、高剂量组MAPK3、MAP2K1的基因mRNA表达量显著下调(P＜0.01);高剂量组ErK1/2、MEK1/2蛋白的表达量显著下调(P＜0.01).结论 四妙勇安汤对痛风性关节炎大鼠具有治疗作用,其可能是通过抑制MAPK信号通路关键靶点ErK1/2、MEK1/2的表达,抑制下游炎症因子IL-17、TNF-α、IL-1β表达,减轻炎性反应,从而发挥对痛风性关节炎的治疗作用.

卵巢癌是女性常见肿瘤之一,约占女性全身恶性肿瘤的4％,但其致死率却占各类妇科肿瘤的首位.卵巢癌的常用治疗方案是手术联合化疗.化疗耐药是导致卵巢癌复发和预后差的主要原因之一.MAPK通路一般又被称为RAS-RAF-MEK-ERK信号级联,该途径中的各个组分都与癌症的发生发展密切相关.ERK1/2是该通路中不可或缺的关键位点.随着研究的不断深入,ERK1/2被发现作为一个"摆渡者"参与调控卵巢癌的发生发展及耐药.本文介绍了ERK1/2信号通路的激活机制和作用途径及其与卵巢癌的关系,强调了 ERK1/2抑制剂可能是一种新的治疗策略,在改善卵巢癌患者不良预后方面具有潜在的优势.

目的:揭示常春藤皂苷元(HD)对IL-6的调控作用及其抑制肝癌细胞增殖的免疫机制.方法:①生物信息学分析受IL-6调控的免疫途径:利用GEO2R工具分析基因芯片数据集GSE14632中的差异表达基因,Immport数据库下载免疫基因,筛选二者交集基因,KOBAS数据库对交集基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.②实验验证HD对IL-6的调控作用:Western blot检测HD(0、30、60、120 μg/ml)干预下HepG2细胞内IL-6蛋白的相对表达量;构建H22荷瘤小鼠模型,荷瘤小鼠被随机分为5个实验组,每组12只:对照组、阳性环磷酰胺(CTX)25 mg/kg组、常春藤皂苷元低剂量组(100 mg/kg)、中剂量组(200 mg/kg)和高剂量组(400 mg/kg),小鼠腹腔注射给药,连续给药14 d,第15天所有动物称重后处死并取肿瘤组织,Western blot检测各实验组肿瘤组织中IL-6、KRAS、RAF1、MEK2、p-ERK1/2、p-JNK、AKT、NF-κB p50、PD-L1和p-STAT3蛋白相对表达.结果:生物信息学分析发现MAPK信号通路、PD-L1的表达和PD-1检查点通路受到IL-6信号途径的调控;体外实验结果表明,与对照组相比,IL-6在HD(30、60、120 μg/ml)干预组蛋白相对表达呈现下降趋势(P<0.01);体内实验结果表明,与对照组相比,IL-6、KRAS、RAF1、MEK2、p-ERK1/2、p-JNK、AKT、NF-κB p50、PD-L1和p-STAT3在HD(100、200、400 mg/kg)干预组蛋白相对表达总体呈现下降趋势(P<0.01).结论:HD可能通过抑制IL-6蛋白表达,进而调控肝癌细胞内PD-1/PD-L1和MAPK免疫信号通路活性,导致肝癌的适应性免疫反应受到损伤,从而抑制癌细胞的增殖.

旁粒及其组分在肿瘤发生和诸多正常的生物学功能中都扮演了重要的角色,但对于其具体的作用机制仍然缺乏了解.在人和小鼠的胚胎干细胞中,旁粒的关键结构组分长链非编码RNANjAT1_v2并不表达,只表达其短变体NEAT1_v1和3种旁粒蛋白组分——NONO、SFPQ和PSPCl,提示这些组分可能具有独立于经典旁粒结构之外的功能.蓝斐课题组依托国家基金委“细胞编程和重编程的表观遗传机制”重大研究计划,在此方向上开展了系统性的研究,并获得了进展:首次发现旁粒蛋白组分Nono和Erk相互作用,共同结合在小鼠胚胎干细胞的双价结构域基因(bivalent genes)的启动子区,并参与Mek/Erk信号途径调控靶基因的待激活状态;研究还发现,Nono缺失的mESC具有更强的自我更新能力,对于胚胎干细胞的体外培养有重要的参考价值.对本领域的最新进展以及复旦大学蓝斐课题组的相关原创性工作进行综述.

阴茎勃起功能障碍(ED)与平滑肌细胞的收缩与舒张失衡相关.ED发生过程中,除舒张功能减弱外,另一重要原因为平滑肌细胞的收缩功能上调.其中,收缩相关性信号通路、胞膜离子通道、平滑肌细胞表型都参与了平滑肌细胞收缩的调节,其功能变化可引起多种平滑肌细胞相关疾病.收缩相关性信号通路Raf/MEK/ERK1/2与RhoA/Rock通路之间存在交互作用,抑制RhoA蛋白表达或降低Rock2磷酸化水平都可能成为ED的治疗途径.电压依赖性钙通道(VDCCs)、瞬时受体电位(TRP)通道功能失调是高血压、糖尿病ED发病的主要原因之一,多种病理因素上调CaV1.2、TRPC1及TRPC4表达可使平滑肌收缩功能加强,进而导致ED的发生;阴茎海绵体表型转化也与ED的发生发展有关.本文就近年平滑肌收缩机制与ED关系研究的进展加以综述.

目的:研究新辅助化疗不同给药途径对宫颈癌组织中癌细胞生长信号通路功能的影响.方法:选择2008年7月～2016年7月期间在扶风县人民医院接受新辅助化疗的宫颈癌患者作为研究对象,随机分为介入组和静脉组,分别接受新辅助介入动脉化疗以及新辅助静脉化疗.手术切除后,测定宫颈癌病灶内PI3K/AKT/mTOR、Wnt/β-catenin、MEK/ERK信号通路分子的含量.结果:介入组患者宫颈癌病灶内p-PI3K、p-AKT、mTOR、MMP2、VEGFβ-catenin、CyclinD1、Twist、Slug、Snail、MEK1、MEK2、ERK1/2、Bcl-2的蛋白含量均显著低于静脉组,E-cadherin、Bax的蛋白含量均显著高于静脉组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:新辅助介入动脉化疗能够较新辅助静脉化疗更为有效地抑制宫颈癌病灶内PI3K/AKT/mTOR、Wnt/β-catenin、MEK/ERK信号通路所介导的癌细胞生长.

ER-α36由ER-α66衍生而来,它的5′末端和3′末端没有转录活性区AF-1和AF-2,仅保留了ER-α66的DNA结合区、核定位信号区和配体依赖区.ER-α66定位于细胞核,而ER-α36主要锚定于细胞膜和细胞质,故ER-α36属于膜型雌激素受体.与ER-α66相比,ER-α36具有更强大的配体依赖活性,可对内、外源性雌激素迅速做出反应,在数秒至数分钟内快速激活信号通路,并与各类信号因子(如Ca2+、PKA、PKC、IGF)协同,参与细胞内的信号级联反应,介导了雌激素的非基因组信号途径.ER-α36与胞内多种信号通路存在着交叉对话现象,并参与介导细胞内的快速信号途径,如腺苷酸环化酶途径(AC)、蛋白激酶C途径(PKC)、G蛋白偶联途径、磷脂酰三磷酸肌醇激酶PI3K/AKT信号途径、丝裂原活化蛋白激酶MAPK/ERK信号途径、Ca2+通路和Src激酶激活的信号途径.上述信号途径可归纳为3种主要的信号通路:Ras-Raf-MEK-MAPK通路、Src-PI3K-AKt通路、PLC-PKC-cAMP-PKA.

目的 探究心可舒片干预动脉粥样硬化(AS)作用的分子机制,对于心可舒片二次开发和临床应用提供参考.方法 用整合药理学平台对心可舒片干预AS的关键靶点和通路进行预测,探究其干预AS的分子机制.结果 通过建立心可舒片“中药-成分-靶点-通路”网络进行预测和分析,得到相关有效成分80个,确定了B4GALT4、B4GALT2、PRKCD、GCK、GNB1等关键靶点,明确了内分泌系统、甲状腺激素、神经系统、雌性激素和趋化因子等富集通路与其抗AS作用相关.结论 心可舒片通过对PI3K/Akt/eNOS和Raf/MEK/ERK途径的共同调节,保护血管内皮细胞,从而达到干预AS的效果.